高效液相色譜法測定參松養心膠囊中馬錢苷的含量

王岳 劉敏彥 蘇平菊

高效液相色譜法測定參松養心膠囊中馬錢苷的含量

王岳 劉敏彥 蘇平菊

目的 建立采用高效液相色譜法測定參松養心膠囊中馬錢苷含量的方法。方法 采用C18色譜柱, 甲醇-乙腈-0.05%磷酸(5:9:86)為流動相, 檢測波長238 nm。結果 馬錢苷在37.824～756.48 ng濃度范圍內呈良好的線性關系。馬錢苷平均回收率為100.7%(n=9), RSD=1.47%。結論 該法操作簡便準確、專屬性強, 可作為參松養心膠囊的質量控制方法。

高效液相色譜法；參松養心膠囊；馬錢苷；含量測定

參松養心膠囊由人參、麥冬、山茱萸、丹參等12味藥組成。益氣養陰, 活血通絡, 清心安神。本品種收載于中國藥典2010年版第二增補本, 馬錢苷為處方中山茱萸的主要成分之一, 因此采用高效液相色譜法對本品馬錢苷的含量測定進行了研究。

1 儀器與試藥

1.1儀器 高效液相色譜儀(Waters 2695)。

1.2試藥 馬錢苷對照品(購自中國藥品生物制品檢定所,批號：111640-200503), 乙腈為色譜純, 其它試驗所用試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1色譜條件 色譜柱：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相甲醇-乙腈-0.05%磷酸(5:9:86)；流速1 ml/min；檢測波長238 nm；理論塔板數按馬錢苷峰計算應不低于3000。

2.2供試品溶液制備 取供試品(批號100301), 傾出內容物, 研細, 約1 g, 精密稱定, 精密加入甲醇25 ml, 稱定重量,超聲提取30 min, 放冷, 再稱定重量, 用甲醇補足減失的重量, 搖勻, 濾過, 精密吸取續濾液10 ml, 加在中性氧化鋁柱(100～200目, 7 g, 內徑1.5 cm, 干法裝柱)上, 用50%甲醇60 ml洗脫, 收集流出液和洗脫液, 蒸干, 殘渣加50%甲醇溶解,并定容至25 ml, 搖勻, 即得。

2.3對照品溶液的制備 精密稱取馬錢苷對照品11.82 mg,置50 ml量瓶中, 加甲醇溶解, 并定容至刻度, 搖勻, 即得。再精密吸取上述對照品溶液2 ml, 置25 ml量瓶中, 加50%甲醇稀釋至刻度, 搖勻, 即得。濃度：18.912 μg/ml。

2.4陰性試驗 按處方比例稱取除山茱萸外的其它方中藥材, 按制備工藝制得陰性樣品, 按供試品溶液的方法進行處理, 得陰性供試品溶液。分別吸取陰性供試品溶液、對照品溶液及供試品溶液, 按照選定測定條件進行檢測, 結果表明：在馬錢苷相應的保留時間, 陰性樣品無相應波峰出現, 陰性樣品不干擾測定。

2.5線性范圍考察 精密吸取濃度為18.912 μg/ml的對照品溶液2 μl、5 μl、10 μl、20 μl、40 μl, 注入液相色譜儀, 測定峰面積見表1。以峰面積積分值為縱坐標, 進樣量為橫坐標, 繪制標準曲線。結果表明：馬錢苷濃度在37.824～756.48 ng范圍內呈良好線性關系, 回歸方程為：y=1627.7326x=5711.6561, r=1.0000。

2.6進樣精密度考察 吸取對照品溶液, 連續進樣5次, 馬錢苷對照品5次測定的RSD為0.28%, 說明儀器性能良好。

2.7供試品溶液穩定性考察 精密吸取供試品溶液, 每隔一定時間進樣, 考察了16 h內的穩定性, 結果見表2。

從以上結果可見, 供試品峰面積 RSD值2.11%,表明在測定的16 h內, 供試品穩定。

2.8重復性試驗 取同一批供試品(批號100301), 按高、中、低劑量取樣, 每個劑量取3份, 按供試品含量測定項下方法,進行提取, 制備, 測定結果, 馬錢苷的平均含量1.01 mg/g, RSD為1.37%。表明方法重現性良好。

2.9回收率試驗 采用加樣回收試驗, 取同一批供試品(批號100301)9份, 分別加入低、中、高3個濃度的馬錢苷對照品溶液, 按供試品含量測定項下方法, 進行提取, 制備, 測定,計算回收率。馬錢苷的平均回收率為100.70%(n=9), RSD為1.47%, 結果見表3。

2.10樣品含量測定 按上述方法測定3批樣品含量, 結果見表4。

表1線性考察結果

表2穩定性實驗結果

表3回收率試驗結果

表4樣品含量測定結果

3 討論

本實驗對含量測定中供試品溶液的制備方法進行了研究。

3.1提取溶媒選擇實驗結果表明, 50%甲醇、75%甲醇和甲醇對馬錢苷的提取含量影響不大, 但50%甲醇過濾較困難,以甲醇為提取溶媒時雜質峰較75%甲醇小, 為更好地保護色譜柱, 因此選擇甲醇為提取溶媒。

3.2超聲提取時間考察實驗結果表明, 超聲提取15 min、 30 min和45 min對馬錢苷的含量影響不大, 但為保證充分提取, 選定超聲提取時間為30 min。

3.3中性氧化鋁用量考察實驗結果表明, 中性氧化鋁用量4～8 g對馬錢苷的含量影響不大, 但隨著中性氧化鋁用量的增加, 雜質峰在減小, 7 g和8 g用量的雜質峰基本相當, 因此選擇氧化鋁用量為7 g。

3.4洗脫溶媒用量考察結果表明, 采用50 ml 50%甲醇基本洗脫完全, 考慮到樣品批間差異, 為將馬錢苷充分洗脫完全,洗脫溶媒用量選定為60 ml。

［1］ 中華人民共和國國家藥典委員會.中國藥典.2010年版.一部, 2010:597-598.

［2］ 中華人民共和國國家藥典委員會.中國藥典.2010年版.第二增補本, 2013:51-53.

050035 石家莊以嶺藥業股份有限公司