高效液相色譜－蒸發光散射檢測法測定腦絡通膠囊中黃芪甲苷含量

岳 莉

（安徽省淮北市食品藥品檢驗所，安徽 淮北 235000）

腦絡通膠囊是由丹參浸膏、鹽酸托哌酮、川芎浸膏、甲基橙皮 苷、黃芪浸膏、維生素B6制成的膠囊劑，具有擴張血管、增加腦血流量作用，主要用于腦血栓、腦動脈硬化、中風后遺癥等。本制劑收載于國家食品藥品監督管理局標準YBZ00702009、藥典業發（2000）第 319號、國家食品藥品監督管理局標準（試行）YBZ11852004[1]。該制劑執行標準多，但均未對黃芪的主成分黃芪甲苷進行含量測定。為更好控制該產品質量，采用高效液相色譜－蒸發光散射檢測(ELSD－HPLC)法測定腦絡通膠囊中黃芪甲苷的含量，現報道如下。

1 儀器與試藥

Waters e2695 HPLC色譜系統；Empower Waters工作站；Waters 2424蒸發光散射檢測器；超聲波處理器（濟寧奧波超聲電氣有限公司，批號為 JAC－300）；Mettler AE－240型電子分析天平（0.1 mg，0.01 mg）；YP202N 型電子分析天平（0.01 g）。黃芪甲苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為110781－200613，供含量測定用）；腦絡通膠囊（廣東羅定制藥有限公司，批號分別為110404，110502；四川泰華堂制藥有限公司，批號為120104；煙臺益生堂藥業有限公司，批號為111002）；乙腈為色譜純，正丁醇、氨水、乙醇為分析純，水為純化水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Hypersil ODS2柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈 － 水（30 ∶70）[2]；流速：1.0 mL ／min；柱溫：25 ℃ ；進樣量：20 μL。檢測器條件：漂移管溫度 50℃，檢測器的增益為 135，噴霧器加熱功率設置為60%。在此條件下，色譜圖見圖1。

2.2 溶液制備

精密稱取黃芪甲苷對照品16.67 mg，置25 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得每1 mL中含0.666 8 mg的黃芪甲苷對照品溶液，作為對照品貯備液[3]。取裝量差異項下內容物，混勻，精密稱定 5 g，加甲醇 100 mL，置水浴上加熱回流1 h，濾過，濾液蒸干[4]，殘渣加水10 mL使溶解，用水飽和的正丁醇提取4次，每次40 mL，合并正丁醇提取液，用氨試液充分洗滌2次，每次40 mL，棄去氨液，正丁醇蒸干，殘渣加水10 mL使溶解，用D101型大孔吸附樹脂柱（內徑 1.5 cm，長 12 cm）以水 50 mL洗脫，棄去水液，再用40%乙醇30 mL洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇80 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣用甲醇溶解并轉移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液。按膠囊處方，稱取除黃芪處的其他藥材粉末5 g，按供試品制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

干擾試驗：取2.2項下3種溶液，按擬訂的色譜條件進樣。在供試品溶液色譜中，與對照品溶液色譜相應的位置上有相同保留時間的色譜峰，而陰性對照品溶液在此保留時間無色譜峰出現，表明沒有其他成分干擾峰（見圖1）。

線性關系考察：分別精密量取對照品貯備液 1.0，2.0，3.0，5.0，7.0 mL，置 10 mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，按上述色譜條件，精密量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積的自然對數為縱坐標[5]，以黃芪甲苷對照品質量溶液濃度自然對數為橫坐標（g／L），進行線性回歸分析，得回歸方程 lnY＝1.437 9 lnX＋18.347 2，r＝0.999 9(n＝5)。結果表明，黃芪甲苷質量濃度在0.066 7～0.466 8 g／L范圍內與峰面積具有良好線性關系。

精密度試驗：精密量取20 μL對照品溶液，連續進樣5次。結果黃芪甲苷對照品峰面積的自然對數分別為16.706 4，16.790 5，16.7510，16.8052，16.7268，RSD 為 0.25%，表明儀器精密度良好。

圖1 高效液相色譜圖

穩定性試驗：取同一供試品溶液（批號為 110404），于 2，4，8，22，24 h時分別進樣測試，記錄色譜圖。結果黃芪甲苷峰面積自然對數的 RSD為0.44%，表明供試品溶液在24 h時內穩定性良好。

重復性試驗：取同一批號的樣品（批號為110404）6份，各測定2次，照樣品測定項下方法測定，計算含量。結果黃芪甲苷的平均含量為0.496 3 mg／g，RSD為 1.73%，表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：稱取已知含量的樣品（批號為110404）9份，分別精密加入對照品，按2.2項下制備方法得加樣回收率試驗溶液，精密量取20 μL注入液相色譜儀，依法測定。結果見表1。

表1 黃芪甲苷加樣回收試驗結果(n＝9)

2.4 樣品含量測定

取本品 3批，各取2份，稱取細粉 5 g，按2.2項下制備方法得樣品溶液，精密量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，用回歸方程計算含量。結果見表2。

表2 樣品含量測定結果

3 討論

ELSD是近幾年應用在色譜方面的新型檢測器，為質量通用型檢測器，其響應值取決于被測物質顆粒的數量和大小，特別是對無紫外吸收或紫外末端吸收物質具有較高的檢測靈敏度，已成為中藥分離分析的重要有效方法。

在色譜條件選擇的過程中，經試驗，乙腈 －水（30∶70）為流動相時分離效果好，峰形對稱，保留時間適宜，雜質峰達到基線分離，陰性無干擾。

對樣品提取時正丁醇用量進行了考察，分別比較了用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次50 mL，每次40 mL，每次30 mL，結果提取4次、每次40 mL的提取效果最高。

[1]YBZ11852004，國家食品藥品監督管理局標準（試行）[S].

[2]唐麗香.ELSD－HPLC法測定前列通膠囊中黃芪甲苷的含量[J].海峽藥學，2010，22（8）：105 －106.

[3]涂興明，李賜恩，吳康郁.高效液相色譜－蒸發光檢測法測定傷骨健膠囊中黃芪甲苷的含量[J].中藥材，2010，33（6）：999 －1 000.

[4]劉浩文，劉嘉儀，楊妙榮等.黃芪藥材中黃芪甲苷含量測定的兩種方法的比較研究[J].中藥新藥與臨床藥理，2011，22（6）：659 －662.

[5]朱曉威，姜啟娟.高效液相色譜法測定復方三七口服液中黃芪甲苷含量[J].中國藥業，2009，18（2）：28.