香樟精油的體外抑菌活性秦海燕

劉如沁　黃愛玲　索志榮

摘 要：采用抑菌圈實驗和二倍稀釋法研究了香樟精油對金黃色葡萄球菌的抑菌活性、最低抑菌濃度（MIC）。結果表明：香樟精油對金黃色葡萄球菌抑菌活性顯著，當香樟精油的濃度大于12.5%時，可完全抑制金黃色葡萄球菌的生長。

關鍵詞：香樟；精油；抑菌香樟（Cinamomum Camphora （Linn.）Presl）系樟樹屬的常綠喬木植物，其根、木材、枝和葉均可提取香樟精油，它們不僅是醫藥上樟腦、龍腦的主要原料，還具有凈化有毒空氣的能力及抗癌功效[1]。近年的許多研究發現，精油具有強烈的抑制或殺死真菌等微生物的特性[2，3]。當今在動植物病原菌對化學殺菌劑產生抗藥性日漸加劇的形勢下，精油因具有自然揮發的特性，可作為一種有待開發的新型殺菌物質進行研究[4]。本實驗采用試管二倍稀釋法聯合瓊脂平板法對香樟精油對金黃色葡萄球菌的抑菌效果進行了研究和探討，以便為進一步開發治療呼吸道疾病新的抗菌藥物提供理論依據，也為開發香樟精油在天然消毒殺菌產品利用方面提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

供試菌種金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus ATCC26112），購于中國醫學菌種保藏中心。香樟油由西南科技大學天然藥物化學實驗室提供。

1.2 實驗方法

1.2.1 香樟精油稀釋液的制備

香樟精油不溶于水，以丙酮作為稀釋劑。精確量取5ml香樟精油，加入5ml丙酮，震蕩搖勻，配置成50%的溶液，裝入棕色瓶作為母液，二倍稀釋法配制一系列濃度梯度的精油溶液。

1.2.2 菌懸液的制備

將供試菌種在斜面培養基上活化2代后，用接種環從斜面上輕刮菌苔一環，收集到內盛10mL無菌水的三角瓶中，配成終濃度為106CFU/mL的菌懸液，備用。

1.2.3 香樟油的抑菌活性測定

待培養皿中培養基凝固后，在無菌條件下，取0.2ml菌懸液涂布到培養皿上。將D=6mm的無菌濾紙片在香樟油中浸泡2小時，瀝干，平鋪在培養皿上，每平板鋪2片。以丙酮作為空白對照，以1.0mg/ml氨芐青霉素作為陽性對照，于37℃恒溫箱內培養24h后觀察，并測定抑菌圈的直徑。平行實驗3次。抑菌圈試驗判定標準：濾紙片直徑為6mm時，抑菌圈直徑大于20mm，極敏；15～20mm，高敏；10～15mm，中敏；7～9mm，低敏；小于7mm，不敏感[5]。

1.2.4 最小抑菌濃度（MIC）的測定[6]

將不同濃度梯度的香樟精油溶液各1mL加入融化的固體培養基中混合均勻，待培養基凝固后，即得含各濃度香樟油的供試樣品的平板。在平板上畫線接種菌液，37℃培養1d。觀察菌體生長情況，生長菌體為陽性（+），不生長菌體為陰性（-），以不生長菌的試驗樣品的最低濃度為香樟油最低抑菌濃度（MIC），以丙酮作為陰性對照。重復2次。

2 結果與分析

香樟精油對金黃色葡萄球菌抑菌活性測定結果

表1 不同濃度香樟精油作用下金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑

表2 香樟精油對金黃色葡萄球菌最小抑菌濃度的測定

“+”表示培養基有菌落生長，“-”表示培養基未出現菌落。

從表1、2看出，不同濃度香樟精油對金黃色葡萄球菌抑菌活性不同。純精油對金黃色葡萄球菌的抑菌圈最大，為13.1mm，在10～15mm之間，屬中敏。精油抑菌圈的直徑隨體積分數的增大而增強。最小抑菌濃度MIC值是測定抗菌物質抗菌活性大小的指標。當濃度降到到12.5%時平板中沒有檢出菌落，6.25%時平板中檢出少量菌落，當香樟精油的濃度大于12.5%時，可完全抑制金黃色葡萄球菌的生長，故其對金黃色葡萄球菌的MIC為12.5%。

