淋巴細胞免疫療法治療復發性流產的療效分析

2014-08-07 09:05:58王天紅

中國醫藥科學 2014年8期

王天紅

[摘要] 目的探討不明原因復發性流產臨床治療中淋巴細胞主動免疫治療的臨床價值。方法選取2010～2012年我院診治的復發性流產患者50例，隨機分為兩組，分別行無特殊處理和淋巴細胞主動免疫治療，同時對主動免疫治療患者封閉抗體陰性與陽性的妊娠結局進行統計。結果觀察組患者流產率顯著低于對照組（P＜0.05）。主動免疫治療后封閉抗體陽性患者妊娠成功率為88.5%，陰性患者妊娠成功率為57.1%,陽性組顯著高于陰性組（P＜0.05）。結論淋巴細胞主動免疫治療能過有效治療復發性流產，具有良好的臨床效果，而封閉抗體檢測能夠對妊娠結局有積極的預測作用。

[關鍵詞] 淋巴細胞免疫療法；復發性流產；封閉抗體；妊娠結局

[中圖分類號] R714.1???[文獻標識碼] B???[文章編號] 2095-0616（2014）08-197-03

Efficacy analysis of lymphocyte immunotherapy in treatment of recurrent miscarriage

WANG?Tianhong

Department of Obstetrics and Gynecology,Third Affiliated Hospital of Guangzhou Medical College,Guangzhou510150,China

[Abstract] Objective To investigate the clinical value of lymphocyte active immunotherapy in the clinical treatment of unexplained recurrent miscarriage. Methods Fifty patients with recurrent abortion admitted to our hospital from 2010 to 2012 were selected, randomLy divided into two groups and received non-special treatment and lymphocyte active immunotherapy respectively.Meanwhile,the pregnancy outcomes of the patients with negative and positive blocking antibodies who received active immunotherapy were observed. Results The observation group had lower abortion rate than the control group (P＜0.05).After active immunotherapy, the successful pregnancy rate of the patients with positive blocking antibodies was 88.5% and that of those with negative blocking antibodies was 57.1%,with the positive group significantly higher than the negative group (P＜0.05). Conclusion Lymphocyte active immunotherapy can effectively treat recurrent miscarriage and shows favorable clinical effects.Blocking antibody detection is of positive predictive effect for pregnancy outcomes.

[Key words] Lymphocyte immunotherapy;Recurrent miscarriage;Blocking antibody;Pregnancy outcomes

復發性流產是持續發生兩次或以上自然流產，由于病因較為復雜，可能包括解剖、遺傳、感染以及內分泌等多方面的原因，而還有將近50%的患者無法明確病因[1]。這一部分無法明確原因的復發性流產成為原因不明復發性流產（unexplained recurrent spontaneous abortion，URSA）[2]。在近年來醫學的發展中，生殖免疫學研究不斷深入，有觀點認為超過40%的不明原因復發性流產與免疫因素有關[3]。而主動免疫療法是近年來較為常用的復發性流產治療方案，本研究通過丈夫與男性無關第三個體的淋巴細胞行主動免疫療法，探討復發性流產免疫治療的有效性。

1?資料與方法

1.1?一般資料

選取我院2010年1月～2012年12月門診診治的原因不明復發性流產患者50例，患者均經封閉抗體檢測為陰性。患者年齡21～37歲，平均（29.8±3.2）歲；流產次數為2～4次，其中2次流產31例，3次流產12例，4次流產7例。排除生殖系統畸形、染色體異常、感染、內分泌異常、自身抗體陽性以及自身免疫性疾病的原因。所有患者均經系統化檢查與病史診斷，確定入選標準為：（1）持續發生2次或2次以上自然流產，不存在死胎或死產的病史；（2）經染色體檢查確定夫婦均正常，不存在家族性遺傳病史，胚胎染色體的核型為正常；（3）行胰島素、甲狀腺與生殖系統內分泌檢查，結果均正常，基礎體溫測定為雙相性；（4）患者不存在生殖系統器質性病變或畸形；（5）抗核抗體、核抗原抗體、狼瘡抗凝因子、抗心磷脂抗體等自身抗體檢驗結果均為正常；（6）行支原體、衣原體以及TORCH檢查確定無生殖道感染；（7）丈夫行常規精液檢查無異常，夫婦血性均不存在不合，抗體效價＞1∶128；（8）行封閉抗體或為陰性[4-6]。將患者隨機分為兩組，觀察組患者25例行淋巴細胞主動免疫治療，對照組25例患者未行特別處理。兩組患者一般資料以統計學軟件處理，各項指標差異不具有統計學意義（P＞0.05）。觀察組患者均在淋巴細胞主動免疫治療2周后再次檢測封閉抗體，根據封閉抗體檢測結果進行分組，治療后轉陽性的15例患者為陽性組，治療后封閉抗體檢測結果仍未陰性的35例患者為陰性組，對比兩組患者的妊娠結局。

1.2?供血者篩查與封閉抗體檢測

在行淋巴細胞主動免疫治療之前，供血者均行肝腎功能、血常規、肝炎病毒檢驗（乙肝兩對半、丙肝病毒抗體、丁肝病毒抗原與抗體、戊肝病毒抗體）、梅毒篩查以及AIDS全套病毒抗體篩查，排除通過血液傳染疾病的可能性。同時與患者進行知情溝通，讓患者了解免疫治療可能存在的風險，所有患者或家屬均簽署知情同意書。如果配偶血源篩查不合格，則選擇無關第三個體的血緣。

