健脾化濕顆粒對實驗性IBS－D大鼠結腸黏膜5－HT表達的影響＊

趙立波，王迎寒，劉玉玲，張曉峰，董岫巖，郭洪杰△，趙淑艷

（1.河北承德護理職業學院涉外護理系，河北承德 067000；2.河北省中藥研究與開發重點實驗室，河北承德 067000；3.承德醫學院附屬肛腸醫院中醫內科，河北承德 067000）

腸易激綜合征（Irritable bowel syndrome，IBS）是一種以腹痛、腹脹伴有大便性狀改變和排便習慣改變為特征的癥候群，是一種功能性胃腸紊亂性疾病［1］。臨床以腹瀉型腸易激綜合征（IBS－D）最為常見［2］。其發病機制尚不明確，臨床越來越多的研究表明腦－腸軸［3］及胃腸肽類激素［4］與IBS密切相關，5－羥色胺（5－HT）［5－6］作為重要的胃腸肽激素在IBS發生發展中起重要作用。本實驗從實驗大鼠結腸組織5－HT表達水平的變化，探討健脾化濕顆粒治療IBS－D可能的作用機制，現將結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 60只清潔級 Wistar大鼠，雌雄各半［體質量（170±20）g，合格證編號：Scxk（冀）2009－0004］；番瀉葉（批號：0120420）；健脾化濕顆粒，由承德醫學院中藥研究所分析室制備；得舒特（批號：624065，法國蘇威制藥公司生產）；5－HT免疫組織化學試劑盒、DAB顯色試劑盒（購自德國博士德生物工程有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 IBS－D模型鼠制備 適應性飼養1周，分為正常組（不作任何處理）、模型組、健脾化濕低、中、高劑量組和得舒特組，每組10只。IBS－D動物模型采用喬氏法造模［7］：除正常組，各組大鼠實驗前10h禁食，自由飲水，分別給予番瀉葉煎劑（0.6g／mL生藥）灌胃，每日1次。灌服完番瀉葉煎劑1h后即用粗制棉繩束縛大鼠的后兩肢，使之行動不便，煩躁不安，造成一定應激刺激，每天束縛2h，持續2周，正常組全程只予以生理鹽水灌胃，均按每只10mL／kg劑量灌胃。每日觀察大鼠大便、飲食、毛色等情況。正常組大鼠大便成型、便次少、進食穩定、毛色光亮。而模型組大鼠皮毛松弛、便質稀、便次多、進食量下降、飲水增多。上述模型鼠情況與文獻記載及臨床IBS－D患者癥狀一致，且上述癥狀持續存在，提示IBS－D動物模型成功。

1.2.2 治療方法 造模成功后，健脾化濕顆粒高、中、低劑量組給藥濃度分別為4.0、2.5、1.5g／mL（生藥），得舒特組給藥濃度3mg／mL，均以每只10mL／kg灌胃給藥。模型組和正常組給予等容量生理鹽水。每日1次，連續2周。

1.2.3 結腸中5－HT水平測定方法 實驗結束前1d，大鼠禁食不禁水，乙醚麻醉，大鼠處死后截取近端結腸（距回結腸連接處2cm）1cm，10%中性甲醛固定24h后石蠟包埋，切片，片厚5μm，常規脫蠟和水化，磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗，DAB顯色，中性樹膠封片等嚴格按劑盒說明完成。陽性表達為胞質或胞膜呈棕褐色顆粒，使用醫學圖像定量分析軟件分析結腸黏膜中5－HT陽性指數，每組分析6個標本，每張切片分析3個視野。即在400倍高倍鏡視野下攝取切片圖像，選定攝取圖像的黏膜層、黏膜下層，全視場測量，得出免疫組織化學圖像中5－HT陽性面積和光密度（OD）值。陽性面積×OD值，即為5－HT免疫組織化學陽性指數。OD值代表組織染色強度，即OD值越大，染色越強。

