朱布仁-7微生物限度檢查的方法學研究

2014-07-30 13:01:40宋宏春

中國民族醫藥雜志 2014年3期

周剛丁紅宋宏春

(1.內蒙古食品藥品檢驗所，內蒙古呼和浩特 010020;2.呼和浩特市藥品不良反應和藥物濫用監測中心，內蒙古呼和浩特 010020;3.內蒙古醫科大學藥學院，內蒙古呼和浩特 010050)

朱布仁-7是由黑冰片、硼砂、膽南星、苦地丁、連翹、自貝齒、石榴7味藥組成的蒙藥制劑，具有消炎利膽的功效，臨床上主要用于膽痞?。?］。為了有效控制其成品的質量，本文對朱布仁-7的微生物限度檢查參照中國藥典［2］的規定進行了方法學研究，確立了可行的微生物限度檢查法。

1 試驗材料及儀器

1.1 樣品:朱布仁-7由正藍旗蒙醫院提供。

1.2 菌種:大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉。

1.3 培養基:營養瓊脂、玫瑰紅鈉瓊脂、膽鹽乳糖、營養肉湯、改良馬丁、MUG培養基。上述菌種和培養基均由中國藥品生物制品檢定所提供。

1.4 儀器:三洋MLS-3750型高壓滅菌器、三洋 MIR-554恒溫培養箱、梅特勒-托利多PL602-L型電子天平。

2 方法驗證

2.1 菌液制備

2.1.1 取經30～35℃培養18～24h大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的肉湯培養物，用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1mL含菌數為50～100 cfu的菌懸液。

2.1.2 取經23～28℃培養24～48h的白色念珠菌改良馬丁培養物，用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1mL含菌數為50～100 cfu的菌懸液。

2.1.3 取經23～28℃培養1周的黑曲霉斜面培養物，加3～5mL 0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫，吸出孢子懸液至無菌試管內，用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1mL含孢子數為50～100 cfu的孢子懸液。

2.2 供試品溶液的制備:稱取供試品10g，加pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100mL，作為1:10的供試液。

2.3 細菌、霉菌及酵母菌計數方法的驗證

2.3.1 平皿法:取1mL供試品溶液注皿，分別加入5株試驗菌，測定回收率。

2.3.2 培養基稀釋法:取0.2mL供試品溶液注皿，分別加入5株試驗菌，測定回收率。

2.3.3 回收率的測定方法

2.3.3.1 試驗組:常規法和培養基稀釋法取規定量供試液和50～100cfu試驗菌注皿，立即傾注相應的培養基，平行制備2個平皿，按規定的溫度和時間培養，測定其菌數。

2.3.3.2 菌液組:取與試驗組相同的50～100cfu試驗菌注皿，以下同試驗組，測定所加的試驗菌數。

2.3.3.3 供試品對照組:常規法和培養基稀釋法取規定量供試液注皿，平行制備2個平皿，按平皿法測定其供試品本底菌數。

2.3.3.4 回收率計算公式:回收率應不低于70%。

回收率 =【(試驗組平均菌落數—供試品對照組平均菌落數)÷菌液組平均菌落數】×100%

2.3.4 試驗結果:見表1和表2。

表1 平皿法測定5株試驗菌的回收率

表2 培養基稀釋法測定3株試驗菌的回收率

2.3.5 結果判斷:從表1可以看出，本品對白色念珠菌和黑曲霉無抑菌活性，回收率不低于70%;對金黃色葡萄球菌有抑菌活性，回收率低于70%，改用培養基稀釋法對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌重新驗證。從表2可以看出，用培養基稀釋法可消除其抑菌活性，3種菌回收率均不低于70%。說明采用培養基稀釋法可測定其細菌數，采用平皿法可測定其霉菌和酵母菌數。

2.4 控制菌檢查方法驗證

2.4.1 大腸埃希菌的驗證

菌液制備:同前菌液的制備，制備大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌菌液。

試驗組:取1:10供試液10mL及10～100 cfu大腸埃希菌加入100 mL膽鹽乳糖增菌培養基中，依大腸埃希菌檢查法進行檢查。

陰性菌對照組:取1:10供試液10mL及10～100 cfu金黃色葡萄球菌加入100 mL膽鹽乳糖增菌培養基中，依大腸埃希菌檢查法進行檢查。

2.4.2 大腸菌群的驗證

菌液制備:同前菌液的制備，制備大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌菌液。

試驗組:取1:10供試液 1mL、1:100供試液1mL、1:1000供試液1mL分別加入10mL膽鹽乳糖發酵培養基管3支中，同時分別加入10～100 cfu大腸埃希菌，依大腸菌群檢查法進行檢查。

陰性菌對照組:取1:10供試液 1mL、1:100供試液1mL、1:1000供試液1mL分別加入10mL膽鹽乳糖發酵培養基管3支中，同時分別加入10～100 cfu金黃色葡萄球菌，依大腸菌群檢查法進行檢查。

2.4.3 試驗結果:大腸埃希菌、大腸菌群方法驗證結果見表3。