宮頸鱗癌survivin和caspase-3的表達及其相關性

朱紅玲，張 華，徐衛鴻

宮頸鱗癌survivin和caspase-3的表達及其相關性

朱紅玲1，張 華2，徐衛鴻2

目的 研究survivin蛋白和caspase-3蛋白在宮頸鱗癌組織中的表達及其相關性。方法 收集宮頸鱗癌標本50例，宮頸上皮內瘤樣病變(cervical intraepithelial neoplasia ，CIN)20例，正常宮頸標本14例。應用免疫組化法檢測survivin蛋白和caspase-3蛋白在上述三種宮頸組織中的表達。結果 survivin 、caspase-3蛋白在正常宮頸組織、CIN、宮頸鱗癌三種不同宮頸組織的表達中有明顯差異(P<0.05)。survivin在臨床分期晚，病理分級高的宮頸鱗癌中表達增強；但caspase-3的表達越弱(P<0.05) 。survivin、caspase-3蛋白在宮頸鱗癌中的表達呈負相關。結論 (1)survivin的陽性表達可作為宮頸惡變的預測指標；(2)survivin強陽性表達結合caspase-3的弱表達，對預測宮頸鱗癌的不良預后有一定的意義

Survivin 蛋白； caspase-3蛋白；宮頸癌；免疫組化；細胞凋亡

survivin是凋亡抑制蛋白家族(IAPs)新近發現的一個成員， 1997年耶魯大學的Altieri等[1]發現，在多種惡性腫瘤組織中survivin呈異常高表達，并可通過直接與Caspase家族，特別是Caspase-3和-7結合發揮其抗凋亡的作用。本研究采用免疫組織化學法(S-P法)檢測survivin蛋白、 caspase-3蛋白在3種不同宮頸組織中的表達并結合臨床病理特征進行分析，旨在探討survivin在宮頸鱗癌發生發展中的作用，以及與caspase-3表達的相關性及其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 材料 收集我院婦科2009-01至2012-05手術切除后未經放、化療的宮頸鱗癌石蠟標本(宮頸鱗癌組)50例(除外Ⅱb期術前行1～2次新輔助化療)，年齡為28～69歲，平均50.2歲，病理分級:G1級15例，G2級14例，G321例。臨床分期Ⅰ期23例，Ⅱa期11例，Ⅱb期16例(患者年齡輕保留卵巢，術前行新輔助化療1～2次)。腫瘤生長類型：菜花型23例，結節型22例，潰瘍型5例。CIN(CIN組)20例(來源于宮頸活檢或LEEP手術標本)，年齡29～57歲，平均年齡45.6歲，其中，CIN Ⅰ 6例，CIN Ⅱ 9例，CIN Ⅲ 5例。正常宮頸標本(正常組)14例，年齡31～66歲，平均51.4歲。病理診斷符合《婦產科病理學》的宮頸癌的分級診斷標準。臨床分期均按2009年修訂的國際婦產科聯合會(FIGO)的診斷標準。

1.2 試劑和方法 采用survivin兔抗人多克隆抗體0.1 ml濃縮液(RB-1629)(Neomarker公司產品)，caspase-3兔抗人多克隆抗體0.1 ml濃縮液(RB-1197)(Neomarker公司產品)，SP試劑盒(天津津脈生物技術開發公司)。采用免疫組織化學鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶染色法(SP免疫組化法)對3組標本進行處理。

1.3 結果判定 采用Sinicrope[2]改良法記錄各級切片中染色細胞的百分數，染色細胞計數所占比例至少在5個400倍視野，分為5級。0分:染色細胞<5%； 1分:染色細胞5%～25%；2分:染色細胞25%～50%；3分:染色細胞50%～75%；4分:染色細胞>75%。染色強度分為4級。0分:不顯色；1分:淺黃色；2分:棕黃色；3分:深棕色。每份切片記分=染色細胞數分數×染色強度分數。所得分數0和1分為陰性結果，2和3分為弱陽性(+)，4分為中度陽性(++)，>5分為強陽性(+++)。

1.4 統計學處理 采用SPSS11. 0統計軟件包處理，各項指標間差別檢驗均應用χ2檢驗，組間相關性采用spearman相關分析。 以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

表1 survivin蛋白和caspase-3蛋白在宮頸 疾病中的陽性表達 (n;%)

