紅錐組織培養(yǎng)與快速繁殖的研究

覃子海等

摘 要 以紅錐莖段為外植體， 研究了不同激素對其再生體系建立的影響。結(jié)果表明：最適誘導(dǎo)培養(yǎng)基為 BMT+6-BA 0.3 mg/L+NAA 0.25 mg/L，誘導(dǎo)率達到了85%；最適增殖培養(yǎng)基為BMT+6-BA 0.3 mg/L+NAA 0.5 mg/L，芽增殖系數(shù)3.58，且生長健壯；單芽在1/2 BMT+IBA 1.5 mg/L+IAA 0.3 mg/L培養(yǎng)基上生根效果好，生根率82%；煉苗成功后移栽成活率達90%以上。

關(guān)鍵詞 紅錐 ；組織培養(yǎng) ；快速繁殖

分類號 Q813.1+2

Tissue Culture and Rapid Multiplication of Castanopsis hystrix

QIN Zihai1） LIU Hailong1） JIANG Hua2） QIN Pengfei3） ZHU Jiyu1）

（1 Guangxi Forestry Research Institute， Nanning，Guangxi 530001；

2 Weidu State Forest Farm of Guangxi， Laibin， Guangxi 546100；

3 Daguishan State Forest Farm of Guangxi， Hezhou， Guangxi 542800）

Abstract The effects of different hormones on regeneration system of Castanopsis hystrix were analyzed by using the stem as explants. The results showed that the suitable media for induction were BMT+6-BA 0.3 mg/L+NAA 0.25 mg/L， with the induction of 85%， the suitable media for proliferation were BMT+6-BA 0.3mg/L+NAA 0.5mg/L，with the multiplication coefficient of 3.58， moreover robust growth， the suitable media for rooting were 1/2 BMT+IBA 1.5 mg/L+IAA 0.3 mg/L， with the rooting of 82%. The seedlings had survival rate of over 90% after hardening and transplanting .

Keywords Castanopsis hystrix ； tissue culture ； rapid multiplication

紅錐（Castanopsis hystrix）屬殼斗科栲屬常綠喬木，是華南地區(qū)重要的鄉(xiāng)土闊葉優(yōu)質(zhì)珍貴用材和多用途樹種[1-2]。它具有生長快、萌芽力強、混生性能好等優(yōu)良特性，是與松、杉等針葉樹種混交造林的最理想的伴生樹種之一[3]。目前紅錐人工造林是以種子育苗造林為主，但因紅錐母樹林結(jié)實的大小年現(xiàn)象十分明顯，結(jié)實小年常因采不到種子而無法滿足造林之需求[4]。因此，建立紅錐組培再生繁殖體系，對紅錐的開發(fā)和利用具有重要的意義。關(guān)于紅錐組織培養(yǎng)形成再生植株的研究尚未見報道，本研究以紅錐莖段為外植體， 探討了不同激素組合對其再生體系建立的影響，旨在為紅錐的快速繁殖和規(guī)模化育種提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

組織培養(yǎng)材料來自于紅錐優(yōu)株的萌芽條。

1.2 方法

1.2.1 外植體消毒

剪取紅錐萌芽條帶腋芽莖段作為外植體，去葉，剪切成1～2 cm長帶1～2個腋芽或莖節(jié)小段。用75%乙醇浸泡20 s，蒸餾水清洗后置于超凈臺上，在無菌操作下用0.1%升汞消毒8 min，再用20%次氯酸鈉消毒5 min，消毒處理后用無菌水漂洗5～6次。

1.2.2 始芽的誘導(dǎo)

細(xì)胞分裂素對始芽的誘導(dǎo)起著十分重要的作用，要使嫩芽獲得較高的誘導(dǎo)率，適宜的細(xì)胞分裂素濃度甚為關(guān)鍵。離體培養(yǎng)常用的生長素為NAA，細(xì)胞分裂素為6-BA，以生長素NAA 0.25 mg/L為基礎(chǔ)，在含0.1～0.5 mg/L不同濃度的細(xì)胞分裂素6-BA的BMT培養(yǎng)基上[5]，另加CH 500 mg/L，VB2 1 mg/L，pH為5.8。每試驗處理接種20段，光照培養(yǎng)，定期進行誘導(dǎo)率的統(tǒng)計。

