不同位置土壤中枯草芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶活力的比較

王佩+武亞方+盧江麗+劉夢(mèng)潔

摘要：從月季花下、草坪上及大樹下采集土壤，然后對(duì)其進(jìn)行分離得到枯草芽孢桿菌。通過對(duì)枯草芽苞桿菌利用酪蛋白培養(yǎng)基產(chǎn)蛋白酶能力的比較，發(fā)現(xiàn)月季花下土壤中分離得到的枯草芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶的能力最強(qiáng)。

關(guān)鍵詞：枯草芽孢桿菌；蛋白酶；純化

中圖分類號(hào)：S188文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1007-273X（2014）03-0012-02

隨著飼用酶制劑應(yīng)用研究的不斷深入，人們逐漸發(fā)現(xiàn)了蛋白酶在動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)上的獨(dú)特作用，蛋白酶也因此受到了越來越多的關(guān)注。根據(jù)來源的不同，蛋白酶可分為動(dòng)物源性蛋白酶、植物源性蛋白酶、微生物源性蛋白酶等[1]。其中微生物蛋白酶既有通過細(xì)菌（如枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌）培養(yǎng)提取的，也有通過真菌（如黑曲霉、酵母）發(fā)酵提取的。微生物蛋白酶和植物蛋白酶由于生產(chǎn)成本相對(duì)低廉，在多種工業(yè)（如飼料、食品等）上得到了廣泛應(yīng)用。本試驗(yàn)通過對(duì)不同位置的新鮮土壤進(jìn)行分離，篩選出產(chǎn)蛋白酶活力較高的菌株，為微生物蛋白酶的研究奠定了基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1土壤

試驗(yàn)用3份新鮮土壤：采自黃淮學(xué)院某月季花下、草坪上及大樹下，距土壤表層約10 cm。

1.2方法

1.2.1菌株分離 將土樣平攤于一干凈的四方紙上，從紙的四角及中間各取適量的土樣，混勻。稱取1.0 g混勻土樣與20 mL肉湯培養(yǎng)基于錐形瓶中混合，封口。再將其放入80 ℃恒溫水浴鍋中加熱處理10 min，然后于恒溫?fù)u床內(nèi)30 ℃，150 r/min振蕩培養(yǎng)24 h。

用接種環(huán)接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，30 ℃條件下培養(yǎng)24 h[2，3]。

1.2.2革蘭氏染色 將上述營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上的菌落進(jìn)行涂片鏡檢。

在已干燥的抹片上滴加草酸銨結(jié)晶紫染色液，染色1 min，水洗；加路戈碘液進(jìn)行媒染2 min，水洗；加95%乙醇進(jìn)行脫色30 s，水洗；加10倍稀釋的石碳酸復(fù)紅染液，復(fù)染1 min，水洗；吸干、烘干，鏡檢。

1.2.3生化試驗(yàn)

（1）接觸酶試驗(yàn)。用接種環(huán)取一小環(huán)符合上述要求的菌落涂抹于已滴有10%過氧化氫溶液的載玻片上，觀察載玻片上是否有大量氣泡產(chǎn)生。

（2）V-P試驗(yàn)。將符合上述要求的菌落接種于V-P反應(yīng)培養(yǎng)液中，37 ℃培養(yǎng)4 d后，取2 mL培養(yǎng)液和等量的40%NaOH溶液混合，充分振蕩后觀察培養(yǎng)液是否呈紅色。

（3）水解淀粉試驗(yàn)。取符合上述要求的菌落接種于淀粉培養(yǎng)基上，于37 ℃培養(yǎng)4 d后，在平板上滴加盧氏碘液（需鋪滿菌落），觀察平板是否呈藍(lán)色，菌落周圍有無無色透明圈出現(xiàn)。

（4）檸檬酸鹽試驗(yàn)。將符合上述要求的菌落接種于檸檬酸鹽培養(yǎng)基上，37 ℃培養(yǎng)4 d，觀察平板是否呈現(xiàn)藍(lán)色或桃紅色。

