林蛙皮中膠原蛋白的提取工藝研究

屈巧鳳，姜大成

(長春中醫藥大學，長春 130117)

林蛙皮含有膠原蛋白、透明質酸、多肽、金屬元素等多種化學成分[1-4]。膠原蛋白是哺乳動物體內含量最多的蛋白質，占體內蛋白質總量的25%～30%，相當于體質量的6%[5-6]。膠原蛋白因其獨特的結構和功能，被廣泛的應用于食品、化妝品、醫學、造紙等領域[7-11]。本文從藥材粉碎度、加水量、酶的種類3個方面探討從林蛙皮中提取膠原蛋白的影響因素及優化條件。

1 實驗材料

取中國林蛙(RanatemporariachensinensisDavid)腹部的皮，干燥，將其粉碎，過60目篩，備用。微型植物試樣粉碎機(北京市永光明醫療儀器廠)、TU-1810型紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限公司)、ZK-82B型真空干燥箱(上海市實驗儀器總廠)、HH-4數顯恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司)、檸檬酸(天津市福晨化學試劑廠)、檸檬酸鈉(天津市福晨化學試劑廠)、對二甲氨基苯甲醛(天津市光復精細化工研究所)、冰醋酸(北京化工廠)、L-羥脯氨酸(L-Hydroxyproline，批號111578-200201，中國藥品生物制品檢定所)。

2 實驗方法

2.1 林蛙皮中膠原蛋白的提取方法 將上述粉碎好的林蛙皮粉末稱量5 g，加入適量的蒸餾水，以浸沒為準，再分別加入適量的胰蛋白酶和檸檬酸，在30 ℃下提取48 h,過濾，收集濾液，將濾液離心，3 000 r/min，離心15 min，收集上清液，冷凍干燥。即得膠原蛋白粗提物[12]。

2.2 膠原蛋白的含量測定方法 稱量2 g膠原蛋白粗提物，加入50 mL 6 mol/L的鹽酸，120 ℃消解8 h，放冷，揮去鹽酸，過濾，蒸餾水定容至100 mL，取1.5 mL，以1 mol/L的NaOH調整PH到6.0，定容至25 mL，吸取1 mL，加入1 mL蒸餾水、1 mL檸檬酸緩沖溶液和1 mL氯胺T，25 ℃保溫氧化10 min，然后加入3.5 mol/L高氯酸溶液1 mL，室溫放置10 min，加入對二甲氨基苯甲醛試劑1 mL，震蕩均勻(其低溫易結晶，使用前應加熱)，在65 ℃水浴中保溫10 min，使其顯色，于558 nm下測其吸光度[13-14]?！?br>