BALB/c突變卷毛小鼠血液學指標的檢測分析

李瑞生，李曉娟，湯紫榮，姜棋予，李 蓓，侯 俊

(1. 解放軍第302醫(yī)院實驗技術(shù)研究保障中心，北京 100039；2. 解放軍第302醫(yī)院感染控制科，北京 100039)

血液生理生化指標是反映實驗動物是否健康和建立標準化動物模型的一項重要內(nèi)容，也是探討發(fā)病機制、生理學、藥理學和毒理學等實驗研究的重要參考值[1]。尤其對于基因突變、轉(zhuǎn)基因和基因敲除等所建立的動物模型，其血液生理生化指標的檢測顯得尤為重要[2]。2012年本實驗室發(fā)現(xiàn)了一只被毛卷曲的BALB/c自發(fā)突變小鼠，通過近交繁殖已建立了純系突變卷毛小鼠，為了探討B(tài)ALB/c突變卷毛小鼠其血液學指標與正常BALB/c小鼠是否發(fā)生了變異。本實驗選取6周齡的BALB/c突變卷毛小鼠和正常小鼠，對其血液學的8項生理指標和15項血清電解質(zhì)及生化指標進行了檢測分析，以期了解BALB/c突變卷毛小鼠的血液學指標與正常小鼠之間是否存在差異，旨在探討突變基因?qū)π∈蟮难簩W指標是否產(chǎn)生影響，也為今后建立和應(yīng)用BALB/c突變卷毛小鼠模型提供理論參考。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

BALB/c突變卷毛小鼠來源于本實驗室自繁(全同胞兄妹交配)，選擇6周齡BALB/c突變卷毛小鼠20只(雌雄各半)；同時選擇6周齡正常BALB/c小鼠20只(雌雄各半)，其來源于軍事醫(yī)學科學院實驗動物中心，許可證號【SCXK(軍)2012-0004】，本實驗室具有SPF級實驗動物使用許可證書【SYXK(軍)2012-0010】。

1.2 儀器設(shè)備

7020全自動生化儀(日本日立公司)；KX-21N全自動血球分析儀(日本Sysmex公司)；5415R離心機(Eppendoff公司)。

1.3 方法

1.3.1 血液生理指標測定

采集小鼠尾血20 μL，用全自動血細胞分析儀檢測以下血常規(guī)指標：紅細胞(RBC)、白細胞(WBC)、血紅蛋白濃度(HGB)、血細胞壓積(HCT)、平均血細胞容積(MCV)、平均血細胞血紅蛋白量(MCH)、平均血細胞血紅蛋白濃度(MCHC)、血小板計數(shù)(PLT)等8項指標。

1.3.2 血清生化與電解質(zhì)指標測定

小鼠于采血前禁食12 h，利用眼球摘除法采血1 mL于EP管中，室溫靜置30 min，3000 r/min離心10 min，分離血清。用全自動生化儀檢測以下生化指標：總蛋白(TP)、球蛋白(GLO)、白蛋白(ALB)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)、乳酸脫氫酶(LDH)、葡萄糖(GLU)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)；同時檢測血清中鉀、鈉、氯、離子鈣、磷等電解質(zhì)指標。

1.4 統(tǒng)計分析

應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件對各項指標數(shù)據(jù)進行正態(tài)性檢驗，應(yīng)用配對t檢驗對實驗結(jié)果進行性別及組間分析比較。

2 結(jié)果

2.1 BALB/c突變卷毛小鼠與正常小鼠血液生理指標分析

兩組小鼠生理指標的檢測結(jié)果顯示：BALB/c突變卷毛小鼠WBC、MCV和PLT的性別及組間結(jié)果與正常小鼠具有顯著性差異(P<0.05，P<0.01)，BALB/c突變卷毛小鼠MCHC的雄性及組間結(jié)果與正常小鼠具有顯著性差異(P<0.01)，其它各項指標無差異(表1)。

