SIRT1在非小細胞肺癌中的表達及相關性研究

逄旭梅△  于國華▲  張居民

[摘要] 目的 探討沉默信息調節因子相關酶1（SIRT1）在非小細胞肺癌組織中的表達情況及其與臨床病理參數之間的關系。方法 應用免疫組織化學（SABC）法檢測112例經病理診斷確診的非小細胞肺癌患者中SIRT1的表達情況，并分析其與相關臨床病理參數之間的關系。 結果 SIRT1在非小細胞肺癌組織中的表達高于周圍正常肺組織，差異具有統計學意義（P＜0.05），在腺癌組織中的表達明顯高于在鱗癌組織中的表達（P＜0.05），并且分化程度越高，表達越好（P＜0.05），有淋巴結轉移者表達明顯高于無淋巴結轉移者，而與年齡、性別、臨床分期等無明顯關系。 結論 SIRT1在非小細胞肺癌組織中的表達與病理分型、分化程度、淋巴結轉移情況相關，可能成為判定非小細胞肺癌惡性程度及評估預后的生物學指標。

[關鍵詞]非小細胞肺癌；SIRT1；免疫組織化學

[中圖分類號] R734.2???[文獻標識碼] B???[文章編號] 2095-0616（2014）09-37-04

Expression of SIRT1 in non-small-cell lung cancer and its correlation study

PANG?Xumei1??YU?Guohua2??ZHANG?Jumin3

1.Weifang Medical University,Weifang 261041,China;2.Department of Medical Oncology,Weifang People's Hospital,Weifang 261041,China;3. Department of Pathology, Weifang People's Hospital,Weifang 261041,China

[Abstract] Objective To investigate the expression of SIRT1 in non-small-cell lung cancer(NSCLC) tissue and its correlation with clinicopathologic features. Methods The clinicopathological data of 112 patients with non-small-cell lung cancer admitted in Weifang People's Hospital were retrospectively reviewed.Immunohistochemistry was used to examine the expression of SIRT1 in specimens of lung cancer and pericancerous tissue.The correlations of SIRT1 expression with clinicopathological features were analyzed. Results The expression of SIRT1 in cancerous tissues was higher than that in adjacent noncancerous tissues.Particularly,the expression of SIRT1 in patients with adenocarcinoma of lung was significantly higher than that in squamous cell carcinoma. Importantly，higher SIRT1 expression in cancerous tissues was correlated with higher differentiation and lymph node metastasis. However, it was not correlated with the age,gender of patients and TNM stage of the cancer. Conclusion The high expression of SIRT1 in non-small-cell lung cancer tissue is correlated with pathological type and degree of differentiation.SIRT1 may be a biological parameter to evaluate the m alignant degree of non-small-cell lung cancer and to forecast the patients prognosis．

[Key words] Non-small-cell lung cancer;SIRT1;Immunohistochemistry

原發性支氣管肺癌簡稱肺癌，是臨床最常見的惡性腫瘤之一。肺癌按組織病理學分為非小細胞肺癌和小細胞肺癌，其中最常見的類型是非小細胞肺癌（NSCLC），約占總發病人數的80%左右。沉默信息調節因子2（Sir2）是近來發現的一類具有尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）依賴性的組蛋白/非組蛋白去乙酰化酶，屬于第Ⅲ類組蛋白去乙酰化酶（HDAC）。SIRT1與Sir2的同源性最高，SIRT1廣泛存在于生物體的胞核及胞質中，調節基因的表

達，使組蛋白、轉錄因子及其他蛋白修飾的賴氨酸殘基去乙酰化。SIRT1通過與不同的組蛋白和非組蛋白相互作用來完成不同的功能。SIRT1通過對基因轉錄、能量代謝等的調節來調節體內的生理功能[1-6]。另外，SIRT1還是細胞凋亡過程中的抑制因子。本研究以細胞免疫組織化學染色方法，檢測SIRT1在非小細胞肺癌組織中的表達情況及與相關臨床病理參數之間的關系。現報道如下。

1?資料與方法

1.1?一般資料

收集山東省濰坊市人民醫院病理科2012年1月～2013年10月非小細胞肺癌存檔標本112例，均為首次發現非小細胞肺癌，且術前未行任何抗腫瘤治療。其中，男92例，女20例；≥60歲62例，＜60歲50例，平均年齡（59.3±1.3）歲；有淋巴結轉移70例，無淋巴結轉移42例；按組織學分型分類，腺癌58例，鱗癌54例；高分化26例，中分化62例，低分化14例，根據國際抗癌協會制定的2003年TNM分期標準：Ⅰ期49例，Ⅱ期46例和Ⅲ期17例。取距離腫瘤組織3cm以上的正常肺組織為對照組。所有病例資料完整，標本經10%中性甲醛溶液固定，常規處理后石蠟包埋。

1.2?檢測試劑與方法

1.2.1?檢測試劑?兔抗人單克隆抗體SIRT1（Ⅰ抗）購自北京博奧森生物技術有限公司（工作濃度1∶350）；二步法檢測試劑盒（PV-6000）（Ⅱ抗）購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.2.2?檢測方法?應用通用型二步法免疫組化染色，標本連續切片，厚度為4μm，常規脫蠟入水，過氧化氫封閉20min，高壓熱修復2～3min，加入Ⅰ抗后4℃過夜，加入Ⅱ抗30min后DAB顯色，蘇木素復染，脫水，透明，封片。用已知陽性切片（乳腺癌腫瘤組織）做為陽性對照，以PBS代替Ⅰ抗做為陰性對照。