1.2.3 芽增殖和生長

將初代培養(yǎng)所得的芽接種在增殖培養(yǎng)基上進行繼代培養(yǎng)，調(diào)節(jié)6-BA、KT、NAA的濃度，共設(shè)計9個試驗處理，每處理接種芽20顆，不定期觀察芽的分化、增殖和生長狀況，并統(tǒng)計芽的增殖系數(shù)。

1.2.4 生根培養(yǎng)

當(dāng)紅錐芽繼代培養(yǎng)擴大繁殖到一定數(shù)量并生長到3～4 cm高時，選取生長健壯的單芽切割進行生根培養(yǎng)試驗。試驗采用L9（34）正交試驗設(shè)計，試驗設(shè)計考慮的因素為生長素IBA和NAA以及基本培養(yǎng)基BMT，因素水平安排見表1。培養(yǎng)第5天開始觀察，培養(yǎng)30d時統(tǒng)計各試驗處理的生根率。

生根率（%）=生根株數(shù)/接入的無根苗數(shù)×100%

2 結(jié)果與分析

2.1 始芽的誘導(dǎo)試驗

細(xì)胞分裂素6-BA對始芽誘導(dǎo)分化的影響效果見表2。

表2顯示，當(dāng)6-BA的濃度為0.1 mg/L時，始芽的誘導(dǎo)率很低，僅為25%，又多為生長纖細(xì)的單芽，而且部分頂芽變黃。在一定范圍內(nèi)，隨著細(xì)胞分裂素6-BA濃度增加，外植體始芽的誘導(dǎo)率也呈相應(yīng)提高趨勢，當(dāng)細(xì)胞分裂素6-BA為較高濃度0.4 mg/L時，初始芽的誘導(dǎo)率出現(xiàn)下降的趨勢，而當(dāng)濃度提高到0.5 mg/L時，始芽呈短粗密集，接種操作時極難切割剝離，且芽呈透明水腫玻璃化，不利于繼代擴繁培養(yǎng)。因此，以細(xì)胞分裂素6-BA濃度為0.3 mg/L時，有利于外植體初始始芽的誘導(dǎo)，不僅有85%較高的誘導(dǎo)率，而且每叢芽有2～3個單芽，芽生長健壯。endprint

2.2 外源激素組合對芽增殖培養(yǎng)的影響

在植物組織培養(yǎng)過程中，始芽的分化不僅要有較高的增殖系數(shù)，同時始芽還必須是生長健壯，才能達到組培快繁的要求[5]。以細(xì)胞分裂素6-BA、KT和生長素NAA為外源激素，將紅錐芽轉(zhuǎn)接在9種不同濃度梯度組合進行繼代培養(yǎng)，觀察統(tǒng)計平均在一個培養(yǎng)繼代周期內(nèi)始芽的分化增殖系數(shù)和及其生長情況，結(jié)果見表3。

激素不同種類，不同濃度對芽的增殖和生長有不用的效果，經(jīng)試驗表明，6-BA濃度對芽增殖培養(yǎng)影響最大，NAA濃度次之，KT濃度影響最小。增殖率的變化規(guī)律是：從細(xì)胞分裂素6-BA來看，當(dāng)細(xì)胞分裂素6-BA的濃度為較低0.2 mg/L時，芽在繼代培養(yǎng)30 d時，平均增殖率為2.41%，芽長勢較弱，表現(xiàn)出葉尖卷曲，部分頂芽變黃，而當(dāng)濃度增加到0.3 mg/L時，芽的增殖系數(shù)也相應(yīng)提高，達到最高的3.58，而且芽生長健壯，葉色綠，但當(dāng)濃度增加較高為0.4 mg/L時，芽的增殖率有所下降，芽的生長質(zhì)量也呈下降趨勢，表現(xiàn)出葉卷曲，芽粗短呈玻璃化；從生長素NAA來看，在3種與細(xì)胞分裂素6-BA不同組合中，濃度為0.5 mg/L時，平均增殖率最高，濃度過高或過低都不利于增殖率的提高；從細(xì)胞分裂素KT來看，在培養(yǎng)基中加入KT后，芽的增殖率反而出現(xiàn)下降，說明KT的加入不利于紅錐芽增殖培養(yǎng)。因此，紅錐在繼代培養(yǎng)時適宜芽增殖和生長的最佳外源激素組合為BMT+6-BA 0.3 mg/L+NAA 0.5 mg/L。

