不同提取濃縮干燥工藝對穿心蓮內酯類成分的影響

范文成，王 岳，韓月芝，王 健，張國良

（石家莊以嶺藥業股份有限公司，河北 石家莊 050035）

穿心蓮為爵床科植物Andrographis paniculata（Burm．F．）Nees，原產于印度，我國廣東、福建地區也廣泛栽培，是南方地區民間治療多種感染性疾病及蛇毒咬傷的常用草藥，同時也是穿心蓮片、消炎利膽片、復方苦木消炎片的主要原料。穿心蓮藥材在受熱或貯藏過程中其內酯類成分會發生變化，穿心蓮提取浸膏在干燥過程中，其穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯也會發生轉化[1－2]。對于提取、濃縮過程及不同pH的提取溶劑對穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的影響，尚未見詳細的報道。本研究中，通過對同一批藥材采用不同提取、濃縮溫度、時間及不同pH的提取溶劑，旨在找出穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的變化規律，為優選穿心蓮藥材的提取、濃縮工藝提供指導和參考。

1 儀器與材料

Agilent 1100型系列高效液相色譜儀，Agilent自動進樣器，Agilent DAD檢測器。穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號分別為110797－200307，110854－200306）；穿心蓮藥材（安徽井泉飲片公司，由以嶺藥業高級鑒別師王振江鑒定為穿心蓮）；甲醇（色譜純，Fisher公司），水為高純水，提取用乙醇為分析純。

2 方法與結果

2．1 含量測定

2．1．1 溶液制備

取樣品適量（約相當于藥材2 g），按2010年版《中國藥典（一部）》穿心蓮片含量測定方法制備供試品溶液[3]。精密稱取穿心蓮內酯 21．20 mg，脫水穿心蓮內酯 20．40 mg，置 10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1．0 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液（穿心蓮內酯質量濃度 0．212 g／L，脫水穿心蓮內酯濃度0．204 g ／L）。

2．1．2 色譜條件與系統適用性試驗

流動相：甲醇 －水（60∶40）；色譜柱：ODS C18柱（250 mm ×4．6 mm，10 μm），檢測波長：穿心蓮內酯為 225 nm，脫水穿心蓮內酯為254 nm。理論板數按穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯峰計算均應不低于2 000。本次分析所使用的穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯混合對照品的質量濃度分別為0．103 5 mg／mL和0．102 4 mg／mL。穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯對照品溶液、穿心蓮提取物溶液、陰性對照品溶液色譜圖，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2．1．3 方法學考察

線性關系考察：分別精密吸取對照品溶液 2．0，5．0，10．0，15．0，20．0 μL，注入高效液相色譜儀中測定。以進樣量（μg）為橫坐標、峰面積為縱坐標，進行線性回歸，得回歸曲線，穿心蓮內酯為Y＝2 017 340X－74 407．5，（r＝0．999 6）；脫水穿心蓮內酯為Y＝1 331 742X＋15 216．46（r＝0．999 8）。結果表明，穿心蓮內酯進樣量在0．424～4．24μg范圍內與峰面積呈良好線性關系，脫水穿心蓮內酯進樣量在0．408～4．08μg范圍內與峰面積呈良好線性關系。

精密度試驗：取穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯對照品溶液各10 μL，重復進樣6次，按擬訂色譜條件測定。結果的RSD分別為0．8%和 1．1% （n＝6），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：分別取同一批的穿心蓮提取物5份，依法制備供試品溶液并測定。結果穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯含量的RSD分別為1．3%和2．1% （n＝5），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的穿心蓮提取物9份（穿心蓮內酯含量 22．54 mg ／g，脫水穿心蓮內酯 29．32 mg ／g），每份約0．2 g，精密稱定，分別精密加入 2．0，2．5，3．0 mL 穿心蓮內酯對照品溶液（質量濃度2．12 g／L）和脫水穿心蓮內酯對照品溶液（質量濃度2．04 g／L），依法制備供試品溶液并按擬訂色譜條件測定。結果見表1。