（5）分解酪素試驗(yàn)。將符合各個(gè)生化鑒定結(jié)果的菌落接種于肉湯培養(yǎng)基中，置于恒溫?fù)u床機(jī)內(nèi)30 ℃、150 r/min振蕩富集培養(yǎng)24 h。然后再將其置于80℃水浴鍋中加熱10 min。取1 mL處理液以10倍稀釋法分別稀釋為10 4、10 5、10 6。分別取0.1 mL菌液涂布于酪素培養(yǎng)基上。倒置于恒溫培養(yǎng)箱中30 ℃培養(yǎng)24 h。

觀察酪素平板上菌落周圍是否產(chǎn)生透明圈，挑H/C（透明圈直徑/菌落直徑）比值大的菌種接入斜面培養(yǎng)基上。30 ℃培養(yǎng)24 h，備用。

1.2.4菌種純化 平板劃線分離法在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上分離純化挑選出的菌株。

2結(jié)果與分析

2.1菌種分離

革蘭氏染色陽(yáng)性；鏡檢結(jié)果為短桿狀、芽孢端生，形狀橢圓。

2.2菌種鑒定

生化試驗(yàn)鑒定結(jié)果見表1。有表1可見，該菌對(duì)接觸酶試驗(yàn)、V-P試驗(yàn)、水解淀粉試驗(yàn)、檸檬酸鹽試驗(yàn)均呈陽(yáng)性。

由表2可見，月季花下分離后菌株在酵素平板上的H/C值最大。該菌能分解酪素，在酪素平板上菌落周圍所形成的透明圈H/C結(jié)果見表2。

根據(jù)各項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果，依照《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)》，可以認(rèn)為篩選到的菌株為枯草芽孢桿菌[4]，其中月季花下純化的枯草芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶能力最強(qiáng)，草坪上純化的枯草芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶能力次之，大樹下純化的枯草芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶能力最弱。

3討論

催化蛋白質(zhì)水解的酶種類很多，重要的有胃蛋白酶、胰蛋白酶、組織蛋白酶、木瓜蛋白酶和枯草芽孢桿菌蛋白酶等。許多行業(yè)已開始大量利用蛋白酶，因?yàn)樗瓤梢怨?jié)省時(shí)間，又能改善勞動(dòng)衛(wèi)生條件。蛋白酶可用于蠶絲脫膠、肉類嫩化、酒類澄清等。臨床上可作藥用，如用胃蛋白酶治療消化不良，用酸性蛋白酶治療支氣管炎；加酶洗衣粉是洗滌劑中的新產(chǎn)品，含堿性蛋白酶，能去除衣物上的血漬和蛋白污物，但使用時(shí)應(yīng)注意不要接觸皮膚，以免損傷皮膚表面的蛋白質(zhì)，引起皮疹、濕疹等過敏現(xiàn)象。

本試驗(yàn)通過對(duì)菌株分離、鑒定的研究，得到了產(chǎn)蛋白酶的枯草芽孢桿菌，為進(jìn)一步提高該菌產(chǎn)中性蛋白酶的能力奠定了基礎(chǔ)，在接下來的試驗(yàn)中，計(jì)劃篩選出高產(chǎn)蛋白酶的枯草芽孢桿菌菌株，并對(duì)其進(jìn)行優(yōu)化，提高酶活力，增強(qiáng)穩(wěn)定性，使其作為酶制劑盡快應(yīng)用于飼料添加劑產(chǎn)業(yè)。

參考文獻(xiàn)：

[1]郭興華，益生菌—基礎(chǔ)與應(yīng)用[M].北京：北京科學(xué)技術(shù)出版社，2002.

[2]湯保貴，徐中文，張金燕，等.枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)條件及對(duì)水質(zhì)的凈化作用[J].淡水魚業(yè)，2007，37（3）：45 48.

[3]雷愛瑩.枯草芽孢桿菌的分離和凈化水質(zhì)的研究[J].廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2005（3）：20 22.

