高效液相色譜法測定水氯甲痤瘡凝膠劑中3組分含量

李 容，舒德忠，徐道英，王柏桉，鄭維國

（重慶市涪陵中心醫院藥劑科，重慶 408000）

水氯甲痤瘡凝膠劑是由水楊酸、氯霉素和甲硝唑3組分為主藥，以新型的高分子藥用輔料卡波姆－940等為輔料制成的凝膠劑，是由我院曾使用的痤瘡Ⅰ號改進而來。痤瘡Ⅰ號是由2%水楊酸、1%氯霉素和0.5%甲硝唑以75%乙醇為溶劑溶解配制而成的溶液劑，用于青少年痤瘡，臨床療效確切，不良反應少，深受廣大痤瘡患者的喜愛，并產生了很大的經濟效益。但其在皮膚表面滯留時間較短，藥物迅速從皮膚中清除，生物利用度低，對皮膚有刺激性，且溶液劑不便于使用和攜帶。卡波姆系水溶性凝膠，易于清除、清洗，是制備外用凝膠的理想輔料。為此，以2%水楊酸、1%氯霉素和0.5%甲硝唑為主藥，以卡波姆、甘油、薄荷腦、三乙醇胺、丙二醇和乙醇等為輔料制成凝膠劑。該產品均勻細膩，稠度適宜，易于涂展，對皮膚無刺激性，工藝簡單，質量可控。為確保該制劑的療效和質量，采用高效液相色譜法不經分離同時測定水氯甲痤瘡凝膠劑中主藥水楊酸、氯霉素和甲硝唑的含量[1－2]，現報道如下。

1 儀器與試藥

UV－2401型紫外分光光度計（日本島津）；LC－20AT型高效液相色譜儀（日本島津），包括SPD－M20A型光電二極管陣列檢測器、CBM－20ALite系統控制器、CTO－10ASVP型柱溫箱；TG328B型電光分析天平（上海天平儀器廠）；電熱恒溫鼓風干燥箱（上海一恒科技有限公司）。水楊酸對照品（批號為100106），氯霉素對照品（含量 99.5%，批號為 130555），甲硝唑對照品（批號100191），均來自中國藥品生物制品檢定所；水楊酸原料藥（鎮江前進化工有限公司，批號為120201）；氯霉素原料藥（南京白敬宇制藥有限責任公司，批號為CH111032）；甲硝唑原料藥（廣西河池化工醫藥股份有限公司，批號為101106）；甲醇（色譜醇，成都市科龍化工試劑廠，批號為20120728），水為注射用水（四川科倫藥業股份有限公司，批號為M12070708），其他試劑均為分析純。

2 方法和結果

2.1 凝膠劑制備

按處方量稱取甘油和卡波姆，將卡波姆均勻撒于甘油表面，用玻棒輕輕攪拌浸潤，加適量純化水，攪勻，放置過夜，溶脹即得基質。將水楊酸、氯霉素和薄荷腦溶于處方量的乙醇和丙二醇中，將甲硝唑溶于80℃純化水中，把上述兩溶液分別加入溶脹好的卡波姆基質中，攪拌均勻，加三乙醇胺調節pH至6～7，再加純化水使成100 g，攪拌均勻呈稠狀，即得水氯甲痤瘡凝膠劑。

2.2 溶液配制

精密稱取水楊酸對照品30 mg，置25 mL容量瓶中，用少量乙醇溶解，加純化水至25 mL，搖勻作水楊酸對照品貯備液；精密量取水楊酸對照品儲備液1.5 mL，置10 mL容量瓶中，加純化水至刻度，搖勻，即得含水楊酸180 μg／mL的對照品溶液。精密稱取氯霉素對照品15 mg，置25 mL容量瓶中，用少量乙醇溶解，加純化水至25 mL搖勻作氯霉素對照品貯備液；精密量取氯霉素對照品貯備液1.5 mL，置10 mL容量瓶中，加純化水至刻度，搖勻，即得含氯霉素 90 μg／mL的對照品溶液。精密稱取甲硝唑對照品7.5 mg，置25 mL容量瓶中，用少量熱水溶解，加純化水至 25 mL搖勻作甲硝唑對照品貯備液。精密量取甲硝唑對照品貯備液1.5 mL，置10 mL量瓶中，加純化水至刻度，搖勻，即得含甲硝唑45 μg／mL的對照品溶液。取水氯甲痤瘡凝膠劑1 g，精密稱定，用純化水溶解，過濾至100 mL容量瓶中，加純化水至刻度，搖勻，即得供試品溶液。按照水氯甲痤瘡凝膠劑處方制備不含水楊酸、氯霉素和甲硝唑的空白凝膠，按供試品溶液的制備方法操作，即得陰性對照品溶液。