表1 穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內蓮加樣回收試驗結果（n＝9）

2．2 提取方法考察

提取溫度和時間：取同一批藥材100 g，混合均勻，按2010年版《中國藥典（一部）》穿心蓮片提取工藝提取，溫度分別設定60，70，80℃，提取時間分別為1，2，3 h，按擬訂方法測定提取液中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量，計算轉移率。結果見表2。可見，60℃提取效果明顯不如70℃和80℃，分析是溫度低造成提取率低；無論哪個溫度提取，脫水穿心蓮內酯提取2 h效果比提取1 h和3 h好；70℃提取3 h與2 h，穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯含量變化不大，80℃提取3 h與提取2 h比較，二者含量均降低，可能是由于提取的溫度高、時間長，穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯被部分破壞。取，溫度設定70℃，以1 mol／L的鹽酸或氫氧化鈉溶液調節提取溶劑的 pH 分別為 3，6，9，提取時間分別為 1，2，3 h，取提取液按擬訂方法測定提取液中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量。結果見表4?？梢?，pH為3和6的溶劑提取時，穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯含量轉移率無明顯變化；pH為9提取時，穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯含量轉移率明顯低于pH為3和6的提取轉移率；pH為9提取時，隨提取時間的延長，穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯含量轉移率均降低，可能是堿性條件下，長提取時間，對穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯有破壞。

表3 不同濃縮溫度穿心蓮中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯轉移率（%）

表2 不同提取溫度和時間穿心蓮中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯轉移率（%）

表4 不同pH下穿心蓮中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯轉移率（%）

濃縮溫度和時間：取同一批藥材100 g，按70℃提取2 h的條件提取，提取液進行減壓濃縮，溫度分別設定40，50，60℃，按上述方法測定提取液中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量。結果見表3。可見，不同濃縮溫度對脫水穿心蓮內酯含量影響不大，考慮60℃減壓濃縮，沸騰劇烈，易跑藥液，選擇55℃減壓濃縮。pH：取同一批藥材 100 g，混合均勻，按2010年版《中國藥典（一部 ）》穿心蓮片提取工藝提

干燥溫度：取同一批藥材100 g，按70℃提取2 h的條件提取，提取液55℃濃縮，干燥溫度分別設定50，70，90℃，干燥時間為4 h（均已干燥）。按擬訂方法測定提取液中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量。結果見表5?？梢?，干燥前后穿心蓮內酯含量降低，脫水穿心蓮內酯含量升高；干燥溫度越高，穿心蓮內酯轉移率下降越明顯，脫水穿心蓮內酯轉移率升高越明顯，穿心蓮總內酯的轉移率隨溫度變化不大，但比干燥前降低約10%。

3 討論

提取過程中，提取溫度過低，提取不完全；溫度過高，時間過長，會破壞穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯，故溫度宜控制在70℃；在40～60℃范圍內進行減壓濃縮，穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯含量轉移率無明顯變化；堿性條件影響穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯含量的轉移率，而且隨提取時間延長，二者的轉移率均下降，因此堿性條件不利于兩成分的提出，且對兩種成分有破壞。干燥對兩種成分轉移率影響顯著，溫度越高，穿心蓮內酯轉移率下降越明顯，脫水穿心蓮內酯升高越明顯，說明干燥過程中，穿心蓮內酯向脫水穿心蓮內酯轉化。同時對調整濃縮液pH進行了干燥試驗，結果表明調整濃縮液pH至4～5再干燥，能有效防止穿心蓮內酯向脫水穿心蓮內酯轉化，同時對兩種內酯總和的轉移率無明顯影響。通過上述試驗，確定了穿心蓮最佳提取濃縮干燥的工藝為，提取溫度70℃，提取液55℃減壓濃縮，調濃縮液pH至4～5，然后70℃干燥。

表5 不同干燥溫度穿心蓮中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯轉移率（%）

[1]楊東升，陳松光，歐陽惠芳，等．穿心蓮流膏中穿心蓮內酯類成分在烘干過程中的變化[J]．中成藥，2003，25（11）：869．

[2]顏玉貞，謝培山．穿心蓮質量控制的再評價[J]．中藥新藥與臨床藥理，1998，9（4）：204 － 206．

[3]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典（一部）[M]．北京∶中國醫藥科技出版社，2010：964．