2.3 單芽生根誘導(dǎo)培養(yǎng)

在植物離體培養(yǎng)過程中，單芽生根率的高低是影響無性快繁速度的主要因子之一，生長素類物質(zhì)的合理應(yīng)用對生根起著至關(guān)重要的促進作用[6]。將生長健壯、葉片舒展的芽叢分割并切成單芽呈直插式接種，以BMT基本培養(yǎng)基、IAA和IBA二種不同生長素共9個處理，進行正交生根誘導(dǎo)試驗。每個試驗處理接種8瓶，每瓶25株共200株，培養(yǎng)30 d時統(tǒng)計生根率，正交試驗結(jié)果見表4，方差分析見表5。

在生長素IBA、IAA 與基本培養(yǎng)基組成的L9（34）正交生根試驗中，3個試驗因素R值大小次序為：IBA>基本培養(yǎng)基>IAA，這與方差分析的結(jié)果一致。在0.05水平上，IBA對紅錐始芽的生根起了顯著作用，不同水平間的IBA對始芽的生根差異顯著，基本培養(yǎng)基和IAA對紅錐始芽的生根沒有顯著作用。一般認(rèn)為IBA能夠促進根系條數(shù)增加，紅錐始芽對IBA敏感，對始芽生長起了顯著作用。篩選出最佳的生根培養(yǎng)基為1/2 BMT+IBA 1.5 mg/L+IAA 0.3 mg/L，生根率高達82%，且根系較多，再生植株生長健壯。

2.4 植株的移栽

將組培生根瓶苗搬出培養(yǎng)室移至大棚于自然環(huán)境下練苗5～7 d，移栽前對移栽基質(zhì)進行消毒處理，提前一天用0.2%～0.3%高錳酸鉀溶液消毒基質(zhì)，移栽當(dāng)天用自來水澆透基質(zhì)，除去基質(zhì)中殘留的高錳酸鉀，用清水漂洗干凈根部粘附的培養(yǎng)基。移栽試驗結(jié)果表明：紅心土的移栽效果最好。移栽后后要淋水保濕，保持移栽苗水分的平衡，防止移栽苗萎蔫而死。用遮光度為75%的黑網(wǎng)擋陽以避免太陽直射，注意苗床的通風(fēng)透氣，移栽后可適當(dāng)噴施一定濃度的葉面肥，使用這種方法移栽成活率在90%以上。

3 小結(jié)與討論

3.1 培養(yǎng)基的選擇

選擇適宜的培養(yǎng)基對組織培養(yǎng)成功與否至關(guān)重要，紅錐適宜的基本培養(yǎng)基為BMT。分析認(rèn)為，BMT培養(yǎng)基內(nèi)含有較高的Ca2+離子，Ca2+濃度能促進植物體內(nèi)糖分的運輸，說明高濃度的鈣元素更加有利于紅錐芽的器官分化和生長。這一點與王以紅等[5]對殼斗科植物大葉櫟組織培養(yǎng)選用的培養(yǎng)基的研究結(jié)果相一致。

3.2 芽增殖和生長

以BMT為基本培養(yǎng)基，添加細(xì)胞分裂素6-BA 0.3 mg/L和生長素NAA 0.5 mg/L，可作為紅錐芽擴繁培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基。將紅錐的芽以水平向接種于培養(yǎng)基上，培養(yǎng)前期在較弱的光照下，光照強度控制在1 000 lx左右，后期移置于3 000 lx較強的光照強度下生長，繼代培養(yǎng)周期保持在30 d左右，進行芽的分化、增殖和生長等擴繁培養(yǎng)，繼代芽可以3.58/30 d的增殖系數(shù)達到擴大繁殖目的。在紅錐芽增殖和生長的過程中，隨著繼代次數(shù)的增加，培養(yǎng)材料會出現(xiàn)褐化現(xiàn)象，在轉(zhuǎn)接的時候?qū)⒀炕坷匣牧霞羟泻笤俳拥叫迈r的培養(yǎng)基上，能在一定程度上克服褐化現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)，但是褐化問題的根源有待進一步研究。

3.3 單芽生根培養(yǎng)

