垂體腺瘤中FRα的表達與臨床意義

垂體腺瘤中FRα的表達與臨床意義

李 炎，劉小海，趙大春，姚 勇，王任直

目的 檢測垂體腺瘤中葉酸受體α(FRα)的表達情況，探討FRα與垂體腺瘤相關臨床指標的關系。方法 運用冰凍切片免疫組化方法，檢測124例垂體腺瘤中FRα的表達情況，分析其與患者性別、年齡、腫瘤徑線、腫瘤侵襲性的關系。結果 FRα在NF腺瘤中的陽性率為73.8%(31/42)，在PRL腺瘤中的陽性率為9.7%(3/31)，在GH腺瘤中的陽性率為6.7%(2/30)，在ACTH腺瘤中的陽性率為9.5%(2/21)，FRα在NF腺瘤中的表達水平明顯高于在其他病理類型垂體腺瘤中的表達(P<0.05)。在垂體NF腺瘤中，FRα的表達與腫瘤的侵襲性有關(P<0.05)，與性別、年齡、腫瘤大小無明顯關系(P>0.05)。在其他三種垂體腺瘤中，FRα與上述指標無明顯關系。結論 FRα在垂體NF腺瘤中高表達，在其他病理類型的垂體腺瘤中低表達；FRα與垂體NF腺瘤的侵襲性相關。

垂體；腺瘤；葉酸受體α；臨床意義；相關性

垂體腺瘤屬于良性腫瘤，約占顱內腫瘤的10%～15%，僅次于膠質瘤和腦膜瘤而居于第3位。垂體腺瘤大致分為4種病理類型：無功能垂體腺瘤(NFPA)、泌乳素瘤(PRL)、生長激素腺瘤(GH)和促腎上腺皮質激素腺瘤(ACTH)。葉酸受體α(FRα)是一種膜蛋白，能夠以非常高的親和力結合葉酸，并將其轉運進胞內。Evans等[1]指出，FRα在不同病理類型的垂體腺瘤中的表達有差異。本實驗研究FRα在垂體腺瘤標本中的表達情況，并分析其與垂體腺瘤相關臨床指標的關系。

1 材料與方法

1.1 材料 收集2010年11月～2012年11月本院神經外科的垂體腺瘤手術標本124例，置于液氮中凍存。其中男性60例，女性64例；發病年齡18～71歲(平均42.8歲)。全部患者均行術前鞍區MRI檢查，均可見明確的鞍區占位，平均徑線為3～56 mm(均值為21.6 mm)。根據患者術前內分泌激素水平及手術標本病理檢查結果，將這124例分為臨床功能性垂體腺瘤(PRL腺瘤31例，GH腺瘤30例，ACTH腺瘤21例)及臨床無功能性垂體腺瘤(NF腺瘤42例)。以改良Hardy分級[2]為標準，并結合術中所見和病理學表現，將患者分為侵襲組與非侵襲組(NF腺瘤中29例為侵襲組，13例為非侵襲組)。

1.2 主要試劑 鼠抗人FRα單克隆IgG抗體(LS-C23683)購自美國Lifespan公司；二步法免疫組化檢測試劑(PV-6000)和DAB試劑盒(濃縮型)購自北京中杉金橋公司。

1.3 方法 將液氮凍存垂體腺瘤標本取出，冰凍切片，每張厚度6 μm，置于防脫處理的載玻片上。95%乙醇溶液中固定10 min，蒸餾水及PBS常規沖洗。無水乙醇+3%過氧化氫(按9∶1)滴片5 min，封閉內源性過氧化物酶。100%、90%、80%乙醇梯度依次滴片，PBS沖洗。用去離子水稀釋一抗(1∶300)，滴加一抗30～50 μl，置于37 ℃恒溫箱孵育1 h。PBS沖洗后滴加通用型IgG二抗，在室溫下孵育30 min，PBS沖洗。DAB顯色，蘇木素復染，常規透明后樹脂封固。以PBS代替一抗做空白對照。

