艾滋病患者進行抗病毒治療耐藥性影響因素的研究

程春旭

艾滋病患者進行抗病毒治療耐藥性影響因素的研究

程春旭

目的 探討艾滋病患者進行抗病毒治療出現耐藥性的影響因素。方法 對選取的70例艾滋病患者做問卷調查，并抽取患者血液，對采集的血液進行檢測并提取含有人類免疫缺陷病毒-1(HIV-1)RNA作為樣本，利用PCR技術擴增基因，In-house方法對基因測序，分析擴增基因與HIV耐藥數據庫的對比結果，探討耐藥性的影響因素。結果 采集到的70例患者的人類免疫缺陷病毒-1pol序列中，呈現耐藥性的有12例，總耐藥率為17.14%。治療時間≤1年的患者耐藥性較治療時間超過1年的患者低；服藥依從性＞90%的患者較服藥依從性介于50%～90%之間的患者耐藥性低；用蛋白酶抑制劑治療的患者較用核苷類反轉錄酶抑制劑和非核苷類反轉錄酶抑制劑治療的患者耐藥性低。以上指標比較差異均具有統計學意義（P<0.05）。結論 耐藥性的主要影響因素是治療時間、服藥依從性和抗病毒治療藥物種類。研究總結耐藥性的影響因素有助于優化治療方案，提高治療效果。

艾滋病；耐藥性；抗病毒

目前，艾滋病的主要治療方法是進行抗病毒治療，高效抗逆轉錄病毒治療（HAART)已經在臨床治療中得到廣泛推廣應用[1]。迄今為止，高效抗逆轉錄病毒治療已經使許多艾滋病患者擺脫艾滋病的困擾。但艾滋病病毒的高度變異性、抗病毒治療的藥物種類稀缺、服藥依從性、治療時間漫長等多個原因的存在，導致艾滋病患者在接受抗病毒治療后體內出現耐藥毒株，機體產生耐藥性，即藥物不能產生應有的藥物反應，抗病毒治療效果下降顯著[2]。為探討艾滋病患者接受抗病毒治療后出現耐藥性的影響因素，提出有效防治耐藥性出現的辦法，提高抗病毒治療療效，本研究對70例患者的臨床資料進行分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年1月～2013年10月于吉林省長春市傳染病醫院進行抗病毒治療的艾滋病患者70例，其中男43例，女27例，年齡20～61歲，平均年齡（37.6±4.5）歲，治療時間5～51個月。

1.2 方法

1.2.1 問卷調查 對每名艾滋病患者發放問卷，調查患者的臨床癥狀。問卷調查包括：患者年齡、性別、民族、文化水平等基本信息，患病原因，治療時程，治療方法，近1個月內出現的臨床癥狀和近1個月內的服藥依從性。

1.2.2 采集血液 采集艾滋病患者的血液，從血液中提取病毒RNA，繼而將病毒RNA逆轉錄為cDNA，作為PCR技術的模板。

1.2.3 PCR擴增 擴增共進行2輪：第1輪以Gag-outer (5’-GGGTTTTGGCTGAGGCAATGAG-3’)、Polouter(5’-GCTTGCCAATACTCCRTCCACCA-3’)為引物進行擴增，構建25μL總反應體系，體系除5μL模板、0.5μmol/L的引物，還包括1.5UTaq酶（熱DNA聚合酶）、1.6mmol/L MgC12以及200μmol/L dNTP。第1輪擴增分3個環節：（1）94℃5min，50℃30min，94℃30s進行一次循環；（2）94℃30s、55℃30s、72℃150s進行30次循環；（3）72℃10min，在4℃環境下保溫。第2輪擴增的引物為Seql(5'-GAGCCAACAGCCCCACCA-3’)或Seq3(5’-GAATCTCCCTGTTTTCTGCCA-3’)，總反應體系共50μL，包含作為模板的第1輪擴增產生的5μL產物，濃度均為0.4μmol/L的上下游引物，2.5UTaq酶（熱DNA聚合酶），1.6mmol/LMgC12以及200μmol/L dNTP。第2輪擴增也分3個環節：（1）94℃5min；（2）94℃30s、63℃30s、72℃150s進行30次循環；（3）72℃10min，在4℃環境下保溫。

1.2.4 電泳測序 將2輪擴增后所得擴增產物回收交由北京測序公司進行電泳測序，測序所用引物為Seql(5'-GAGCCA ACAGCCCCACCA-3’)Seq3(5’-GAATCTCCCTGTTTTC TGCCA-3’)SeqF(5’-GCCTGAAAATCCATACAATACTC C-3’)和SeqR(5’-GGATGCGGTATTCCTAATTGAACT TC-3’)。

1.2.5 分析耐藥性 應用Contig Express和Bioedit軟件整理拼接并校對測序后的序列，將序列通過網絡提交至美國斯坦福大學的HIV序列網絡數據庫（http://hivdb.stanford.Edu)進行比對分析，根據比對后獲得的序列耐藥性突變位點評價序列的耐藥性。

1.3 評價標準 耐藥性評價共分敏感、潛在耐藥、低度耐藥、中度耐藥及重度耐藥5個等級。認為低度耐藥以上等級為對藥物有耐藥性。

1.4 統計學方法 采用SPSS13.0統計軟件進行統計學分析，正態計量資料以“±s”表示，組間比較采用t檢驗，計數資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