注：與CIN組比較，①P<0.05；與宮頸鱗癌組比較，②P<0.05

2.2 survivin、caspase-3蛋白表達與宮頸鱗癌患者臨床病理特征的關系 survivin蛋白在菜花型、結節型、潰瘍型等腫瘤生長類型中陽性表達率差異無統計學意義；survivin蛋白在臨床分期Ⅰ期、Ⅱa期、Ⅱb期三期中陽性表達率差異有統計學意義(P<0.05)；survivin蛋白在病理分級G3級中陽性表達率高于G1+G2宮頸鱗癌(P<0.05)。見表2。

caspase-3蛋白在菜花型、結節型、潰瘍型等腫瘤生長類型中陽性表達率差異無統計學意義；在臨床分期Ⅰ期、Ⅱa期、Ⅱb期三期中陽性表達率差異也無統計學意義；但caspase-3蛋白在病理分級G1+G2和G3級中陽性表達率差異有統計學意義(P<0.05)，結果見表2。

表2 survivin蛋白和caspase-3蛋白表達與宮頸鱗癌患者 臨床病理特征的關系

注：與Ⅱb期比較，①P<0.05；與Ⅱa期比較，②P<0.05

2.3 survivin蛋白和caspase-3蛋白在宮頸鱗癌組織中表達的相關性 宮頸鱗癌組織中survivin蛋白表達與caspase-3蛋白表達有顯著相關性，21例caspase-3蛋白陽性表達標本中有10例survivin蛋白呈陽性，占47.6%；29例caspase-3蛋白陰性表達標本中24例survivin蛋白呈陽性表達，占82.8%。經相關分析，兩種蛋白表達之間成負相關(Spearman相關系數r=-0.372，P<0.05)。

3 討 論

Michael等[3]發現，survivin在正常宮頸上皮組織、CIN中均有胞核染色，在不成熟的鱗狀化生及鱗狀上皮癌中則可見到胞漿染色，因而認為survivin在正常的宮頸上皮分化中起著重要作用。Kim等[4]運用反轉錄PCR (RT-PCR)技術，發現survivin的表達陽性率隨著宮頸腫瘤的進展，從低度鱗狀上皮內瘤樣病變(LSIL)、高度鱗狀上皮內瘤樣病變(HSIL)及SCC中逐漸升高。本研究有同樣的結果，survivin的表達與宮頸CIN和鱗狀細胞癌有著密切的關系，臨床上可以檢測宮頸CIN組織的survivin蛋白表達，對預測宮頸CIN轉變為宮頸鱗癌提供一定的參考依據。

于娟等[5]發現，在宮頸癌中survivin的表達與宮頸癌的組織學分級、浸潤深度、臨床分期呈顯著相關，與年齡、分化程度及組織類型均無關。朱華等[6]采用原位雜交法同樣顯示survivin mRNA的陽性率在宮頸癌的組織分化程度中,低分化組的表達高于高、中分化組,ⅡB～Ⅲ期顯著高于I～ⅡA期;在淋巴結轉移組中高于無淋巴結轉移組。盧洪勝等[7]的研究結果也支持Survivin表達在子宮頸癌的FIGO分期、間質浸潤深度及淋巴結是否轉移中表達的差異有統計學意義。本研究也有類似的發現，筆者推測survivin參與宮頸鱗癌的發生、發展，與其預后不良密切相關，是一個具有潛在價值的腫瘤標志物，survivin蛋白的高表達預示腫瘤有較高的侵襲性。

本研究探討了survivin與caspase-3在正常宮頸、CIN和宮頸鱗癌中表達及其相關性。survivin隨腫瘤的發生發展表達增強，caspase-3隨腫瘤的發生發展表達降低，并且survivin與caspase-3在宮頸鱗癌中的表達呈負相關性。這與劉秀蘭等[8]的研究結果相似，提示survivin在宮頸惡性腫瘤中表達可能抑制caspase-3的表達，說明在宮頸鱗癌惡性轉化過程中抗凋亡蛋白作用增強，抑制了凋亡蛋白的作用，使細胞凋亡，對腫瘤的形成和發展起一定作用。這為腫瘤靶向治療提供了一個新的思路。那么survivin和caspase-3在CIN各級之間的表達有無差異，以及在巨塊型宮頸鱗癌中表達情況，筆者將增加標本量，進一步深入研究，為將來發現宮頸癌早期診斷指標和預后監測指標提供理論依據。

