HIV感染患者CD4+T淋巴細胞凋亡率與計數的相關性分析

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吉林省疾病預防控制中心消毒所，吉林長春 130000

相關研究證明，人免疫缺陷病毒(HIV)感染后，會逐漸耗竭在免疫系統調節中起著重要作用的CD4+T 淋巴細胞，最終會導致獲得性免疫缺陷綜合癥AIDS (即艾滋病)[1]。多年來，大量的研究在于觀察CD4+T 淋巴細胞的凋亡在HIV/AIDS 的發病機理中所起到的重要作用，但是很少有研究表達CD4+T 淋巴細胞凋亡率和CD4+T 淋巴細胞計數之間的關聯性。本項試驗通過流式細胞術來研究HIV 感染患者CD4+T 淋巴細胞的凋亡狀況，并探討和分析該指標和CD4+T 淋巴細胞計數的相互關系，取得了較好的結果，現進行如下報道。

1 對象與方法

1.1 研究對象

收集45例患HIV 的感染者，都是經過性傳播途徑而被感染，均采用蛋白印跡方法經確診屬于HIV-1，患者年齡從19～40歲，平均的年齡是（26.1±3.7）歲，其中男性患者共25例，女性患者共20例，沒有使用過抗HIV 的治療，排除沒有其它癥狀的感染者；另外選取45例和HIV 感染類似的HIV 陰性志愿者來作為對照組進行比較。

1.2 檢測方法

采用FITC 標記CD4 單抗和溶血素以及Annexin V-FITC 凋亡檢測試劑盒，對于CD4+T 淋巴細胞計數采用和50 μL 抗凝血混合均勻，在室溫避光保存15 min 后,加入450uL 溶血素,再在室溫避光保存15 min 后，通過FACS MULISET 軟件進行檢測并分析對比研究。CD4+T 淋巴細胞凋亡的檢測方法是：用200 μL 抗凝全血加溶血素后，馬上輕輕混勻，在室溫避光保存15 min 以后，離心5 min 去上清，在4 ℃條件下，PBS (pH 值為7.2,0.01 mol/L)對細胞洗滌2 次，然后采用FACS CELLQUEST 軟件進行檢測和分析。

1.3 統計學原理

所有的資料采用SPSS 18.0 的統計學軟件進行綜合分析實驗結果，HIV 感染者和對照組患CD4+T 淋巴細胞的凋亡率之間對比采用秩和進行檢驗；兩組間計數資料相關性采用是Spearman等級相關分析。如果P＜0.05，表明其差異具有統計學意義。

2 結果

HIV 感染組CD4+T 淋巴細胞的凋亡率是(6.81±2.29)%，要遠高于對照組的凋亡率(2.76±0.88）%，該兩組CD4+T 淋巴細胞的凋亡率對比，具有顯著的差異（Z=-5.391，P＜0.01），具有統計學意義。本研究組細胞計數個數平均值為（362.5±6.3）,和HIV 感染組CD4+T 淋巴細胞的凋亡率之間存在明顯負相關關系（r=-0.875，P＜0.01）。

3 討論

在臨床上HIV 感染者有個很明顯的特征是：CD4+T 淋巴細胞的數量如果有進行性的下降，就會伴隨著細胞功能的快速下降[2]。Ledru E 等[3-4]相關研究證明，感染者的體內外HIV 感染以后所導致的細胞凋亡，極有可能是CD4+T 淋巴細胞出現進行性減少的一個非常重要的原因。CD4+T 淋巴細胞出現進行性減少機制通常和下面兩個因素密切相關：①HIV 編碼的蛋白，比如Tat 蛋白等，常以抗原與超抗原的形式對于機體免疫細胞進行反復的刺激，造成慢性免疫活化狀況，并經過活化引發細胞死亡與活化T細胞自主死亡的機制，來加速CD4+T 細胞量的減少；②促凋亡蛋白通過TNF 受體細胞凋亡與線粒體細胞凋亡兩個信息途徑，誘發T 淋巴細胞的凋亡，結果造成了CD4+T 淋巴細胞的大幅減少[5]。Herbein 等相關研究[6]證明，HIV 不但會造成被感染CD4+T 細胞的凋亡，并且還會導致沒受感染的旁觀者T 淋巴細胞的凋亡數目急劇增加。由于凋亡做為機體的自我保護功能，在自動清除感染細胞的同時，卻并未能夠抑制HIV 于單核/巨噬細胞內的復制，最終導致沒有受到感染的細胞同樣出現死亡，造成對于HIV 細胞復制出現失控狀態，進而發展成出現嚴重的免疫缺陷，引發AIDS 等相關的機會性的感染。當人體全血中CD4+T 淋巴細胞的水平在降至200 個/μL 以下的時候，就非常容易引起各類機會感染，這也是HIV 感染患者最大的威脅[7]。

通過本次研究的結果證明：HIV 感染組CD4+T 淋巴細胞的凋亡率要遠高于對照組的凋亡率，該兩組CD4+T 淋巴細胞的凋亡率對比，差異具有統計學意義。此外，本研究組細胞計數個數平均值為（362.5±6.3）,和HIV 感染組CD4+T 淋巴細胞的凋亡率之間存在明顯負相關關系，這和成浩等[8]有關文獻報道比較一致。所以，對于HIV 感染患者的疾病進程的監測，除了應當監控傳統的CD4+T 淋細胞的計數與病毒載量，還應當檢測出細胞的凋亡率，今后在實施艾滋病的治療和新藥的研制開發時，還應當把細胞的凋亡率的改變作為治療效果的重要觀察指標進行參考。

綜上所述，CD4+T 淋巴細胞的凋亡率增加屬于HIV 感染者CD4+T 淋巴細胞計數出現降低的主要原因，HIV 感染患者的CD4+T 淋巴細胞量的減少和細胞的凋亡率存在著密切的關系，所以檢測HIV 感染者的CD4+T 的淋巴細胞凋亡率，更有利于判斷患者的疾病發展進程。

[1]饒和平,吳南屏,馮磊,等.HIV 感染者第二受體CCR5 和CXCR4 表達與機會性感染的相關性[J].解放軍預防醫學雜志，2009,12(4)：105.

[2]代娣，尚紅，姜擁軍，等.我國HIV/AIDS 患者外周細胞凋亡與疾病進展的相關性分析[J].中國免疫學雜志，2006,22 (12)：1156-1157.

[3]Ledru E,Lecoeur H,Garcua S,et al.Differential susceptibility to activation-induced apoptosis among peripheral Th1subsers：corre-lation with Bcl-2expression and consequences for AIDS pathgene-sis.[J]Immunol，2008,20(5)：957-958.

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[5]陳小平,陳觀今,肖斌權，等.HIV/AIDS 患者和正常人T 細胞亞群、農型及其相關性的比較研究[J].中國人獸共患病雜志，2009,17(2)：175.

[6]Herbein G,Lint C V,Lovett J L,et al.Distinct mechanism trigger apoptosis in human immunodeficiency virus type1infected and in un-infected bystander T lymphocytes[J].Journal of Virology，2011,16(7)1387-1389.

[7]Rowland-Jones SL.Timeline：AIDS pathogenesis：what have two decades of HIV research taught us[J].Nature Reviews Immunolog，2013,3(4)：343-348.

[8]成浩,徐金水,吳建茹,等.江蘇省男性HIV 感染者/艾滋病人中解脲脲原體和生殖支原體的檢測分析[J].南京醫科大學學報：自然科學版，2010,16(8)：191-192.