1.4 結果判斷 每張切片隨機選取5個高倍鏡視野(×400)，由兩名病理科醫生雙盲計數，對每張切片的陽性細胞率及陽性細胞的染色強度進行分級計分。陽性細胞百分率計分標準：≤5%計0分，6%～25%計1分，26%～50%計2分，>50%計3分；染色強度計分標準：無染色計0分，弱(淺黃)計1分，中(棕黃)計2分，強(黃褐)計3分。兩項相加之和：0分為陰性(-)，1～2分為弱陽性(+)，3～4分為中度陽性(++)，5～6分為強陽性(+++)。

1.5 統計學方法 應用SPSS 17.0軟件進行數據分析，組間率的比較采用χ2檢驗；各指標之間的相關性采用Fisher確切概率法，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 FRα在不同病理類型垂體腺瘤中的表達 FRα蛋白染色區域位于細胞漿內，胞膜上也可見棕黃色深染(圖1)。FRα在NF腺瘤中的陽性率為73.8%(31/42)，在PRL腺瘤中的陽性率為9.7%(3/31)，在GH腺瘤中的陽性率為6.7%(2/30)，在ACTH腺瘤中的陽性率為9.5%(2/21)。FRα在NF腺瘤中的表達水平明顯高于其在其他病理類型垂體腺瘤中的表達(P<0.05，表1)。

2.2 FRα表達與NF腺瘤臨床病理特征的關系 在垂體NF腺瘤中，FRα的表達與腫瘤的侵襲性有關(P<0.01)，與性別、年齡、腫瘤徑線無明顯關系(P>0.05，表2)。

圖1 FRα在垂體腺瘤中的表達(冰凍切片二步法)

A：FRα在垂體NF腺瘤中陽性表達；B：FRα在垂體PRL腺瘤中陰性表達

表1 FRα在不同病理類型垂體腺瘤中的表達情況

表2 FRα表達與NF腺瘤臨床病理特征的相關性

2.3 FRα表達與其他病理類型腺瘤臨床病理特征的關系 在PRL腺瘤、GH腺瘤、ACTH腺瘤中，FRα的表達與患者性別、年齡、腫瘤徑線、侵襲性無明顯關系(P>0.05)。

3 討論

葉酸是細胞代謝、DNA合成與修復的重要分子，對正常組織細胞及腫瘤細胞都是不可或缺的[3]。葉酸結合蛋白可以被劃分成3類：負責大多數葉酸跨膜轉運的還原性葉酸載體(reduced folate carrier，RFC)、參與單碳代謝的胞漿結合蛋白、以內吞方式轉運葉酸的葉酸受體(FR)[4]。

FR目前被認為具有3種異構體：FRα、FRβ和FRγ，每一種異構體都有特定的組織分布[5]。FRα是被研究最為廣泛和深入的葉酸受體，在正常組織中分布有限，但在許多上皮來源的非黏液性腫瘤中高度表達[6]。其中，卵巢癌FRα的表達情況被認為與腫瘤的分級、分期、預后都有重要的關系[7-8]。有研究表明，FRα能夠通過調節葉酸的攝取、胞內信號的轉導，從而使腫瘤細胞具有生長優勢[9]。

FR基因的表達在正常成人組織中非常有限。正常組織的FRα位于細胞的頂端表面，與血液循環中的葉酸并沒有直接的相互作用[10]。比如，在小腸及腎臟細胞中，FRα對葉酸的吸收是從“外部”的腔內進入“內部”的細胞環境，并沒有和血液發生關系[11]。在胎盤中，FRα和FRβ同時對葉酸從母體進入胎兒的過程起到關鍵作用，并且能在母體葉酸不足時保證胎兒葉酸的供應，從而維持胎兒正常的生長發育[7]。在中樞神經系統中，FRα在脈絡叢中表達，能夠把葉酸從血漿中轉運到腦脊液和大腦中[10]。肺上皮分布的FRα的作用目前仍未被闡明[7]。