[4]溫海燕.枯草芽孢桿菌的分離與初步鑒定[J].獸醫(yī)科技，2012（2）：118 119.

摘要：從月季花下、草坪上及大樹下采集土壤，然后對(duì)其進(jìn)行分離得到枯草芽孢桿菌。通過對(duì)枯草芽苞桿菌利用酪蛋白培養(yǎng)基產(chǎn)蛋白酶能力的比較，發(fā)現(xiàn)月季花下土壤中分離得到的枯草芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶的能力最強(qiáng)。

關(guān)鍵詞：枯草芽孢桿菌；蛋白酶；純化

中圖分類號(hào)：S188文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1007-273X（2014）03-0012-02

隨著飼用酶制劑應(yīng)用研究的不斷深入，人們逐漸發(fā)現(xiàn)了蛋白酶在動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)上的獨(dú)特作用，蛋白酶也因此受到了越來越多的關(guān)注。根據(jù)來源的不同，蛋白酶可分為動(dòng)物源性蛋白酶、植物源性蛋白酶、微生物源性蛋白酶等[1]。其中微生物蛋白酶既有通過細(xì)菌（如枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌）培養(yǎng)提取的，也有通過真菌（如黑曲霉、酵母）發(fā)酵提取的。微生物蛋白酶和植物蛋白酶由于生產(chǎn)成本相對(duì)低廉，在多種工業(yè)（如飼料、食品等）上得到了廣泛應(yīng)用。本試驗(yàn)通過對(duì)不同位置的新鮮土壤進(jìn)行分離，篩選出產(chǎn)蛋白酶活力較高的菌株，為微生物蛋白酶的研究奠定了基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1土壤

試驗(yàn)用3份新鮮土壤：采自黃淮學(xué)院某月季花下、草坪上及大樹下，距土壤表層約10 cm。

1.2方法

1.2.1菌株分離 將土樣平攤于一干凈的四方紙上，從紙的四角及中間各取適量的土樣，混勻。稱取1.0 g混勻土樣與20 mL肉湯培養(yǎng)基于錐形瓶中混合，封口。再將其放入80 ℃恒溫水浴鍋中加熱處理10 min，然后于恒溫?fù)u床內(nèi)30 ℃，150 r/min振蕩培養(yǎng)24 h。

用接種環(huán)接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，30 ℃條件下培養(yǎng)24 h[2，3]。

1.2.2革蘭氏染色 將上述營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上的菌落進(jìn)行涂片鏡檢。

在已干燥的抹片上滴加草酸銨結(jié)晶紫染色液，染色1 min，水洗；加路戈碘液進(jìn)行媒染2 min，水洗；加95%乙醇進(jìn)行脫色30 s，水洗；加10倍稀釋的石碳酸復(fù)紅染液，復(fù)染1 min，水洗；吸干、烘干，鏡檢。

1.2.3生化試驗(yàn)

（1）接觸酶試驗(yàn)。用接種環(huán)取一小環(huán)符合上述要求的菌落涂抹于已滴有10%過氧化氫溶液的載玻片上，觀察載玻片上是否有大量氣泡產(chǎn)生。

（2）V-P試驗(yàn)。將符合上述要求的菌落接種于V-P反應(yīng)培養(yǎng)液中，37 ℃培養(yǎng)4 d后，取2 mL培養(yǎng)液和等量的40%NaOH溶液混合，充分振蕩后觀察培養(yǎng)液是否呈紅色。

（3）水解淀粉試驗(yàn)。取符合上述要求的菌落接種于淀粉培養(yǎng)基上，于37 ℃培養(yǎng)4 d后，在平板上滴加盧氏碘液（需鋪滿菌落），觀察平板是否呈藍(lán)色，菌落周圍有無無色透明圈出現(xiàn)。

（4）檸檬酸鹽試驗(yàn)。將符合上述要求的菌落接種于檸檬酸鹽培養(yǎng)基上，37 ℃培養(yǎng)4 d，觀察平板是否呈現(xiàn)藍(lán)色或桃紅色。