3 結束語

該實驗表明香樟精油對金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑為13.1mm，金黃色葡萄球菌對香樟精油中度敏感。馬英姿[7]、李愛民[8]等的實驗結果也發現香樟精油對金黃色葡萄球菌有明顯的抑菌效果。香樟油主要成分為樟腦、β-芳樟醇（24.09%）、桉油醇（15.72%）、α-松油醇（11.20%）、蛇床-6-烯-4-醇（5.724%）[9]，其中，芳樟醇具有抗細菌、抗真菌和抗病毒作用[10]，是樟樹葉精油中的主要抗菌成分。香樟是我國亞熱帶綠闊葉林的主要樹種之一，資源豐富，加快其抑菌活性及機理的研究有利于開發香樟油的開發和利用。

參考文獻

[1]史娟.香樟葉中精油的提取[J].江蘇調味副食品.2011，28（2）：16-19.

[2]楊致年，曾超，朱宗良，等.植物精油的抗菌性[J].四川林業科技，2000，21（3）：37-39.

[3]孫偉，肖家祁.中草藥精油對細菌生長抑制的實驗研究[J].上海中醫藥雜志，2005，39（10）：54-55.

[4]楊森艷，姚雷.檸檬草精油抗菌性研究[J]，上海交通大學學報，2005，23（4）：375-382.

[5]中華人民共和國衛生部醫政司.全國臨床檢驗操作規程3版[M].南京：東南大學出版社，1997.

[6]吳均，楊欽滟，趙曉娟，等.山蒼子油的抑菌活性及機理研究[J]，食品工業科技，2013，34（17）：119-125.

[7]馬英姿，譚琴，李恒熠，等.樟樹葉及天竺桂葉的精油抑菌活性研究[J].中南林業科技大學學報，2009，29（1）：36-40.

[8]李愛民，唐永勤，卿玉波.樟油的提取及其抑菌性研究[J].福建林業科技，2006，33（4）：121-123.

[9]劉亞，李茂昌，張永聰，等.香樟樹葉揮發油的化學成分研究[J].分析試驗室，2008，27（1）：88-92.

[10]國家醫藥管理局中草藥情報中心站.植物藥有效成分手冊[M].北京：人民衛生出版社，1986.

作者簡介：秦海燕（1975-），女，碩士，講師，主要從事藥用植物活性研究。endprint

摘 要：采用抑菌圈實驗和二倍稀釋法研究了香樟精油對金黃色葡萄球菌的抑菌活性、最低抑菌濃度（MIC）。結果表明：香樟精油對金黃色葡萄球菌抑菌活性顯著，當香樟精油的濃度大于12.5%時，可完全抑制金黃色葡萄球菌的生長。

關鍵詞：香樟；精油；抑菌香樟（Cinamomum Camphora （Linn.）Presl）系樟樹屬的常綠喬木植物，其根、木材、枝和葉均可提取香樟精油，它們不僅是醫藥上樟腦、龍腦的主要原料，還具有凈化有毒空氣的能力及抗癌功效[1]。近年的許多研究發現，精油具有強烈的抑制或殺死真菌等微生物的特性[2，3]。當今在動植物病原菌對化學殺菌劑產生抗藥性日漸加劇的形勢下，精油因具有自然揮發的特性，可作為一種有待開發的新型殺菌物質進行研究[4]。本實驗采用試管二倍稀釋法聯合瓊脂平板法對香樟精油對金黃色葡萄球菌的抑菌效果進行了研究和探討，以便為進一步開發治療呼吸道疾病新的抗菌藥物提供理論依據，也為開發香樟精油在天然消毒殺菌產品利用方面提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

