肺小細胞癌和鱗狀細胞癌GFI-1、Fli-1的表達與預后相關性分析

李學玲梁冰鋒董西林

肺小細胞癌和鱗狀細胞癌GFI-1、Fli-1的表達與預后相關性分析

李學玲1梁冰鋒2董西林3

目的 通過檢測肺小細胞癌（SCLC）和肺鱗狀細胞癌（SCC）中GFI-1和Fli-1的表達，分析兩種肺癌與常見臨床病理因素之間的相關性，為臨床早期診斷、治療效果的觀察和預后判斷提供依據。方法 應用免疫組織化學染色技術檢測原發性肺癌術后存檔蠟塊134例（SCLC 36例、SCC 98例）中GFI-1、Fli-1蛋白表達情況；并對患者進行隨訪，生存時間從手術日期至隨訪日期止。結果 36例SCLC患者中淋巴結轉移27例，淋巴結轉移率為75.0%；98例SCC患者中淋巴結轉移48例，淋巴結轉移率為49.0%，其差異有統計學意義（P＜0.01）。結合隨訪資料，134例患者生存時間為7d～89個月，≥3年的患者為64例，3年生存率為47.8%。經免疫組織化學染色后，GFI-1、Fli-1的陽性表達率SCLC高于SCC，差異有統計學意義（P＜0.05）。GFI-1、Fli-1表達與臨床病理指標比較證實， SCCⅡ、Ⅲ級間的GFI-1、Fli-1的陽性表達率Ⅱ、Ⅲ級差異有統計學意義（P＜0.05）。結論 GFI-1、Fli-1在SCLC中的表達具有一致性，并且高于SCC；提示二者可考慮為監測肺小細胞癌病情發生、發展的標志物。GFI-1、Fli-1的陽性表達在淋巴結轉移患者明顯高于無淋巴結轉移患者，并且組織分化愈差，臨床分期愈高，表達愈高，提示二者與肺癌的預后相關，高表達者預后較差。

小細胞肺癌；肺鱗狀細胞癌；GFI-1；Fli-1；預后

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 一般資料 標本選自西安交通大學第二附屬醫院病理科2005—2009年間原發性肺癌術后存檔蠟塊134例，其中男116例，女18例；年齡32～75歲，平均年齡56.2歲。根據病理組織學類型分為（SCLC） 36例和（SCC）98例，均有完整的病例資料，SCC按照《外科病理學》進行病理學分級[6]：Ⅱ級24例，Ⅲ級74例；SCLC的診斷均為術后病理證實。

1.1.2 主要試劑 免疫組織化學試劑：GFI-1、Fli-1單克隆抗體（鼠抗人），為美國Bioworld公司公司產品；S-P試劑盒及DAB顯色劑均購自福建邁新技術有限公司。

1.2 免疫組學染色 組織切片4μm厚，經APES處理，使用免疫組織化學（SP）法，即鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶法。石蠟切片盛有抗原修復液的玻璃燒杯中，浸沒組織，放入微波爐中高火3min，低火10min，取出冷卻30min后，磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗3次，每次10m in，進行抗原修復后常規脫蠟至水；3%H2O2去離子水（37℃）孵育10min，以消除過氧化物酶的活性。PBS沖洗，5min×3次，滴加封閉用正常山羊血清，室溫孵育15min，傾去，勿洗；滴加GFI-1、Fli-1一抗工作液的濃度為1:50純水稀釋，4℃低溫過夜。PBS沖洗，5min×3次；滴加二抗工作液室溫孵育15min；PBS沖洗，5min×3次；滴加試劑辣根酶過氧化物酶標記的鏈酶卵白素工作液（S-A/HRP），室溫孵育15min；PBS沖洗，5min ×3次；DAB顯色3min；純凈水成分沖洗；Harris蘇木素液浸泡30s復染；自來水充分淋洗；梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片；光鏡下觀察。

1.3 判斷標準 GFI-1、Fli-1結果評價：免疫組織化學以胞質或胞核內出現背景清晰的黃色或棕黃色顆粒為陽性。每張切片在陽性染色較高區域隨機選定10個視野（400×）。按著色強度計分：無色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分。按著色細胞百分比計分：著色細胞＜10%為0分、11%～40%為1分、41%～70%為2分、＞70%為3分。將強度計分與染色細胞百分比計分相乘。0分為陰性（-）；1～3為弱陽性（+）；≥4為強陽性（++）。

1.4 統計學處理 有關數據分別應用SPSS 13.0軟件包進行χ2檢驗及Spearman等級相關統計學處理，P＜0.05有統計學意義；Kaplan-Meier壽命法進行生存率分析。

2 結果

2.1 臨床資料 36例SCLC患者中淋巴結轉移27例，淋巴結轉移率為75.0%；98例SCC患者中淋巴結轉移48例，淋巴結轉移率為49.0%，其差異有統計學意義（P＜0.01）。結合隨訪資料，134例患者生存時間從7d～89個月，≥3年的患者為64例，3年生存率為47.8%。

2.2 免疫組織化學檢測結果

2.2.1 肺癌組織中GFI-1、Fli-1蛋白表達情況

表1 GFI-1、Fli-1在SCLC、SCC中的表達情況

由表1可知，經免疫組織化學染色后，36例SCLC組織中GFI-1、Fli-1的陽性表達率分別為94.4%（34/36）、97.2%（35/36）；98例SCC組織中GFI-1、Fli-1的陽性表達率分別為78.6%（77/98）、75.5%（74/98）。經χ2檢驗證實，GFI-1、Fli-1的陽性表達率SCLC高于SCC，有統計學意義（P＜0.05）。經Spearman等級相關分析證實，GFI-1與Fli-1在兩種肺癌中的表達呈正相關（r=0.918，P=0.001）。