（5）分解酪素試驗(yàn)。將符合各個(gè)生化鑒定結(jié)果的菌落接種于肉湯培養(yǎng)基中，置于恒溫?fù)u床機(jī)內(nèi)30 ℃、150 r/min振蕩富集培養(yǎng)24 h。然后再將其置于80℃水浴鍋中加熱10 min。取1 mL處理液以10倍稀釋法分別稀釋為10 4、10 5、10 6。分別取0.1 mL菌液涂布于酪素培養(yǎng)基上。倒置于恒溫培養(yǎng)箱中30 ℃培養(yǎng)24 h。

觀察酪素平板上菌落周圍是否產(chǎn)生透明圈，挑H/C（透明圈直徑/菌落直徑）比值大的菌種接入斜面培養(yǎng)基上。30 ℃培養(yǎng)24 h，備用。

1.2.4菌種純化 平板劃線分離法在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上分離純化挑選出的菌株。

2結(jié)果與分析

2.1菌種分離

革蘭氏染色陽(yáng)性；鏡檢結(jié)果為短桿狀、芽孢端生，形狀橢圓。

2.2菌種鑒定

生化試驗(yàn)鑒定結(jié)果見表1。有表1可見，該菌對(duì)接觸酶試驗(yàn)、V-P試驗(yàn)、水解淀粉試驗(yàn)、檸檬酸鹽試驗(yàn)均呈陽(yáng)性。

由表2可見，月季花下分離后菌株在酵素平板上的H/C值最大。該菌能分解酪素，在酪素平板上菌落周圍所形成的透明圈H/C結(jié)果見表2。

根據(jù)各項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果，依照《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)》，可以認(rèn)為篩選到的菌株為枯草芽孢桿菌[4]，其中月季花下純化的枯草芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶能力最強(qiáng)，草坪上純化的枯草芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶能力次之，大樹下純化的枯草芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶能力最弱。

3討論

催化蛋白質(zhì)水解的酶種類很多，重要的有胃蛋白酶、胰蛋白酶、組織蛋白酶、木瓜蛋白酶和枯草芽孢桿菌蛋白酶等。許多行業(yè)已開始大量利用蛋白酶，因?yàn)樗瓤梢怨?jié)省時(shí)間，又能改善勞動(dòng)衛(wèi)生條件。蛋白酶可用于蠶絲脫膠、肉類嫩化、酒類澄清等。臨床上可作藥用，如用胃蛋白酶治療消化不良，用酸性蛋白酶治療支氣管炎；加酶洗衣粉是洗滌劑中的新產(chǎn)品，含堿性蛋白酶，能去除衣物上的血漬和蛋白污物，但使用時(shí)應(yīng)注意不要接觸皮膚，以免損傷皮膚表面的蛋白質(zhì)，引起皮疹、濕疹等過敏現(xiàn)象。

本試驗(yàn)通過對(duì)菌株分離、鑒定的研究，得到了產(chǎn)蛋白酶的枯草芽孢桿菌，為進(jìn)一步提高該菌產(chǎn)中性蛋白酶的能力奠定了基礎(chǔ)，在接下來的試驗(yàn)中，計(jì)劃篩選出高產(chǎn)蛋白酶的枯草芽孢桿菌菌株，并對(duì)其進(jìn)行優(yōu)化，提高酶活力，增強(qiáng)穩(wěn)定性，使其作為酶制劑盡快應(yīng)用于飼料添加劑產(chǎn)業(yè)。

參考文獻(xiàn)：

[1]郭興華，益生菌—基礎(chǔ)與應(yīng)用[M].北京：北京科學(xué)技術(shù)出版社，2002.

[2]湯保貴，徐中文，張金燕，等.枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)條件及對(duì)水質(zhì)的凈化作用[J].淡水魚業(yè)，2007，37（3）：45 48.

[3]雷愛瑩.枯草芽孢桿菌的分離和凈化水質(zhì)的研究[J].廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2005（3）：20 22.

[4]溫海燕.枯草芽孢桿菌的分離與初步鑒定[J].獸醫(yī)科技，2012（2）：118 119.