供試菌種金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus ATCC26112），購于中國醫學菌種保藏中心。香樟油由西南科技大學天然藥物化學實驗室提供。

1.2 實驗方法

1.2.1 香樟精油稀釋液的制備

香樟精油不溶于水，以丙酮作為稀釋劑。精確量取5ml香樟精油，加入5ml丙酮，震蕩搖勻，配置成50%的溶液，裝入棕色瓶作為母液，二倍稀釋法配制一系列濃度梯度的精油溶液。

1.2.2 菌懸液的制備

將供試菌種在斜面培養基上活化2代后，用接種環從斜面上輕刮菌苔一環，收集到內盛10mL無菌水的三角瓶中，配成終濃度為106CFU/mL的菌懸液，備用。

1.2.3 香樟油的抑菌活性測定

待培養皿中培養基凝固后，在無菌條件下，取0.2ml菌懸液涂布到培養皿上。將D=6mm的無菌濾紙片在香樟油中浸泡2小時，瀝干，平鋪在培養皿上，每平板鋪2片。以丙酮作為空白對照，以1.0mg/ml氨芐青霉素作為陽性對照，于37℃恒溫箱內培養24h后觀察，并測定抑菌圈的直徑。平行實驗3次。抑菌圈試驗判定標準：濾紙片直徑為6mm時，抑菌圈直徑大于20mm，極敏；15～20mm，高敏；10～15mm，中敏；7～9mm，低敏；小于7mm，不敏感[5]。

1.2.4 最小抑菌濃度（MIC）的測定[6]

將不同濃度梯度的香樟精油溶液各1mL加入融化的固體培養基中混合均勻，待培養基凝固后，即得含各濃度香樟油的供試樣品的平板。在平板上畫線接種菌液，37℃培養1d。觀察菌體生長情況，生長菌體為陽性（+），不生長菌體為陰性（-），以不生長菌的試驗樣品的最低濃度為香樟油最低抑菌濃度（MIC），以丙酮作為陰性對照。重復2次。

2 結果與分析

香樟精油對金黃色葡萄球菌抑菌活性測定結果

表1 不同濃度香樟精油作用下金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑

表2 香樟精油對金黃色葡萄球菌最小抑菌濃度的測定

“+”表示培養基有菌落生長，“-”表示培養基未出現菌落。

從表1、2看出，不同濃度香樟精油對金黃色葡萄球菌抑菌活性不同。純精油對金黃色葡萄球菌的抑菌圈最大，為13.1mm，在10～15mm之間，屬中敏。精油抑菌圈的直徑隨體積分數的增大而增強。最小抑菌濃度MIC值是測定抗菌物質抗菌活性大小的指標。當濃度降到到12.5%時平板中沒有檢出菌落，6.25%時平板中檢出少量菌落，當香樟精油的濃度大于12.5%時，可完全抑制金黃色葡萄球菌的生長，故其對金黃色葡萄球菌的MIC為12.5%。

3 結束語

該實驗表明香樟精油對金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑為13.1mm，金黃色葡萄球菌對香樟精油中度敏感。馬英姿[7]、李愛民[8]等的實驗結果也發現香樟精油對金黃色葡萄球菌有明顯的抑菌效果。香樟油主要成分為樟腦、β-芳樟醇（24.09%）、桉油醇（15.72%）、α-松油醇（11.20%）、蛇床-6-烯-4-醇（5.724%）[9]，其中，芳樟醇具有抗細菌、抗真菌和抗病毒作用[10]，是樟樹葉精油中的主要抗菌成分。香樟是我國亞熱帶綠闊葉林的主要樹種之一，資源豐富，加快其抑菌活性及機理的研究有利于開發香樟油的開發和利用。

參考文獻

[1]史娟.香樟葉中精油的提取[J].江蘇調味副食品.2011，28（2）：16-19.

[2]楊致年，曾超，朱宗良，等.植物精油的抗菌性[J].四川林業科技，2000，21（3）：37-39.