FRα能夠促進細胞攝取葉酸，后者能使細胞加速生長和分裂，使細胞具有生長優勢。另有一些研究表明FRα可能通過影響細胞信號轉導通路來實現該作用[5]。微囊蛋白(caveolin)是一種抑癌基因，其表達與FRα負相關。微囊蛋白能夠與細胞信號轉導通路中許多蛋白相互作用，這提示了FRα也很可能在這些通路中扮演重要角色。另外，在腫瘤發生的早期，FRα在腫瘤細胞中能富集葉酸分子，后者可以促進細胞修復許多轉錄因子和蛋白的DNA損傷。這種效應能夠為腫瘤的發生、生長提供合適的胞內環境。

FRα在不同組織(包括腫瘤)中的特異性分布使得其能夠作為靶向藥物的作用位點，并顯著減少對正常組織的副作用。利用葉酸共軛物對FRα陽性腫瘤細胞進行顯像是一種發展較快的腫瘤診斷手段。

Evans等[1]通過研究指出，FRα在不同病理類型的垂體腺瘤中是有差異性表達的——在無功能垂體腺瘤(NFPA)中高表達，在內分泌功能的垂體腺瘤(PRL、ACTH、GH)中低表達或不表達。在隨后的實驗中，該實驗室還用鼠alphaT3-1細胞系作為實驗材料研究了FRα的表達情況對細胞生長的影響。實驗結果顯示：FRα的表達量與alphaT3-1細胞的生長速率、有絲分裂速率呈正相關。

本研究發現，FRα在不同內分泌類型垂體腺瘤中的表達有明顯的差異：在無功能垂體腺瘤中高表達，在PRL、ACTH、GH腺瘤中低表達。對于無功能垂體腺瘤，FRα在侵襲組中的陽性率明顯高于非侵襲組，FRα的表達情況與患者的年齡、性別、平均徑線無關。該研究明確了FRα在垂體腺瘤不同病理類型中的特異性表達，提出了FRα可以作為判斷NF腺瘤侵襲性的新指標，并為以后對NF腺瘤進行靶向診斷和治療提供了研究方向。

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The expression and clinical significance of FRα in pituitary adenomas

Li Yan1，Liu Xiaohai1，Zhao Dachun1,Yao Yong2,Wang Renzhi2

1.Department of Neurosurgery,2.Department of Pathology,Peking Union Medical College Hospital,Beijing,100005,China

Objective To study the expression of folate receptor α(FRα)in pituitary adenomas,and to explore its relationship with some clinical features of pituitary adenoma.Methods The expression of FRα in frozen tissue sections from 124 patients with pituitary adenomas was examined with immunohistochemical method.It was analyzed the relationship of expression level of FRα with some clinical features including gender,age,diameter and invasiveness of tumors.Results The positive rates of FRα expression in NF adenoma,PRL adenoma,GH adenoma,and ACTH adenoma were 73.8%(31/42),9.7%(3/31),6.7%(2/30),and 9.5%(2/21),respectively.FRα expression level in NF adenoma was significantly higher than that in other types of pituitary adenomas(P<0.05).In NF pituitary adenoma,the expression of FRα was significantly related to tumorous invasiveness(P<0.05).The expression of FRα was not related to gender,age,and size of tumors(P>0.05).In the other three types of pituitary adenomas,FRα has no relationship with these clinical features.Conclusions FRα is highly expressed in NF pituitary adenoma,lowly expressed in other types of pituitary adenomas,and is related to invasiveness of NF pituitary adenoma.

pituitary adenoma;invasiveness;expression;FRα;clinical feature

100005 北京，中國醫學科學院北京協和醫院神經外科(李 炎，劉小海，趙大春)，病理科(姚 勇，王任直)

李 炎，E-mail:liyan4003@126.com

R 736.4

A

1004-0188(2014)05-0476-03

10.3969/j.issn.1004-0188.2014.05.006

2013-12-18)