摘要：從月季花下、草坪上及大樹下采集土壤，然后對(duì)其進(jìn)行分離得到枯草芽孢桿菌。通過對(duì)枯草芽苞桿菌利用酪蛋白培養(yǎng)基產(chǎn)蛋白酶能力的比較，發(fā)現(xiàn)月季花下土壤中分離得到的枯草芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶的能力最強(qiáng)。

關(guān)鍵詞：枯草芽孢桿菌；蛋白酶；純化

中圖分類號(hào)：S188文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1007-273X（2014）03-0012-02

隨著飼用酶制劑應(yīng)用研究的不斷深入，人們逐漸發(fā)現(xiàn)了蛋白酶在動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)上的獨(dú)特作用，蛋白酶也因此受到了越來越多的關(guān)注。根據(jù)來源的不同，蛋白酶可分為動(dòng)物源性蛋白酶、植物源性蛋白酶、微生物源性蛋白酶等[1]。其中微生物蛋白酶既有通過細(xì)菌（如枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌）培養(yǎng)提取的，也有通過真菌（如黑曲霉、酵母）發(fā)酵提取的。微生物蛋白酶和植物蛋白酶由于生產(chǎn)成本相對(duì)低廉，在多種工業(yè)（如飼料、食品等）上得到了廣泛應(yīng)用。本試驗(yàn)通過對(duì)不同位置的新鮮土壤進(jìn)行分離，篩選出產(chǎn)蛋白酶活力較高的菌株，為微生物蛋白酶的研究奠定了基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1土壤

試驗(yàn)用3份新鮮土壤：采自黃淮學(xué)院某月季花下、草坪上及大樹下，距土壤表層約10 cm。

1.2方法

1.2.1菌株分離 將土樣平攤于一干凈的四方紙上，從紙的四角及中間各取適量的土樣，混勻。稱取1.0 g混勻土樣與20 mL肉湯培養(yǎng)基于錐形瓶中混合，封口。再將其放入80 ℃恒溫水浴鍋中加熱處理10 min，然后于恒溫?fù)u床內(nèi)30 ℃，150 r/min振蕩培養(yǎng)24 h。

用接種環(huán)接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，30 ℃條件下培養(yǎng)24 h[2，3]。

1.2.2革蘭氏染色 將上述營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上的菌落進(jìn)行涂片鏡檢。

在已干燥的抹片上滴加草酸銨結(jié)晶紫染色液，染色1 min，水洗；加路戈碘液進(jìn)行媒染2 min，水洗；加95%乙醇進(jìn)行脫色30 s，水洗；加10倍稀釋的石碳酸復(fù)紅染液，復(fù)染1 min，水洗；吸干、烘干，鏡檢。

1.2.3生化試驗(yàn)

（1）接觸酶試驗(yàn)。用接種環(huán)取一小環(huán)符合上述要求的菌落涂抹于已滴有10%過氧化氫溶液的載玻片上，觀察載玻片上是否有大量氣泡產(chǎn)生。

（2）V-P試驗(yàn)。將符合上述要求的菌落接種于V-P反應(yīng)培養(yǎng)液中，37 ℃培養(yǎng)4 d后，取2 mL培養(yǎng)液和等量的40%NaOH溶液混合，充分振蕩后觀察培養(yǎng)液是否呈紅色。

（3）水解淀粉試驗(yàn)。取符合上述要求的菌落接種于淀粉培養(yǎng)基上，于37 ℃培養(yǎng)4 d后，在平板上滴加盧氏碘液（需鋪滿菌落），觀察平板是否呈藍(lán)色，菌落周圍有無無色透明圈出現(xiàn)。

（4）檸檬酸鹽試驗(yàn)。將符合上述要求的菌落接種于檸檬酸鹽培養(yǎng)基上，37 ℃培養(yǎng)4 d，觀察平板是否呈現(xiàn)藍(lán)色或桃紅色。