封閉抗體檢測方法為流式細胞術，采集患者配偶外周抗凝全血100μL加入鼠抗人CD3、CD4、CD8單克隆抗體20μL，再加入患者血清或正常男性AB型血清50μL，孵育30min，加入紅細胞溶解液3mL，PBS洗滌1次，以流式細胞儀客觀分析。打印出加女性血清及加AB型血清的配偶T淋巴細胞CD3+、CD4+、CD8+細胞比例，并按下列公式計算封閉效率。封閉效率=加AB型血清CD比例-加女性血清CD比例（%）。封閉抗體陽性值：正常生育者封閉效率（X-1.96s），大于此值者為封閉抗體陽性。

1.3?治療方法

抽取患者配偶的30mL靜脈血液，進行2%的肝素抗凝處理，放置在保存淋巴細胞分離液（淋巴細胞分離液的比重為1.020）的離心試管中，確保淋巴細胞分離液與抗凝處理后的血液之間界面的清晰。將試管以每分鐘250轉的速度離心處理25min，取出淋巴細胞層，以磷酸鹽緩沖液清洗2次后，職稱籬笆細胞混懸液，將細胞濃度調整為（20～40）×106/mL，以0.5～0.8mL淋巴細胞混懸液在患者兩側前臂皮下注射，注射點4～6個。每兩次治療中間間隔時間為3～4周，以3次為1個療程。在完成1療程的治療后，鼓勵患者在12周內受孕，在未確定妊娠之前，每隔5～6周行淋巴細胞主動免疫治療1次。在確定患者妊娠后，每隔3周行淋巴細胞主動免疫治療1次，持續到患者妊娠第20周。妊娠超過12周，經B型超聲檢查不存在異常，且無分娩活嬰作為妊娠成功。

1.4?統計學方法

本組數據采用SPSS15.0軟件包進行處理，計數資料比較采用x2檢驗，計量資料采用（）表示，組間比較進行t檢驗，均以P＜0.05為有統計學意義。

2?結果

2.1?臨床療效比較

兩組患者治療后的臨床療效比較，見表1。觀察組患者流產率相比對照組明顯降低（x2=9.281，P＜0.05）。

表1??兩組患者治療后的臨床療效比較[n（%）]

組別 n 分娩流產

觀察組 25 19（76.0） 6（24.0）

對照組 25 10（40.0） 15（60.0）

2.2?主動免疫療法封閉抗體檢驗不同結果的妊娠結局

淋巴細胞主動免疫治療后封閉抗體陽性與陰性的妊娠結局統計結果見表2。淋巴細胞主動免疫治療后，封閉抗體陽性患者共18例，妊娠成功率為88.9%，封閉抗體陰性7例，妊娠成功率為57.1%。封閉抗體陽性的患者妊娠成功率顯著高于陰性患者（x2=6.288，P＜0.05）。

表2??淋巴細胞主動免疫治療后封閉抗體陽性與陰性的妊娠結局統計[n（%）]

組別 n 再次流產妊娠成功

陽性組 18 2（32.0） 16（88.5）

陰性組 7 3（24.0） 4（57.1）

2.3?不良反應

所有患者均在主動免疫治療后留院觀察30min以上，確定不存在明顯的不良反應。在治療結束后4例患者存在局部皮膚的短期色素沉淀，無硬結存留。

3?討論

1981年，貝爾和泰勒大膽地采用丈夫和無關第三個體的淋巴細胞進行主動免疫治療，結果接受治療的4名孕婦有3名妊娠成功，生下了健康的嬰兒。由張世訓教授領銜的山東省血液中心于1987年率先開展了這方面的臨床研究。到目前為止，先后治療210例孕婦，妊娠成功率高達87.5%。在現代免疫學的研究中，人類胚胎的形成中來自于父親的基因抗原被視作外來侵入者，因此在母體中會產生排異反應[7]。在正常的妊娠孕婦體內，會自行產生封閉抗體，對抗自然排異性，保存胚胎的發育生長。而當母體內缺乏封閉抗體時，胚胎會受到母體自然排異的影響從而無法正常生長發育。淋巴細胞主動免疫治療能夠通過配偶的淋巴細胞移植入患者體內，刺激患者的免疫系統，從而激發患者體內封閉抗體的產生[8]。在患者再次妊娠時，已產生的封閉抗體能夠通過同源抗原的識別，進行結合，確保封閉抗體效果的作用，保護胚胎的正常生長發育[9]。

本次臨床研究中淋巴細胞主動免疫治療能夠有效提高妊娠成功率，從無特別處理的52%提高至84%，與相關文獻報道結果一致[10-12]。同時，封閉抗體均為陰性的患者在經過主動免疫治療后，陽性患者達到18例，而封閉抗體陽性患者的妊娠成功率相比封閉抗體陰性患者明顯提高。證明通過淋巴細胞主動免疫治療能夠有效促進患者體內封閉抗體的產生，提高胚胎的成活率。而封閉抗體為陰性的患者由于體內封閉抗體未得到有效的增加，從而提高了再次流產的可能性，證明了封閉抗體對于復發性流產有明顯的預測效果[13-14]。

綜上所述，淋巴細胞主動免疫療法對封閉抗體陰性的復發性流產有明顯的治療效果，能夠有效促進封閉抗體的分泌，提高再次妊娠的成功率，而封閉抗體檢測能夠對妊娠結局預測有明顯的作用。

[參考文獻]

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