90例強直性脊柱炎活動期患者單核細胞中CD28、CD80、CD86表達的臨床意義

劉廣州

90例強直性脊柱炎活動期患者單核細胞中CD28、CD80、CD86表達的臨床意義

劉廣州

目的探討CD28、CD80、CD86在90例強直性脊柱炎患者外周血單核細胞中表達的臨床意義。方法選擇我院骨傷科2011年6月至2012年6月經相關檢查確診的強直性脊柱炎患者180例，其中活動期患者90例，穩定期患者90例，另選90例體健正常的人群做為對照組，提取外周血單核細胞，采用Taqman探針實時熒光定量PCR方法檢測CD28、CD80、CD86的表達。結果強直性脊柱炎患者單核細胞CD28、CD80、CD86表達明顯高于對照組，且活動期組患者高于穩定期組患者(P＜0.01)。結論

CD28、CD80、CD86表達升高可增加強直性脊柱炎的發病率。

強直性脊柱炎;CD28、CD80、CD86;表達

強直性脊柱炎(AS)是一種原因不明的全身慢性結締組織疾病，發病誘因不太明確，目前認為可能與遺傳、慢性感染、內分泌紊亂有關［1］。病變主要累及骶髂關節、髖關節、椎間關節等。臨床分為三期，即早期、活動期、穩定期。研究發現AS患者骨、關節、滑膜組織內有大量炎性T細胞、單核巨噬細胞侵潤。本研究測定了180例強直性脊柱炎患者的外周血單核細胞中表達水平，并探討了其與強直性脊柱炎的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇我院骨傷科2011年6月至2012年6月經相關檢查確診的強直性脊柱炎住院患者180例，分為，Ⅰ組:活動期組90例(男45例，女45例);Ⅱ組:穩定期組90例(男45例，女45例);另選90例體健正常的人群做為對照組(男45例，女45例)。排除標準:急、慢性肝腎疾病及感染性疾病;惡性腫瘤及血液系統疾病;正在使用激素類藥物。

1.2 方法

1.2.1 RNA的提取 取患者和正常對照組患者外周血5 m l，EDTA-Na2抗凝，1 h內提取外周血單核細胞，PBS洗滌一次，所提取的總RNA以1∶50稀釋，用紫外分光密度儀監測其在OD260nm，OD260nm處比值為1.9，在1.8和2.0之間。在含量為1.5%瓊脂糖凝膠的平板上進行電泳，完整性良好。

1.2.2 逆轉錄 以mRNA為模板逆轉錄.

1.2.3 引物及Taqman探針的設計及合成，由上海捷瑞公司設計提供。見表1。

1.2.4 標準中的CD28、CD80、CD86 mRNA的測定使用Real-MasterMix Probe試劑盒，，用本實驗室已構建的內參基因ABL質粒標準品倍比稀釋做標準曲線。采用相對定量的方法，將目的基因(CD28、CD80、CD86)與內參基因ABL拷貝數的比值取對數值為最終有效數據來進行統計分析。

1.2.5 統計學方法 利用SPSS 17.0統計軟件，采用獨立樣本資料的t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

采用相對定量方法，AS活動組患者共刺激分子CD28、CD80、CD86表達均高于對照組(P＜0.05)，AS活動期患者。見表2。

表1

表2

3 討論

AS是脊柱關節病的一種類型，主要累及骶髂關節、髖關節、椎間關節等，特征是持續性炎癥，炎癥嚴重程度不等。AS好發于青少年，男女比例約為2.5∶1。此病的病因及發病機制尚不明確，從流行病學調查發現，基因和環境因素在本病的發病中發揮作用，目前認為其發生與遺傳、慢性感染、自身免疫功能紊亂和內分泌失調等有關［2］。免疫調節以及免疫功能紊亂在粵雜患者的發病過程中起著重要作用。國內外免疫功能紊亂方面的主要發現是AS患者骨、關節及滑膜組織內有大量炎性T細胞、單核原巨噬細胞浸潤，存在T細胞應答和Th1/Th2細胞因子平衡偏移等。AS患者外周血淋巴細胞以Th1型細胞為主，隨著炎癥的活動，Th1細胞的分化能力似Th2細胞下降。推測其發病與Th1型細胞因子增多、Th2型細胞因子減少有關［3］。本研究通過檢測AS活動期患者外周血單個核細胞上的共刺激分子mRNA的表達，探討AS的免疫學機制。

T細胞的激活需來自細胞外的信號刺激，第一信號(抗原特異的識別信號)和第二信號(表達于T細胞表面的膜蛋白分子及其配體介導的共刺激信號)，T細胞被這兩個信號激活后才能發揮其免疫功能，共刺激分子中最重要的是T細胞表面的CD28及其相應配體CD80和CD86，CD28與CD80結合可促進Th1細胞增殖，CD28與CD86結合Th2細胞增殖［4］。本室建立了采用熒光定量PCR的方法監測CD28、CD80、CD86及ABLm-RNA的新方法。研究發現AS活動組患者共刺激分子CD28、CD80、CD86表達均高于對照組，提示CD28、CD80、CD86的異常表達可能引起與AS相關的免疫功能的紊亂。

綜上所述，AS患者共刺激分子異常表達，可能與AS的發生發展有密切聯系，在臨床上監測患者刺激分子異常表達水平有助于AS診斷和治療。

［1］HOWARD L.M.KOHM A P.CASTANEDA C L，etal.Therapeutic blockade of TCR signal trasduction and co-stimulation in autoim mune disease.Curr Drug Targets Inflamm Allergy.

［2］王斌，王萍萍.援強直性脊柱炎發病機制的研究進展.四川醫學，2008，29(10):409-412.

［3］董青，楊達人，劉華.HLA-B27陽性強直性脊柱炎患者免疫功能和血液流變性的檢測.中國血液流變學雜志，2006，16(2): 273-275.

［4］翟士軍，蘇成海.B7-CD28家族分子的免疫調節功能及臨床應用.放射免疫學雜志，2008，21(6):575-578.

467500 河南省汝州市第一人民醫院骨傷科

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