2.3 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：VP － ODS C18柱（150 mm ×4.6 mm，4.6 μm）；流動相：甲醇 － 水 － 冰醋酸（50 ∶50 ∶1.2）；流速：1.0 mL ／min；檢測波長：280 nm；柱溫：35 ℃；進樣量：20 μL。試驗過程空調控溫在 25 ℃。在上述色譜條件下，將水楊酸、氯霉素和甲硝唑對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液分別進樣20 μL，記錄色譜圖，見圖1。供試品和對照品溶液的色譜圖在相同的保留時間有一相同的色譜峰，而陰性對照品溶液在此保留時間處無干擾。

圖1 高效液相色譜圖

2.4 方法學考察

線性關系考察：精密吸取水楊酸、氯霉素、甲硝唑對照品貯備液各 0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL，置 10 mL 容量瓶中，用純化水稀釋至刻度，搖勻。分別取上述各溶液平行進樣3次，記錄峰面積。以峰面積對質量濃度進行線性回歸，得標準曲線方程。結果見表1。

表1 線性關系考察結果

精密度試驗：取線性關系考察項下水楊酸、氯霉素和甲硝唑各1個質量濃度的對照品溶液，分別在不同時間測定5次。結果的 RSD分別為2.70%，2.50%，1.13%，表明該方法精密度較好。

重復性試驗：分別精密稱取同一批樣品適量，共6份，依法制備供試品溶液，進樣測定含量。結果水楊酸、氯霉素和甲硝唑平均含量占標示量的 102.44%，101.49%和 101.63%，RSD分別為0.95% ，0.79% 和 0.78% ，表明方法重現性良好。

穩定性試驗：取同一供試品溶液，分別于 0，2，4，6，8 h 時測定。結果水楊酸、氯霉素和甲硝唑的 RSD分別為1.23%，0.95%和0.87%（n＝5），表明供試品溶液在8 h內穩定性良好。

加樣回收試驗：按處方比例精密稱定水楊酸對照品20.02 mg、氯霉素對照品9.86 mg、甲硝唑對照品5.03 mg，置 50 mL容量瓶中，加少許乙醇至完全溶解，再加純化水至刻度，搖勻。分別取上清液 4，4，5，5，6，6 mL，置 10 mL 容量瓶中，加純化水至刻度搖勻，進樣測定，結果見表2。

表2 回收率試驗結果（n＝6）

2.5 樣品含量測定

取水氯甲痤瘡凝膠劑1 g，精密稱定，用純化水溶解，過濾至100 mL容量瓶中，加純化水至刻度，搖勻，進樣 20 μL測定。結果見表3。

表3 樣品含量測定結果（n＝3）

3 討論

水楊酸、氯霉素和甲硝唑的最大紫外吸收波長分別為296，280和316 nm，由于處方中氯霉素的含量居中，故選擇280 nm作為測定波長，既保證氯霉素有最大吸收，同時也保證水楊酸和甲硝唑在此測定波長處有較大吸收。

根據文獻，考察了甲醇－水按不同的比例作流動相系統[1－2]，結果發現氯霉素和甲硝唑峰形較好，但水楊酸峰有拖尾現象，且分離度不好。經過調整，用甲醇 －水 －冰醋酸（50∶50∶1.2）作流動相系統，水楊酸幾乎無拖尾現象，氯霉素和甲硝唑峰形無改變，輔料也無干擾。故選擇甲醇－水－冰醋酸（50∶50∶1.2）作流動相系統，水楊酸、氯霉素和甲硝唑的保留時間分別為 2.40，4.60，6.70 min，分離度好。方法學考察結果表明，該方法重復性好，且操作簡便，可作為水氯甲痤瘡凝膠劑的含量測定方法。

[1]趙建穎.高效液相色譜法同時測定復方甲硝唑搽劑中甲硝唑和氯霉素含量[J].中國藥業，2012，21（20）：40 －42.

[2]左惠芳，張金成，趙 靜.HPLC法測定氯柳酊中氯霉素和水楊酸的含量[J].中國藥師，2008，11（7）：869.