可以1/2 BMT+IBA 1.5 mg/L+IAA 0.3 mg/L作為紅錐單芽生根培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基，在繼代芽中選擇生長健壯的單芽切割后接種，進行根系誘導(dǎo)培養(yǎng)。培養(yǎng)6 d時單芽基部開始長出根點，培養(yǎng)15 d時根系生長至1～1.5 cm長，形成完整的再生植株，生根率達到82%。本研究發(fā)現(xiàn)，單芽生根誘導(dǎo)與繼代芽的質(zhì)量有很強的相關(guān)性，生長健壯、葉片舒展、葉色濃綠的繼代芽則生根率高，且根系發(fā)達，因此在進行單芽生根誘導(dǎo)前，必須使繼代芽得到充分的光照，以增強光合作用促進始芽的健壯生長。

本研究所建立的紅錐組織培養(yǎng)再生繁殖體系，為紅錐優(yōu)良苗木的培育提供了一定的科學(xué)依據(jù)。

參考文獻

[1] 劉慶昌，吳國良. 植物細(xì)胞組織培養(yǎng)[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2002.

[2] 蓋鈞鎰. 試驗統(tǒng)計方法[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2000.

[3] 朱積余，蔣 燚，丘小軍. 廣西紅錐地理種源試驗初報[J]. 廣西林業(yè)科學(xué)，1997，26（2）：66-68.

[4] 朱積余，蔣 燚，潘 文. 廣西紅錐優(yōu)樹選擇標(biāo)準(zhǔn)研究[J]. 廣西林業(yè)科學(xué)，2002，9（3）：109-113.

[5] 王以紅，陳曉明，蔡 玲，等. 大葉櫟組織培養(yǎng)再生植株的研究[J]. 廣西林業(yè)科學(xué)， 2009，38（2）：71-74.

[6] 吳幼媚，王以紅，蔡 玲，等. 香樟優(yōu)良無性系快繁技術(shù)的研究[J]. 廣西農(nóng)業(yè)生物科學(xué)，2006，25（1）：60-64.endprint

2.2 外源激素組合對芽增殖培養(yǎng)的影響

在植物組織培養(yǎng)過程中，始芽的分化不僅要有較高的增殖系數(shù)，同時始芽還必須是生長健壯，才能達到組培快繁的要求[5]。以細(xì)胞分裂素6-BA、KT和生長素NAA為外源激素，將紅錐芽轉(zhuǎn)接在9種不同濃度梯度組合進行繼代培養(yǎng)，觀察統(tǒng)計平均在一個培養(yǎng)繼代周期內(nèi)始芽的分化增殖系數(shù)和及其生長情況，結(jié)果見表3。

激素不同種類，不同濃度對芽的增殖和生長有不用的效果，經(jīng)試驗表明，6-BA濃度對芽增殖培養(yǎng)影響最大，NAA濃度次之，KT濃度影響最小。增殖率的變化規(guī)律是：從細(xì)胞分裂素6-BA來看，當(dāng)細(xì)胞分裂素6-BA的濃度為較低0.2 mg/L時，芽在繼代培養(yǎng)30 d時，平均增殖率為2.41%，芽長勢較弱，表現(xiàn)出葉尖卷曲，部分頂芽變黃，而當(dāng)濃度增加到0.3 mg/L時，芽的增殖系數(shù)也相應(yīng)提高，達到最高的3.58，而且芽生長健壯，葉色綠，但當(dāng)濃度增加較高為0.4 mg/L時，芽的增殖率有所下降，芽的生長質(zhì)量也呈下降趨勢，表現(xiàn)出葉卷曲，芽粗短呈玻璃化；從生長素NAA來看，在3種與細(xì)胞分裂素6-BA不同組合中，濃度為0.5 mg/L時，平均增殖率最高，濃度過高或過低都不利于增殖率的提高；從細(xì)胞分裂素KT來看，在培養(yǎng)基中加入KT后，芽的增殖率反而出現(xiàn)下降，說明KT的加入不利于紅錐芽增殖培養(yǎng)。因此，紅錐在繼代培養(yǎng)時適宜芽增殖和生長的最佳外源激素組合為BMT+6-BA 0.3 mg/L+NAA 0.5 mg/L。

2.3 單芽生根誘導(dǎo)培養(yǎng)