表1 BALB/c突變卷毛小鼠與正常小鼠血液生理指標的比較

2.2 BALB/c突變卷毛小鼠與正常小鼠血清電解質(zhì)指標分析

兩組小鼠血清電解質(zhì)指標的檢測結(jié)果顯示：BALB/c突變卷毛小鼠Na+的雌性和組間、K+的雌性以及Cl—雌性和組間的結(jié)果與正常小鼠具有顯著性差異(P<0.05，P<0.01)，其它各項指標無差異(表2)。

2.3 BALB/c突變卷毛小鼠與正常小鼠血清生化指標分析

兩組小鼠血清生化指標的檢測結(jié)果顯示：BALB/c突變卷毛小鼠ALT的雄性和組間、GLU的雌性和組間、TG的雌性和組間結(jié)果與正常小鼠具有顯著性差異(P<0.05，P<0.01)，其它各項指標無差異(表3)。

3 討論

嚙齒類的小鼠最易自發(fā)基因突變，所形成的突變型小鼠為人類各種疾病的研究提供了優(yōu)質(zhì)的模型動物[3]。基因突變動物不僅會影響其器官系統(tǒng)和外觀表征發(fā)生改變，而且還會影響其血液學指標正常范圍值的變動，監(jiān)測突變基因動物的血液學指標對于了解突變系動物的血液系統(tǒng)[4]，分析該動物的各項功能器官是否造成影響[5]都具有十分重要的指導(dǎo)意義。岳敏等[6]、沈果等[7]、王冬平等[8]和韓凌霞等[9]分別對小型豬、獼猴、SD大鼠和鴨子等動物進行了血液生理生化指標的測定，為這些不同品種實驗動物的應(yīng)用提供了可靠的血液學指標參考范圍值。而對于敲基因小鼠[10]、轉(zhuǎn)基因小鼠[11]和突變小鼠[12]血液生理生化指標的測定也愈加受到重視，不僅能夠為這些新型實驗動物提供可靠的血液學指標參考范圍值，而且還能夠分析外來插入和突變的基因是否對實驗動物的血液系統(tǒng)造成影響。目前對于BALB/c突變卷毛小鼠的血液學指標的正常參考范圍值還不太清楚。

表3 BALB/c突變卷毛小鼠與正常小鼠血清生化指標的比較

因此，本實驗選取6周齡BALB/c突變卷毛小鼠和正常BALB/c小鼠，對其血液學的8項生理指標和15項血清生化及電解質(zhì)指標進行了相應(yīng)的測定分析，結(jié)果顯示BALB/c突變卷毛小鼠的4項血液生理學指標、3項電解質(zhì)指標和3項血清生化指標與正常小鼠之間存在顯著的差異性，結(jié)果提示突變基因可能對小鼠的血液系統(tǒng)造成了一定的影響。其中BALB/c突變卷毛小鼠的WBC和PLT均顯著高于正常小鼠，由于血小板具有促進血栓形成的作用，而且可以介導(dǎo)炎癥反應(yīng)，被激活后的血小板通過表達和釋放炎癥介質(zhì)而誘導(dǎo)白細胞的炎癥作用[13]。由此可推測BALB/c突變卷毛小鼠血栓形成和易發(fā)生炎癥反應(yīng)的幾率會大大高于正常小鼠，此結(jié)果與杜靜等[13]研究IL-10敲基因小鼠血液生理生化發(fā)生的變化相一致。但有關(guān)BALB/c突變卷毛小鼠是否具有易形成血栓和炎癥反應(yīng)等特點還有待進一步研究證實。實驗動物的血液學指標受品系、年齡、性別、營養(yǎng)代謝以及測定方法、儀器設(shè)備和樣本量等因素的影響[14]，因此上述這些差異性指標是否是由于基因突變所造成，還需要今后擴大樣本量且對該突變小鼠血液學指標進行有序地動態(tài)監(jiān)測，才能更加全面地對其血液學特性進行分析和驗證。

綜上所述，BALB/c突變卷毛小鼠和正常BALB/c小鼠的部分血液學指標存在差異，提示突變基因可能對血液學指標產(chǎn)生一定的影響。此結(jié)果為深入了解BALB/c突變卷毛小鼠的血液學特性提供了可靠的參數(shù)，也為今后開發(fā)和利用該突變卷毛小鼠模型奠定了堅實的理論基礎(chǔ)。

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