（5）分解酪素試驗(yàn)。將符合各個(gè)生化鑒定結(jié)果的菌落接種于肉湯培養(yǎng)基中，置于恒溫?fù)u床機(jī)內(nèi)30 ℃、150 r/min振蕩富集培養(yǎng)24 h。然后再將其置于80℃水浴鍋中加熱10 min。取1 mL處理液以10倍稀釋法分別稀釋為10 4、10 5、10 6。分別取0.1 mL菌液涂布于酪素培養(yǎng)基上。倒置于恒溫培養(yǎng)箱中30 ℃培養(yǎng)24 h。

觀察酪素平板上菌落周圍是否產(chǎn)生透明圈，挑H/C（透明圈直徑/菌落直徑）比值大的菌種接入斜面培養(yǎng)基上。30 ℃培養(yǎng)24 h，備用。

1.2.4菌種純化 平板劃線分離法在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上分離純化挑選出的菌株。

2結(jié)果與分析

2.1菌種分離

革蘭氏染色陽(yáng)性；鏡檢結(jié)果為短桿狀、芽孢端生，形狀橢圓。

2.2菌種鑒定

生化試驗(yàn)鑒定結(jié)果見表1。有表1可見，該菌對(duì)接觸酶試驗(yàn)、V-P試驗(yàn)、水解淀粉試驗(yàn)、檸檬酸鹽試驗(yàn)均呈陽(yáng)性。

由表2可見，月季花下分離后菌株在酵素平板上的H/C值最大。該菌能分解酪素，在酪素平板上菌落周圍所形成的透明圈H/C結(jié)果見表2。

根據(jù)各項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果，依照《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)》，可以認(rèn)為篩選到的菌株為枯草芽孢桿菌[4]，其中月季花下純化的枯草芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶能力最強(qiáng)，草坪上純化的枯草芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶能力次之，大樹下純化的枯草芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶能力最弱。

3討論

催化蛋白質(zhì)水解的酶種類很多，重要的有胃蛋白酶、胰蛋白酶、組織蛋白酶、木瓜蛋白酶和枯草芽孢桿菌蛋白酶等。許多行業(yè)已開始大量利用蛋白酶，因?yàn)樗瓤梢怨?jié)省時(shí)間，又能改善勞動(dòng)衛(wèi)生條件。蛋白酶可用于蠶絲脫膠、肉類嫩化、酒類澄清等。臨床上可作藥用，如用胃蛋白酶治療消化不良，用酸性蛋白酶治療支氣管炎；加酶洗衣粉是洗滌劑中的新產(chǎn)品，含堿性蛋白酶，能去除衣物上的血漬和蛋白污物，但使用時(shí)應(yīng)注意不要接觸皮膚，以免損傷皮膚表面的蛋白質(zhì)，引起皮疹、濕疹等過敏現(xiàn)象。

本試驗(yàn)通過對(duì)菌株分離、鑒定的研究，得到了產(chǎn)蛋白酶的枯草芽孢桿菌，為進(jìn)一步提高該菌產(chǎn)中性蛋白酶的能力奠定了基礎(chǔ)，在接下來的試驗(yàn)中，計(jì)劃篩選出高產(chǎn)蛋白酶的枯草芽孢桿菌菌株，并對(duì)其進(jìn)行優(yōu)化，提高酶活力，增強(qiáng)穩(wěn)定性，使其作為酶制劑盡快應(yīng)用于飼料添加劑產(chǎn)業(yè)。

參考文獻(xiàn)：

[1]郭興華，益生菌—基礎(chǔ)與應(yīng)用[M].北京：北京科學(xué)技術(shù)出版社，2002.

[2]湯保貴，徐中文，張金燕，等.枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)條件及對(duì)水質(zhì)的凈化作用[J].淡水魚業(yè)，2007，37（3）：45 48.

[3]雷愛瑩.枯草芽孢桿菌的分離和凈化水質(zhì)的研究[J].廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2005（3）：20 22.

[4]溫海燕.枯草芽孢桿菌的分離與初步鑒定[J].獸醫(yī)科技，2012（2）：118 119.