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1.3?結果判定

由兩位病理科醫師進行雙盲閱片。免疫組化結果評定：以SIRT1在細胞中出現黃色或棕黃色顆粒為陽性表達。著色細胞占計數細胞的百分率：≤25%為低表達組，≥25%為高表達組。

1.4?統計學方法

應用SPSS18.0軟件進行統計學分析，SIRT1在非小細胞肺癌和正常肺組織中的表達及其與臨床病理參數的關系的分析采用x2檢驗。檢驗水準 α=0.05。

2?結果

2.1?非小細胞肺癌組織與正常肺組織中SIRT1的表達情況

SIRT1在非小細胞肺癌的腫瘤細胞、間質細胞的胞質和（或）胞核中均有不同程度的表達，呈彌漫或散在的棕黃色顆粒狀，以胞質表達為主（見圖1-3）。對112例非小細胞肺癌組織和癌旁組織的配對研究結果顯示，SIRT1在非小細胞肺癌組織中陽性表達為71.43%，在癌旁組織中陽性表達為55.36%，其中表達均陽性為56例，均陰性為10例，腫瘤組織陽性而癌旁組織陰性為24例，腫瘤組織陰性而癌旁組織陽性為6例，差異有統計學意義（P=0.001）。

2.2?SIRT1在非小細胞肺癌中的表達與肺癌相關臨床病理參數之間的關系

見圖1、2和表1。

表1??SIRT1在非小細胞肺癌組織中的表達與相關臨床病理參數之間的關系

相關臨床病理參數 n SIRT1表達（n） x2 P

+ -

年齡

≥60歲 62 47 15 1.304 0.253

＜60歲 50 33 17

性別

男 92 67 25 0.493 0.483

女 20 13 7

吸煙史

有 88 63 25 0.005 0.942

無 24 17 7

淋巴結轉移

有 70 61 9 22.587 0.00

無 42 19 23

病理分型

腺癌 58 47 11 5.439 0.02

鱗癌 54 33 21

分化程度

高分化 26 16 10 6.476 0.039

中分化 62 42 20

低分化 24 22 2

腫瘤分期

Ⅰ期 50 38 12 0.936 0.626

Ⅱ期 47 32 15

Ⅲ期 15 10 5

圖1??SIRT1在肺腺癌組織中的表達（×400）

圖2??SIRT1在肺鱗癌組織中的表達（×400）

3?討論

腫瘤發生發展的過程復雜多變，是多因素共同參與、多階段發展的過程。在這一過程中，正常細胞發生惡變，成為腫瘤細胞。細胞發生惡變的過程中，細胞及基因均發生變化，最終成為腫瘤細胞[7]，腫瘤細胞的生長及分化都不可控。

SIRT1參與體內許多生理功能的調節，可加速脂質代謝、調節肝臟糖異生，同時也能調控胰島素分泌，主要是通過調控胰島β細胞實現。另外，SIRT1抑制內源性凋亡的發生。研究顯示，SIRT1可抑制P53的活性，從而抑制其激活轉錄的作用。SIRT1可使p53蛋白去乙酰化，發生部位是C末端的第382位賴氨酸殘基，抑制下游靶基因，減少細胞凋亡，抑制生長[8-9]。SIRT1調控P53信號通路、調節細胞應激反應，表現在腫瘤細胞中SIRT1的過表達可增加細胞的應激能力。在細胞核中，SIRT1對H1（H1-K26Ac）、H3（H3-K9Ac）和H4（H4-K16Ac）組蛋白特定部位的氨基酸起脫乙酰基作用[10-12]。另外，SIRT1與P300結合后可使組蛋白低乙酰化。這與增加SIRT1的靶向位點-H3K9me3后促進組蛋白甲基化一致。SIRT1還可調控眾多蛋白的表達，如FOXO蛋白、E2F1、Bcl-6等。這些蛋白能在轉錄中、轉錄后、翻譯及修飾等多處水平對Sirtl的表達及活性功能進行調控[13-16]。

有研究報道，SIRT1在其他腫瘤中也呈過表達，如前列腺癌、原發性結腸癌、急性髓細胞性白血病。另外，在鱗癌、基底細胞癌表達也高。相反地，Powell等[17]的研究卻表明Sirtl的缺失可誘導前列腺上皮內瘤變的發生，表明了SIRT1的抗腫瘤作用。Wang等[18]研究發現，SIRT1可抑制Brca1相關腫瘤的形成，或可用來治療腫瘤患者，尤其是乳腺癌患者。

本實驗顯示，SIRT1在肺癌組織中的陽性表達率為71.43%，明顯高于癌旁組織。SIRT1的表達與肺癌的病理類型、分化程度、有無淋巴結轉移有明顯相關性，與患者年齡、性別、有無吸煙史、臨床分期無關。提示SIRT1可作為肺癌的診斷、病程判斷、預示肺癌的惡性程度及預后的重要參考指標。

綜合目前研究結果，SIRT1既是腫瘤促進因子又是腫瘤抑制因子，它在腫瘤的發生中扮演著重要角色，SIRT1的這種雙重作用可能依賴于不同的組織背景。其在非小細胞肺癌中的作用方向，國內外的研究均較少，需要后續擴大樣本量、繼續深入的研究。

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（下轉第頁）

（上接第頁）

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（收稿日期：2014-02-13）

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