佐劑性關節炎大鼠的血常規

于 飛，張 浪，梁 青，傅 晟，張 駿，呂昕澤，方珍文

(1. 天津市臨床藥物關鍵技術重點實驗室，天津醫科大學藥學院，天津 300070；2. 天津國際生物醫藥聯合研究院，天津 300457；3. 南開大學藥學院，天津 300071；4. 廣西食品藥品檢驗所，廣西 530021)

大鼠佐劑性關節炎(adjuvant-induced arthritis，AIA)模型是研究類風濕性關節炎(rheumatoid arthritis，RA)及抗RA藥效評價常用的一種動物模型[1]。目前，關于AIA模型的研究主要集中于探討關節病理過程與疾病機制，對于關節外的血常規等生理指標的研究較少。本文對AIA大鼠的血常規指標進行分析探討，旨在為RA的研究提供參考。現報告如下。

1 材料和方法

1.1 實驗材料

完全弗氏佐劑(complete freund’s adjuvant, CFA)，購于sigma公司。SPF級Wistar大鼠，雄性40只，體重200±20 g，購于軍事醫學科學院實驗動物中心，SCXK(軍)2007-004。

1.2 佐劑性關節炎模型建立

Wistar大鼠隨機分成對照組和模型組，各20只。模型組大鼠右后足趾皮內注射0.1 mL CFA，對照組大鼠同部位注射等量生理鹽水。注射后每隔4 d評價關節炎嚴重程度，評分標準[2]如下：0分，正常；1分，踝關節有紅斑及輕微腫脹；2分，踝關節至跖關節或掌關節有紅斑及輕微腫脹；3分，踝關節至掌關節或跖趾關節有紅斑及中度腫脹；4分，踝關節至趾關節有紅斑及重度腫脹。每只足趾單獨評分，將四肢評分相加作為關節炎評分。建模后第28天處死大鼠，取趾關節行病理切片觀察。

1.3 血常規分析

注射CFA 28 d后，眼靜脈取血，EDTA-K2抗凝用于血常規分析。血常規分析采用全自動血球分析儀(sysmex XT2000i，Japan)。

1.4 統計方法

±SD表示，組間比較采用t檢驗，P < 0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 佐劑性關節炎模型

模型組Wistar大鼠注射CFA后足爪明顯腫脹，出現體重下降、關節變形、皮膚紅腫甚至潰爛等癥狀(彩插6圖1A、B)。AIA大鼠關節炎評分明顯高于正常組的評分，差異極顯著(P< 0.01)(表1)。病理切片觀察發現，與正常鼠相比，AIA大鼠關節結構嚴重受損，軟骨面破壞、局部纖維化，滑膜組織增生，關節腔內有大量炎性細胞浸潤(彩插6圖1C、1D)。

2.2 血常規分析

AIA大鼠和正常大鼠的血常規測量結果見表1。27個檢測指標中，與正常大鼠相比，AIA大鼠有14個指標有顯著性差異(P< 0.01)，分別為白細胞分類計數的WBC、NEUT(%)、LYMPH%、MONO和網織紅細胞的RET、HFP、MFP、LFP、IFP以及紅細胞的MCV、MCH、RDW-SD、RDW-CV。

表1 AIA大鼠與正常大鼠血常規指標測定結果(n=10)

3 討論

AIA大鼠模型廣泛應用于RA研究，對于抗RA藥物的發現有重要的作用。然而，對于該模型的血常規研究較少，缺乏相關基礎數據。

本研究成功建立了AIA大鼠模型，外觀可見關節變形、皮膚紅腫甚至潰爛等癥狀，并通過病理切片觀察到AIA大鼠關節結構嚴重受損。血常規分析發現，AIA大鼠的白細胞出現明顯變化。與正常大鼠比較，AIA大鼠WBC、NEUT、LYMPH和MONO均明顯上升，差異極其顯著性(P< 0.01)，此結果與史智勇等[3]研究結果相似。血液中的單核細胞、淋巴細胞、嗜中性粒細胞等白細胞在趨化因子的作用下游出血管，不斷向炎癥部位聚集，釋放氧自由基、細胞因子等物質，參與RA的發展[4]。本研究結果進一步說明，與人類相似，白細胞參與并介導AIA大鼠關節炎的形成與發展。在疾病活動期，類風濕性關節炎患者血小板計數會明顯升高，甚至達到正常值的1～2倍[5]。與人的類風濕性關節炎不同，本組AIA大鼠血小板無明顯變化，這可能與AIA模型的發病機制和進程不同有關。

MCV、MCH的顯著降低，提示AIA大鼠出現慢性病性貧血(anemia of chronic disease, ACD)，這與人的類風濕性關節炎相似。貧血是RA常見的一種關節外表現，30%左右的類風濕性關節炎患者會出現ACD[6]，其病理機制較為復雜，主要與細胞因子有關。腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor α, TNF-α)，白介素-1(interleukin-1, IL-1)，白介素-6 (IL-6)，干擾素-γ(interferon-γ, INF-γ)等細胞因子和NO等炎癥介質可以抑制骨髓紅系造血，促進骨髓紅系前體細胞凋亡，減少促紅細胞生成素的分泌，促使鐵代謝異常[7]。研究表明，AIA大鼠血清及炎癥部位的TNF-α、IL-1、IL-6、INF-γ和NO等與RA相關的細胞因子及炎癥介質均有不同程度的升高[8]，提示AIA大鼠貧血機制可能與人類相同。網織紅細胞出現明顯升高，說明AIA大鼠的骨髓造血功能增強，進一步提示AIA大鼠有類似人類風濕性關節炎的ACD癥狀。

綜上所述，AIA大鼠白細胞明顯上升，會出現類似于人類風濕性關節炎的慢性病性貧血。AIA大鼠可以用于模擬人的類風濕性關節炎伴貧血病。

參考文獻：

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