在植物離體培養(yǎng)過程中，單芽生根率的高低是影響無性快繁速度的主要因子之一，生長素類物質(zhì)的合理應(yīng)用對生根起著至關(guān)重要的促進作用[6]。將生長健壯、葉片舒展的芽叢分割并切成單芽呈直插式接種，以BMT基本培養(yǎng)基、IAA和IBA二種不同生長素共9個處理，進行正交生根誘導(dǎo)試驗。每個試驗處理接種8瓶，每瓶25株共200株，培養(yǎng)30 d時統(tǒng)計生根率，正交試驗結(jié)果見表4，方差分析見表5。

在生長素IBA、IAA 與基本培養(yǎng)基組成的L9（34）正交生根試驗中，3個試驗因素R值大小次序為：IBA>基本培養(yǎng)基>IAA，這與方差分析的結(jié)果一致。在0.05水平上，IBA對紅錐始芽的生根起了顯著作用，不同水平間的IBA對始芽的生根差異顯著，基本培養(yǎng)基和IAA對紅錐始芽的生根沒有顯著作用。一般認(rèn)為IBA能夠促進根系條數(shù)增加，紅錐始芽對IBA敏感，對始芽生長起了顯著作用。篩選出最佳的生根培養(yǎng)基為1/2 BMT+IBA 1.5 mg/L+IAA 0.3 mg/L，生根率高達82%，且根系較多，再生植株生長健壯。

2.4 植株的移栽

將組培生根瓶苗搬出培養(yǎng)室移至大棚于自然環(huán)境下練苗5～7 d，移栽前對移栽基質(zhì)進行消毒處理，提前一天用0.2%～0.3%高錳酸鉀溶液消毒基質(zhì)，移栽當(dāng)天用自來水澆透基質(zhì)，除去基質(zhì)中殘留的高錳酸鉀，用清水漂洗干凈根部粘附的培養(yǎng)基。移栽試驗結(jié)果表明：紅心土的移栽效果最好。移栽后后要淋水保濕，保持移栽苗水分的平衡，防止移栽苗萎蔫而死。用遮光度為75%的黑網(wǎng)擋陽以避免太陽直射，注意苗床的通風(fēng)透氣，移栽后可適當(dāng)噴施一定濃度的葉面肥，使用這種方法移栽成活率在90%以上。

3 小結(jié)與討論

3.1 培養(yǎng)基的選擇

選擇適宜的培養(yǎng)基對組織培養(yǎng)成功與否至關(guān)重要，紅錐適宜的基本培養(yǎng)基為BMT。分析認(rèn)為，BMT培養(yǎng)基內(nèi)含有較高的Ca2+離子，Ca2+濃度能促進植物體內(nèi)糖分的運輸，說明高濃度的鈣元素更加有利于紅錐芽的器官分化和生長。這一點與王以紅等[5]對殼斗科植物大葉櫟組織培養(yǎng)選用的培養(yǎng)基的研究結(jié)果相一致。

3.2 芽增殖和生長

以BMT為基本培養(yǎng)基，添加細(xì)胞分裂素6-BA 0.3 mg/L和生長素NAA 0.5 mg/L，可作為紅錐芽擴繁培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基。將紅錐的芽以水平向接種于培養(yǎng)基上，培養(yǎng)前期在較弱的光照下，光照強度控制在1 000 lx左右，后期移置于3 000 lx較強的光照強度下生長，繼代培養(yǎng)周期保持在30 d左右，進行芽的分化、增殖和生長等擴繁培養(yǎng)，繼代芽可以3.58/30 d的增殖系數(shù)達到擴大繁殖目的。在紅錐芽增殖和生長的過程中，隨著繼代次數(shù)的增加，培養(yǎng)材料會出現(xiàn)褐化現(xiàn)象，在轉(zhuǎn)接的時候?qū)⒀炕坷匣牧霞羟泻笤俳拥叫迈r的培養(yǎng)基上，能在一定程度上克服褐化現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)，但是褐化問題的根源有待進一步研究。

3.3 單芽生根培養(yǎng)

可以1/2 BMT+IBA 1.5 mg/L+IAA 0.3 mg/L作為紅錐單芽生根培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基，在繼代芽中選擇生長健壯的單芽切割后接種，進行根系誘導(dǎo)培養(yǎng)。培養(yǎng)6 d時單芽基部開始長出根點，培養(yǎng)15 d時根系生長至1～1.5 cm長，形成完整的再生植株，生根率達到82%。本研究發(fā)現(xiàn)，單芽生根誘導(dǎo)與繼代芽的質(zhì)量有很強的相關(guān)性，生長健壯、葉片舒展、葉色濃綠的繼代芽則生根率高，且根系發(fā)達，因此在進行單芽生根誘導(dǎo)前，必須使繼代芽得到充分的光照，以增強光合作用促進始芽的健壯生長。