[3]孫偉，肖家祁.中草藥精油對細菌生長抑制的實驗研究[J].上海中醫藥雜志，2005，39（10）：54-55.

[4]楊森艷，姚雷.檸檬草精油抗菌性研究[J]，上海交通大學學報，2005，23（4）：375-382.

[5]中華人民共和國衛生部醫政司.全國臨床檢驗操作規程3版[M].南京：東南大學出版社，1997.

[6]吳均，楊欽滟，趙曉娟，等.山蒼子油的抑菌活性及機理研究[J]，食品工業科技，2013，34（17）：119-125.

[7]馬英姿，譚琴，李恒熠，等.樟樹葉及天竺桂葉的精油抑菌活性研究[J].中南林業科技大學學報，2009，29（1）：36-40.

[8]李愛民，唐永勤，卿玉波.樟油的提取及其抑菌性研究[J].福建林業科技，2006，33（4）：121-123.

[9]劉亞，李茂昌，張永聰，等.香樟樹葉揮發油的化學成分研究[J].分析試驗室，2008，27（1）：88-92.

[10]國家醫藥管理局中草藥情報中心站.植物藥有效成分手冊[M].北京：人民衛生出版社，1986.

作者簡介：秦海燕（1975-），女，碩士，講師，主要從事藥用植物活性研究。endprint

摘 要：采用抑菌圈實驗和二倍稀釋法研究了香樟精油對金黃色葡萄球菌的抑菌活性、最低抑菌濃度（MIC）。結果表明：香樟精油對金黃色葡萄球菌抑菌活性顯著，當香樟精油的濃度大于12.5%時，可完全抑制金黃色葡萄球菌的生長。

關鍵詞：香樟；精油；抑菌香樟（Cinamomum Camphora （Linn.）Presl）系樟樹屬的常綠喬木植物，其根、木材、枝和葉均可提取香樟精油，它們不僅是醫藥上樟腦、龍腦的主要原料，還具有凈化有毒空氣的能力及抗癌功效[1]。近年的許多研究發現，精油具有強烈的抑制或殺死真菌等微生物的特性[2，3]。當今在動植物病原菌對化學殺菌劑產生抗藥性日漸加劇的形勢下，精油因具有自然揮發的特性，可作為一種有待開發的新型殺菌物質進行研究[4]。本實驗采用試管二倍稀釋法聯合瓊脂平板法對香樟精油對金黃色葡萄球菌的抑菌效果進行了研究和探討，以便為進一步開發治療呼吸道疾病新的抗菌藥物提供理論依據，也為開發香樟精油在天然消毒殺菌產品利用方面提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

供試菌種金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus ATCC26112），購于中國醫學菌種保藏中心。香樟油由西南科技大學天然藥物化學實驗室提供。

1.2 實驗方法

1.2.1 香樟精油稀釋液的制備

香樟精油不溶于水，以丙酮作為稀釋劑。精確量取5ml香樟精油，加入5ml丙酮，震蕩搖勻，配置成50%的溶液，裝入棕色瓶作為母液，二倍稀釋法配制一系列濃度梯度的精油溶液。

1.2.2 菌懸液的制備

將供試菌種在斜面培養基上活化2代后，用接種環從斜面上輕刮菌苔一環，收集到內盛10mL無菌水的三角瓶中，配成終濃度為106CFU/mL的菌懸液，備用。

1.2.3 香樟油的抑菌活性測定

待培養皿中培養基凝固后，在無菌條件下，取0.2ml菌懸液涂布到培養皿上。將D=6mm的無菌濾紙片在香樟油中浸泡2小時，瀝干，平鋪在培養皿上，每平板鋪2片。以丙酮作為空白對照，以1.0mg/ml氨芐青霉素作為陽性對照，于37℃恒溫箱內培養24h后觀察，并測定抑菌圈的直徑。平行實驗3次。抑菌圈試驗判定標準：濾紙片直徑為6mm時，抑菌圈直徑大于20mm，極敏；15～20mm，高敏；10～15mm，中敏；7～9mm，低敏；小于7mm，不敏感[5]。