1.3 統計學處理 采用SPSS11.5軟件對數據進行統計分析。計量資料用表示，統計方法采用方差分析和q檢驗比較各組的差別，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

經2周治療后，IBS－D模型大鼠結腸組織中5－HT的水平顯著高于正常組（P＜0.01）；除健脾化濕顆粒低劑量組外，各治療組大鼠結腸組織中5－HT的水平顯著低于模型組（P＜0.05）。其中，健脾化濕顆粒高劑量組效果明顯，與得舒特組差異無統計學意義（P＞0.05），而健脾化濕顆粒低、中劑量組效果較差（P＜0.01），結果見表1、圖1。

表1 健脾化濕顆粒對IBS－D大鼠結腸黏膜5－HT水平的影響（）

表1 健脾化濕顆粒對IBS－D大鼠結腸黏膜5－HT水平的影響（）

a：P＜0.01，與模型組比較；b：P＜0.01，與正常組比較。

組別 n 5－HT 光密度正常組 10 0.1988±0.054a模型組 10 0.4973±0.071b得舒特組 10 0.3018±0.038健脾化濕顆粒低劑量組 10 0.4464±0.063健脾化濕顆粒中劑量組 10 0.3617±0.086b健脾化濕顆粒高劑量組 10 0.3223±0.056b

圖1 健脾化濕顆粒對IBS－D模型大鼠結腸組織中5－HT水平的影響（免疫組織化學×400）

3 討 論

IBS發病機制不明確，越來越多的研究表明胃腸激素在IBS發病中起重要作用［8］。胃腸激素是指分布在胃腸道管壁上和胰腺內的嗜銀細胞分泌的一組小分子或肽類高效能生物活性物質［9］。5－HT是重要的胃腸激素之一，廣泛存在于中樞神經系統和胃腸道［10］，其對腸道運動、內臟感覺、腸道吸收和分泌均有重要作用。研究發現結腸內壓力升高，可促使嗜鉻細胞釋放5－HT，與5－HT受體結合，調節蠕動反射，引起對疼痛感覺的調節［11］。有學者在研究中發現IBS－D模型大鼠結腸黏膜肌層、黏膜下層5－HT陽性表達顯著增強［12］。提示5－HT可能是IBS－D發生的重要生物活性因子。詹麗杏等［13］的研究發現IBS患者血漿5－HT水平較正常者顯著升高，且活動期水平高于緩解期，提示5－HT的合成、分泌與IBS癥狀發作相關。還有學者報道大鼠血清5－HT含量增加能加快結腸推進速度，增加排便次數。

本實驗結果顯示，IBS－D模型大鼠結腸組織中5－HT的含量明顯增高，與正常組比較差異有統計學意義（P＜0.01），經2周治療后，健脾化濕顆粒高劑量組及得舒特組大鼠結腸組織中5－HT的含量顯著低于模型組（P＜0.01），提示結腸組織5－HT高表達在IBS－D發病中有一定作用。

IBS－D屬中醫“泄瀉”、“痛泄”、“久泄”等的范疇［14］。基本病機為肝郁脾虛［15］、脾虛濕勝。健脾化濕顆粒在傳統經驗方健脾化濕湯基礎上改變劑型，既保存該方原有療效，又適應現代社會的用藥理念。方中炙黃芪、益智仁，輔以炒白術、砂仁補氣健脾和芳香化濕；陳皮、茯苓行氣健脾，燥濕和胃；白芍養血柔肝；烏藥行氣止痛；防風辛能散肝，香能舒脾，風能勝濕止瀉，理脾引經。全方緊緊抓住脾虛濕盛和肝氣郁結環節，健脾化濕，疏肝解郁，從而使肝氣條達，脾胃升降功能恢復正常而腹痛、便溏癥狀消除。經本實驗研究發現，健脾化濕顆粒可改善IBS－D 5－HT的高表達，減弱神經介導的胃腸道運動與分泌，提高內臟痛閾，消除腸道過敏，從而有效改善IBS－D臨床癥狀。

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