本研究所建立的紅錐組織培養(yǎng)再生繁殖體系，為紅錐優(yōu)良苗木的培育提供了一定的科學(xué)依據(jù)。

參考文獻

[1] 劉慶昌，吳國良. 植物細(xì)胞組織培養(yǎng)[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2002.

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[4] 朱積余，蔣 燚，潘 文. 廣西紅錐優(yōu)樹選擇標(biāo)準(zhǔn)研究[J]. 廣西林業(yè)科學(xué)，2002，9（3）：109-113.

[5] 王以紅，陳曉明，蔡 玲，等. 大葉櫟組織培養(yǎng)再生植株的研究[J]. 廣西林業(yè)科學(xué)， 2009，38（2）：71-74.

[6] 吳幼媚，王以紅，蔡 玲，等. 香樟優(yōu)良無性系快繁技術(shù)的研究[J]. 廣西農(nóng)業(yè)生物科學(xué)，2006，25（1）：60-64.endprint

2.2 外源激素組合對芽增殖培養(yǎng)的影響

在植物組織培養(yǎng)過程中，始芽的分化不僅要有較高的增殖系數(shù)，同時始芽還必須是生長健壯，才能達到組培快繁的要求[5]。以細(xì)胞分裂素6-BA、KT和生長素NAA為外源激素，將紅錐芽轉(zhuǎn)接在9種不同濃度梯度組合進行繼代培養(yǎng)，觀察統(tǒng)計平均在一個培養(yǎng)繼代周期內(nèi)始芽的分化增殖系數(shù)和及其生長情況，結(jié)果見表3。

激素不同種類，不同濃度對芽的增殖和生長有不用的效果，經(jīng)試驗表明，6-BA濃度對芽增殖培養(yǎng)影響最大，NAA濃度次之，KT濃度影響最小。增殖率的變化規(guī)律是：從細(xì)胞分裂素6-BA來看，當(dāng)細(xì)胞分裂素6-BA的濃度為較低0.2 mg/L時，芽在繼代培養(yǎng)30 d時，平均增殖率為2.41%，芽長勢較弱，表現(xiàn)出葉尖卷曲，部分頂芽變黃，而當(dāng)濃度增加到0.3 mg/L時，芽的增殖系數(shù)也相應(yīng)提高，達到最高的3.58，而且芽生長健壯，葉色綠，但當(dāng)濃度增加較高為0.4 mg/L時，芽的增殖率有所下降，芽的生長質(zhì)量也呈下降趨勢，表現(xiàn)出葉卷曲，芽粗短呈玻璃化；從生長素NAA來看，在3種與細(xì)胞分裂素6-BA不同組合中，濃度為0.5 mg/L時，平均增殖率最高，濃度過高或過低都不利于增殖率的提高；從細(xì)胞分裂素KT來看，在培養(yǎng)基中加入KT后，芽的增殖率反而出現(xiàn)下降，說明KT的加入不利于紅錐芽增殖培養(yǎng)。因此，紅錐在繼代培養(yǎng)時適宜芽增殖和生長的最佳外源激素組合為BMT+6-BA 0.3 mg/L+NAA 0.5 mg/L。

2.3 單芽生根誘導(dǎo)培養(yǎng)

在植物離體培養(yǎng)過程中，單芽生根率的高低是影響無性快繁速度的主要因子之一，生長素類物質(zhì)的合理應(yīng)用對生根起著至關(guān)重要的促進作用[6]。將生長健壯、葉片舒展的芽叢分割并切成單芽呈直插式接種，以BMT基本培養(yǎng)基、IAA和IBA二種不同生長素共9個處理，進行正交生根誘導(dǎo)試驗。每個試驗處理接種8瓶，每瓶25株共200株，培養(yǎng)30 d時統(tǒng)計生根率，正交試驗結(jié)果見表4，方差分析見表5。