宮頸鱗癌病因復雜，涉及HPV病毒、癌基因、宿主細胞抑癌基因等多個基因、多條通路的多步驟事件。近年來，癌基因治療成為研究熱點之一[9]，如李元宏等[10]一系列研究證實了survivin促進凋亡、抑制腫瘤的功能，為survivin基因用于宮頸鱗癌基因治療提供了依據。survivin作為一種新的具有腫瘤特異性的凋亡抑制基因，其抑制細胞凋亡的功能在腫瘤發病機制中的作用及作為腫瘤診斷的標記物已經備受矚目。survivin將可能成為腫瘤基因治療的理想靶基因，為腫瘤的治療提供新的途徑。

[1] Verdecta M A, Huang H,Dutil E,etal.Structuce of the human anti-apoptotic protein Survivin reveals a dimeric arrangement[J]. Nat Struct Biol,2000,7(7):602-608.

[2] S inicrope F A, Ruan S B, Cleapy K R,etal.bcl-2oncorprotein expression during colorectal tumorigenesis[J]. Cancer Res, 1995,55:237.

[3] Michael F , Elka A , David O ,etal. Immunohistochemical Localization of Survivin in Benign Cervical Mucosa, Cervical Dysplasia, and InvasiveSquamous Cell Carcinoma[J].Am J Clin Pathol, 2002,11 7(5):738-744.

[4] KimM H S，Shirakik K，Park S H. Expression of survivin in invasive squamous cell carcinoma of uterine cervix[J]. Anticancer Res,2002，22(2A): 805- 808.

[5] 于 娟，王德華. Survivin與PTEN在宮頸癌中的表達及相關性研究[J].天津醫科大學學報，2011,22(2)：35-36.

[6] 朱 華，施錚錚，楊孝軍，等.Survivin、Bcl-2、HPV 16/18在宮頸上皮內瘤變及宮頸癌中的表達及臨床意義[J]. 實用婦產科雜志，2010,26(1)：22-24.

[7] 盧洪勝，甘梅富，張 艷，等.宮頸癌前病變及宮頸癌組織Survivin和p16INK4A及p53表達的研究[J].中華腫瘤防治雜志，2009,16(11)：16-18.

[8] 劉秀蘭，閆曉紅，楊宏新，等. survivin、caspase-3在宮頸非典型鱗狀細胞中表達及意義[J].內蒙古醫學院學報，2010,32(1)：9-27.

[9] 霍巧玲，李 穎，李玲霞. 宮頸癌治療研究進展[J].武警醫學，2013,24(2)：171-173.

[10] 李元宏，常冰梅. RNA干擾survivin基因對宮頸癌細胞中survivin蛋白表達及caspase-3酶活性的影響[J]. 中國醫藥導報，2012,9(22)：22-43.

(2013-10-09收稿 2013-12-20修回)

(責任編輯 郭 青)

Expression and correlation of survivin and caspase-3 in cervical squamous cell carcinoma

ZHU Hongling1, ZHANG Hua2, and XU Weihong2.

1.Department of Obstretrics and Gynecology, Shanghai Municipal Corps Hospital of Chinese People’s Armed Police Forces, Shanghai 201103，China; 2.Section of Economic Management, The General Hospital of Chinese People’s Armed Police Forces, Beijing 100039, China

Objective To study the expression of a novel inhibitor gene of apoptosis survivin in cervical carcinoma and its association with the expression of caspase-3 protein. Methods Cervical squamous cell carcinoma specimens of 50 cases, CIN (cervical intraepithelial neoplasia) in 20 cases, and normal cervical specimens of 14 cases were collected. Immunohistochemistry was used to detect the expression of survivin protein and caspase-3 protein in the above three cervical tissues. Results 1.The positive expression rates of survivin and caspase-3 were significantly different in different cervical tissues(P<0.05). 2.The positive expression of survivin was associated with high tumor grade and clinical stage (P<0.05). The positive expression of caspase-3 was only associated with tumor grade (P<0.05).3.The expression of survivin was negatively correlated to the expression of caspase-3 protein in cervix cancer. (P<0.05). Conclusions 1. The positive expression of survivin as a predictor of cervical carcinogenesis. 2. Strong posivive expression of survivin expression combined with weak expression of caspase-3, predicts poor prognosis of cervical squamous cell carcinoma.

survivin protein ;caspase-3 protein ;cervical carcinoma; immunohistochemistry; cell apoptosis

朱紅玲，碩士，主治醫師，E-mail：zhuhongling517@sina.com

1.201103,武警上海總隊醫院12病區婦科；2.100039北京，武警總醫院醫療科

徐衛鴻，E-mail: xuweihong1226@sina.com

R737.33