表1 艾滋病患者抗病毒治療后出現耐藥性的影響因素分析

2 結果

結果表明，年齡、性別、民族、受教育水平、患病原因的不同不影響耐藥性的產生，不是抗病毒治療產生耐藥性的影響因素，而治療時間的長短、服藥依從性的差異以及抗病毒治療的藥物種類的不同對耐藥性的產生有顯著影響。治療時間超過1年以上的患者耐藥性高，治療時間小于等于1年的患者耐藥性低；而服藥依從性50%～90%的患者耐藥性高，服藥依從性大于90%的患者耐藥性低；用核苷類反轉錄酶抑制劑和非核苷類反轉錄酶抑制劑進行抗病毒治療的患者耐藥性高，而抗病毒治療所用藥物為蛋白酶抑制劑的患者耐藥性低(見表1)。

3 討論

艾滋病，全稱為獲得性免疫缺陷綜合征，其致病因子是HIV病毒，該病毒本身并不引發任何疾病，而是通過破壞機體的淋巴組織等免疫系統，降低患者免疫力，使患者易感染其他疾病，最終導致死亡。病原體受到藥物的多次刺激后，產生一系列適應性變化，如病原體自身對藥物的敏感性下降或消失、病原體產生酶降低藥物的活性、病原體作用于膜或靶器官阻止藥物進入細胞發揮作用，導致藥物的治療效果減弱或喪失稱為耐藥性[3]。

HIV病毒是一種RNA病毒，具有遺傳變異的特性，參與HIV基因轉錄的關鍵酶是逆轉錄酶，該酶在DNAA復制中也起作用，但不能如DNA聚合酶一樣對所轉錄物質進行校對的功能，因此會造成HIV發生錯誤復制。HIV基因的錯配導致藥物不能與復制產物特異性結合，藥物起不到治療作用，發生耐藥性變異的病毒株取代原有病毒株，占據優勢地位，因此臨床上出現抗病毒治療耐藥性的現象[4]。

通過單獨分析耐藥性因素發現，患者的年齡、性別、民族、受教育程度、患病原因等方面的差異對產生耐藥性無直接影響，即不是耐藥性的影響因素。耐藥性的主要影響因素是治療時間、服藥依從性和抗病毒治療藥物種類。

由于艾滋病是目前世界難題之一，仍沒有發現較為直接的治療藥物，因此治療時間多持續較長，患者長期使用同一種抗病毒藥物進行治療，造成HIV基因對藥物的敏感性降低，產生了一系列對藥物的適應性變化，從而導致耐藥性的產生。

服藥依從性是耐藥性另一重要影響因素，實驗發現服藥依從性低導致耐藥率高。造成服藥依從性低的原因有二：（1）患者相信抗病毒治療的有效性，完全是資源性服藥；（2）患者自我感覺良好，認為不按時按律服用對病情影響不大。由于存在如上現象，導致藥物的療效不能完全發揮，病毒產生耐藥性。

影響耐藥性的因素還有抗病毒治療藥物的種類。常見的抗病毒藥物有蛋白酶抑制劑、核苷類反轉錄酶抑制劑和非核苷類反轉錄酶抑制劑3種。研究發現，核苷類和非核苷類反轉錄酶抑制劑的長期且大劑量使用導致了耐藥率上升，蛋白酶抑制劑適用范圍較小，耐藥率較低前兩種藥物[5]。

目前普遍使用的治療艾滋病的方法是高效抗逆轉錄病毒治療(HAART)，但是隨著該治療方法使用時間的延長，耐藥性成為了臨床抗病毒治療的主要失敗原因。為了減低耐藥性從而提高治療效果，臨床上應對治療時程長的患者提起高度重視，為盡早發現患者是否出現耐藥情況，應當增加檢測耐藥性的頻率，提高藥物的治療效果。此外，優化抗病毒治療藥物方案，如加入蛋白酶抑制劑治療，可降低耐藥性。

總之，降低藥物耐藥性是提高治療艾滋病水平的重要環節，研究總結耐藥性的影響因素有助于優化治療方案。

[1] 朱新朋,劉宏偉,田隨安,等．河南艾滋病病毒基因型耐藥檢測研究[J]．中國衛生檢驗雜志,2009,19(6)：1324-1326.

[2] 鄭錦雷，楊介者，徐云，等．高效逆轉錄病毒治療艾滋病方案的效果評價[J]．浙江預防醫學，2010，22(1)：5-7．

[3] 蘇齊鑒，周平，閉志友．抗病毒治療艾滋病患者HIV-l耐藥性影響因素[J]．中國公共衛生，2010，26(4)：438-441．

[4] 陳志強，梁良，李保軍，等．2007年河北省艾滋病病毒耐藥檢測結果分析[J]．河北醫藥，2009，31(9)：1129-1130．

[5] 中華醫學會感染病學分會艾滋病學組．艾滋病診療指南(2011年版)[J]．中華傳染病雜志，2011，29(10)：629-640．

10.3969/j.issn.1009-4393.2014.31.006

吉林 130123 吉林省長春市傳染病醫院傳染科（程春旭）