在生長素IBA、IAA 與基本培養(yǎng)基組成的L9（34）正交生根試驗中，3個試驗因素R值大小次序為：IBA>基本培養(yǎng)基>IAA，這與方差分析的結(jié)果一致。在0.05水平上，IBA對紅錐始芽的生根起了顯著作用，不同水平間的IBA對始芽的生根差異顯著，基本培養(yǎng)基和IAA對紅錐始芽的生根沒有顯著作用。一般認(rèn)為IBA能夠促進根系條數(shù)增加，紅錐始芽對IBA敏感，對始芽生長起了顯著作用。篩選出最佳的生根培養(yǎng)基為1/2 BMT+IBA 1.5 mg/L+IAA 0.3 mg/L，生根率高達82%，且根系較多，再生植株生長健壯。

2.4 植株的移栽

將組培生根瓶苗搬出培養(yǎng)室移至大棚于自然環(huán)境下練苗5～7 d，移栽前對移栽基質(zhì)進行消毒處理，提前一天用0.2%～0.3%高錳酸鉀溶液消毒基質(zhì)，移栽當(dāng)天用自來水澆透基質(zhì)，除去基質(zhì)中殘留的高錳酸鉀，用清水漂洗干凈根部粘附的培養(yǎng)基。移栽試驗結(jié)果表明：紅心土的移栽效果最好。移栽后后要淋水保濕，保持移栽苗水分的平衡，防止移栽苗萎蔫而死。用遮光度為75%的黑網(wǎng)擋陽以避免太陽直射，注意苗床的通風(fēng)透氣，移栽后可適當(dāng)噴施一定濃度的葉面肥，使用這種方法移栽成活率在90%以上。

3 小結(jié)與討論

3.1 培養(yǎng)基的選擇

選擇適宜的培養(yǎng)基對組織培養(yǎng)成功與否至關(guān)重要，紅錐適宜的基本培養(yǎng)基為BMT。分析認(rèn)為，BMT培養(yǎng)基內(nèi)含有較高的Ca2+離子，Ca2+濃度能促進植物體內(nèi)糖分的運輸，說明高濃度的鈣元素更加有利于紅錐芽的器官分化和生長。這一點與王以紅等[5]對殼斗科植物大葉櫟組織培養(yǎng)選用的培養(yǎng)基的研究結(jié)果相一致。

3.2 芽增殖和生長

以BMT為基本培養(yǎng)基，添加細(xì)胞分裂素6-BA 0.3 mg/L和生長素NAA 0.5 mg/L，可作為紅錐芽擴繁培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基。將紅錐的芽以水平向接種于培養(yǎng)基上，培養(yǎng)前期在較弱的光照下，光照強度控制在1 000 lx左右，后期移置于3 000 lx較強的光照強度下生長，繼代培養(yǎng)周期保持在30 d左右，進行芽的分化、增殖和生長等擴繁培養(yǎng)，繼代芽可以3.58/30 d的增殖系數(shù)達到擴大繁殖目的。在紅錐芽增殖和生長的過程中，隨著繼代次數(shù)的增加，培養(yǎng)材料會出現(xiàn)褐化現(xiàn)象，在轉(zhuǎn)接的時候?qū)⒀炕坷匣牧霞羟泻笤俳拥叫迈r的培養(yǎng)基上，能在一定程度上克服褐化現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)，但是褐化問題的根源有待進一步研究。

3.3 單芽生根培養(yǎng)

可以1/2 BMT+IBA 1.5 mg/L+IAA 0.3 mg/L作為紅錐單芽生根培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基，在繼代芽中選擇生長健壯的單芽切割后接種，進行根系誘導(dǎo)培養(yǎng)。培養(yǎng)6 d時單芽基部開始長出根點，培養(yǎng)15 d時根系生長至1～1.5 cm長，形成完整的再生植株，生根率達到82%。本研究發(fā)現(xiàn)，單芽生根誘導(dǎo)與繼代芽的質(zhì)量有很強的相關(guān)性，生長健壯、葉片舒展、葉色濃綠的繼代芽則生根率高，且根系發(fā)達，因此在進行單芽生根誘導(dǎo)前，必須使繼代芽得到充分的光照，以增強光合作用促進始芽的健壯生長。

本研究所建立的紅錐組織培養(yǎng)再生繁殖體系，為紅錐優(yōu)良苗木的培育提供了一定的科學(xué)依據(jù)。

參考文獻

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