1.2.4 最小抑菌濃度（MIC）的測定[6]

將不同濃度梯度的香樟精油溶液各1mL加入融化的固體培養基中混合均勻，待培養基凝固后，即得含各濃度香樟油的供試樣品的平板。在平板上畫線接種菌液，37℃培養1d。觀察菌體生長情況，生長菌體為陽性（+），不生長菌體為陰性（-），以不生長菌的試驗樣品的最低濃度為香樟油最低抑菌濃度（MIC），以丙酮作為陰性對照。重復2次。

2 結果與分析

香樟精油對金黃色葡萄球菌抑菌活性測定結果

表1 不同濃度香樟精油作用下金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑

表2 香樟精油對金黃色葡萄球菌最小抑菌濃度的測定

“+”表示培養基有菌落生長，“-”表示培養基未出現菌落。

從表1、2看出，不同濃度香樟精油對金黃色葡萄球菌抑菌活性不同。純精油對金黃色葡萄球菌的抑菌圈最大，為13.1mm，在10～15mm之間，屬中敏。精油抑菌圈的直徑隨體積分數的增大而增強。最小抑菌濃度MIC值是測定抗菌物質抗菌活性大小的指標。當濃度降到到12.5%時平板中沒有檢出菌落，6.25%時平板中檢出少量菌落，當香樟精油的濃度大于12.5%時，可完全抑制金黃色葡萄球菌的生長，故其對金黃色葡萄球菌的MIC為12.5%。

3 結束語

該實驗表明香樟精油對金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑為13.1mm，金黃色葡萄球菌對香樟精油中度敏感。馬英姿[7]、李愛民[8]等的實驗結果也發現香樟精油對金黃色葡萄球菌有明顯的抑菌效果。香樟油主要成分為樟腦、β-芳樟醇（24.09%）、桉油醇（15.72%）、α-松油醇（11.20%）、蛇床-6-烯-4-醇（5.724%）[9]，其中，芳樟醇具有抗細菌、抗真菌和抗病毒作用[10]，是樟樹葉精油中的主要抗菌成分。香樟是我國亞熱帶綠闊葉林的主要樹種之一，資源豐富，加快其抑菌活性及機理的研究有利于開發香樟油的開發和利用。

參考文獻

[1]史娟.香樟葉中精油的提取[J].江蘇調味副食品.2011，28（2）：16-19.

[2]楊致年，曾超，朱宗良，等.植物精油的抗菌性[J].四川林業科技，2000，21（3）：37-39.

[3]孫偉，肖家祁.中草藥精油對細菌生長抑制的實驗研究[J].上海中醫藥雜志，2005，39（10）：54-55.

[4]楊森艷，姚雷.檸檬草精油抗菌性研究[J]，上海交通大學學報，2005，23（4）：375-382.

[5]中華人民共和國衛生部醫政司.全國臨床檢驗操作規程3版[M].南京：東南大學出版社，1997.

[6]吳均，楊欽滟，趙曉娟，等.山蒼子油的抑菌活性及機理研究[J]，食品工業科技，2013，34（17）：119-125.

[7]馬英姿，譚琴，李恒熠，等.樟樹葉及天竺桂葉的精油抑菌活性研究[J].中南林業科技大學學報，2009，29（1）：36-40.

[8]李愛民，唐永勤，卿玉波.樟油的提取及其抑菌性研究[J].福建林業科技，2006，33（4）：121-123.

[9]劉亞，李茂昌，張永聰，等.香樟樹葉揮發油的化學成分研究[J].分析試驗室，2008，27（1）：88-92.

[10]國家醫藥管理局中草藥情報中心站.植物藥有效成分手冊[M].北京：人民衛生出版社，1986.

作者簡介：秦海燕（1975-），女，碩士，講師，主要從事藥用植物活性研究。endprint