2.2.2 GFI-1、Fli-1表達與臨床病理指標比較 在SCCⅡ、Ⅲ級中GFI-1的陽性表達率為62.5%（15/24）、79.7%（59/74），Fli-1的陽性表達率為66.7%（16/24）、82.4%（61/74），經卡方檢驗證實SCCⅡ、Ⅲ級間的GFI-1、Fli-1的陽性表達率Ⅱ、Ⅲ級差異有統計學意義（P＜0.05）。

3 討論

肺癌是臨床上較為常見的惡性腫瘤，對于廣大人民群眾的身體健康造成了嚴重的危害，環境因素、遺傳因素均與肺癌的發生存在一定關系，這些因素使患者的抗腫瘤能力大幅度降低，也會使人體免疫功能出現嚴重的失衡，血循環中細胞因子和免疫球蛋白異常上升，而淋巴細胞免疫功能大幅度下降，進而造成人體的免疫處于紊亂和低下的狀態。目前，大多數學者傾向于SCLC可能起源于支氣管黏膜上皮，可向神經內分泌分化的干細胞，它是各類型肺癌的前驅細胞，在各種致癌因素作用下，全能干細胞發生惡化，轉化為小細胞癌、鱗狀細胞癌或腺癌。SCLC可在早期發生擴散和轉移，在近20年內其生存率的增長也不明顯，因此，有必要探討與SCLC神經內分泌有關的基因或癌蛋白，以及用血管內皮生長因子（VEGF）受體及其配體間的旁分泌或自分泌信號傳導途徑假說來解釋SCLC生長失控的原因，為臨床的診斷、治療和判斷預后提供有力的佐證。

GFI-1作為一個DNA結合轉錄抑制蛋白，而Fli-1是核轉錄因子，能夠與多種基因的啟動子或增強子結合而發揮調節轉錄的功能，還可與其他蛋白質相互作用進而調節轉錄，在血管形成中起著重要作用。研究表明Fli-1在小細胞肺癌中的表達水平與非小細胞肺癌相比有明顯差異，并且已經證明Fli-1在血管形成及腫瘤侵襲性轉移中發揮了重要作用。因此本研究通過進一步研討GFI-1、Fli-1二者與肺癌臨床病理因素的相關性，為臨床早期診斷治療和判斷預后提供依據。

本研究中，GFI-1、Fli-1在SCLC中的表達具有一致性，并且高于SCC，提示二者可考慮為監測肺小細胞癌病情發展的標志物。GFI-1、Fli-1的陽性表達在淋巴結轉移患者明顯高于無淋巴結轉移患者，并且組織分化愈差，臨床分期高，表達愈高，提示二者與肺癌的預后相關，高表達者預后較差。

目前，關于肺小細胞癌和鱗癌中GFI-1與Fli-1聯合檢測的研究報道很少，根據本次研究結果，認為二者在肺癌的發生、發展中所起的作用具有一致性，聯合檢測可作為評價兩種類型肺腫瘤的惡性度和預后判斷的血液指標。二者表達同時升高時，提示預后更差，當然GFI-1與Fli-1基因與肺癌發病的具體機制尚需進一步研究。

[1] 孫燕,肺癌,羅慰慈.現代呼吸病學[M].北京:人民軍醫出版社,1997:789-825.

[2] Sattler M.Salgia R.Molecular and cellular biology of small cell lung cancer[J].PubMed Commons,2003,30(1):57-71.

[3] Jouko islauri,Jorma matlila.Primary undifferentiated small cell carcinoma of the esophagus:clinicopathological and flow cytometric evaluation of eight cases[J].J Surg Onco,1991(46):174-177.

[4] 聶蓉,朱潤慶.磷酸化ERK1/2與Cyclin D1、VEGF在非小細胞肺癌中表達的關系[J].武漢大學學報(醫學版),2005,26(5):277-79.

[5] 壽延寧,平野隆.VEGF、MMP-2在非小細胞肺癌中的表達及臨床病理學因素和預后的關系[J].中日友好醫院學報,2012,18(5): 275-277.

[6] 鄧仲瑞,陳學詩,彭杰青,等.外科病理學[M].2版.武漢:湖北科學技術出版社,1999:394-3955.

R734.2

A

1673-5846(2014)06-0173-02肺癌是當今世界最常見的惡性腫瘤之一，其死亡率居惡性腫瘤之首[1]。肺癌的病理組織學類型分為兩大類，即小細胞肺癌（SCLC）和非小細胞肺癌（NSCLC）[2]，其中小細胞肺癌是惡性度最高的肺癌類型，具有轉移早、易復發、放化療敏感及預后差的特點。多數具有神經內分泌特性，可引起類癌綜合征，少數保持原始狀況[3]，盡管目前肺癌的治療水平有較大程度地提高，但在近20年內小細胞肺癌生存率的增長仍不明顯[4]。因此，有必要探討與SCLC神經內分泌有關的GFI-1基因和與侵襲轉移有關的Fli-1基因來解釋SCLC侵襲性轉移的原因[5]，為臨床的早期診斷、治療效果的觀察和預后判斷提供一定的依據。

1西安交通大學醫學院，陜西西安 710000

2河北女子職業技術學院，河北石家莊 050081

3西安交通大學第二附屬醫院 陜西西安 710000

董西林，E-mail：dxl1103@sina.com