肖 紅
蘇州大學附屬常熟一院,江蘇常熟215500
病理診斷能為我們提供診療依據,并有助于預防疾病的惡化,進一步保證了患者的生命安全,我們有必要找到一套合理有效的方式,提高病理診斷的有效性。而制片質量是影響病理診斷結果的重要因素,相關工作者必須按照規范進行操作,防止任何差錯產生,并建立一套完善的質量控制與保證體系,切實提高切片質量,促進病理診斷技術的進步[1]。質量控制在病理技術中的具體應用可以表現在如下幾點上。
儀器設備是進行所有醫療工作的基礎,所以我們要在保證各個科室配備有先進儀器設備的同時,進一步加強儀器設備的維護與保養工作,以使儀器設備在應該發揮效果的時候,發揮出最佳效果。
各種試劑直接或間接接觸標本切片,是影響切片質量和診斷結果的重要因素。作為病理工作人員,要切實保障試劑的質量,應該做到:
病理診斷所使用的試劑種類極多,固定、染色、脫水等環節都需要用到,數量繁雜,光是染色劑就包括瑞氏染色劑、DNA和RNA染色劑、吉姆薩染色劑等等一系列試劑,如果不進行合理的分類,很容易造成使用和管理混亂[2]。
采購與配置,是保證所使用的試劑符合要求的重要環節,我們必須通過合法渠道,采購質量過關的原料,并按照操作標準進行試劑配置,防止出現染色不佳、制片不良等情況。
制片過程包括十幾個詳細步驟,每一個環節都需要我們認真對待。
必須保證標本與檔案一一對應、檔案與患者一一對應,在標本的轉接過程中,要著重注意編號登記、名字檢驗等工作,對標本進行不定期檢查,固定液不足時還需做好相應的補充工作。
組織固定是為了使組織在失去活性之后,還能盡可能保持原先的狀態,是我們進行病理分析的依據[3]。首先,病理組織的固定必須及時,并且嚴格按照標準進行,否者難以有效凝聚組織細胞內的蛋白質,進而導致蛋白質沉淀變性不夠,組織細胞結構難以維持;其次,固定液必須按要求配置,最常用的固定液是4%中性甲醛溶液,此外還有乙醇-甲醛的混合固定液等;最后,固定液的使用也有相應的規范,大塊組織必須先切成小塊組織,再通過固定液進行固定,持續4 h左右,取材脫水時,還需再進行切割,保證組織塊長寬不超過22 mm,厚度小于2 mm。
脫水,就是用某種化學試劑置換經過固定處理后,組織細胞中的水分的過程。常用的處理方法是乙醇脫水,替換過程中,乙醇濃度需逐漸從70%濃度上升至100%濃度,以完全替換組織細胞內的水分,需要注意的是,高濃度乙醇的脫水時間決不能過長,否者會使組織變脆,影響后續切片工作[4]。
包埋是制片前的重要步驟,可以支撐脆弱的組織,使其易于切削。一般我們采取石蠟包埋,可以有效保證切片的厚度,便于連續切片,保存時間也比較長。然而石蠟包埋對溫度的要求非常高,溫度過低會使石蠟凝固,導致包埋不平,嚴重時會導致切片不完整,溫度過高又容易使組織發脆,所以我們必須嚴格控制包埋溫度在67℃左右。
包埋結束,即可進行制片了,這一環節無疑是病理診斷的重中之重,很多方面都需要我們注意。①嚴格控制切片厚度在5.0 μm內;②染色過程中,保證切片核漿分化明顯、對比清晰,適度控制,防止因伊紅過染,出現染色過紅、蘇木精過染,出現染色過藍;③組織切片必須保證結構完整、薄厚均勻、平整無痕;④可配合進行快速診斷,但時間必須嚴格控制在30mim之內,防止組織損壞;⑤貼片之前需要對蠟片進行展平處理,可先浸泡于10%乙醇溶液中,再置于恒溫水箱中展平,貼片時注意將切片置于載玻片中央偏右處,對于有表皮或粘膜面的切片,要使表皮、粘膜在下,真皮、肌層在上,方便觀察;⑥烤片要注意溫度與時間要求,一般溫度比包埋溫度要高5℃,時間控制在15~30 min內,使石蠟粘貼牢固;⑦在切片染色前,必須進行脫蠟處理,以防止影響染色,導致著色模糊不清;⑧分化可以有效加深顏色對比度,提高染色效果,但其時間長短很重要,過短會使細胞核、細胞漿對比不明顯,過長又會使細胞核出現過染或褪色的情況,需要重點注意;⑨脫水過程對標本切片的透明度影響極大,脫水不徹底,會直接導致標本鏡下觀察模糊,一般我們采取的試劑是1~2級無水乙醇或者石碳酸二甲苯,但不管使用哪種方案,都必須保證脫水徹底;⑩封片常用中性樹膠,然而中性樹膠長期放置之后容易酸化,會導致細胞核褪色,需要注意,另外,對中性樹膠的稀釋要求也非常高,稀釋過度影響切片美觀,且易產生缺膠現象,稀釋不夠又容易產生氣泡,影響切片質量。最后,還有一點特別值得注意,那就是決不能讓切片出現干涸的情況,尤其是在染色過程中,因極易出現這種情況,需要我們時刻留意,切片干涸會產生龜裂,形成黑核,嚴重影響切片質量,所以在完全染色后,必須做鏡下觀察,檢查制片質量[5]。
病理制片技術,在臨床、教育、科研等各方面都有廣泛的應用價值,其本質,就是為了提供高質量的標本切片,以供專業人員進行病理診斷,所謂的高質量,一般有這些要求:切片完整、薄厚均勻、無褶皺損傷;貼片烤片科學合理;染色清晰、對比分明;脫水充分、標本透明度高;切片無龜裂、黑核出現;標本清潔無污染;標簽清晰,與患者一一對應等。
高質量的病理切片,不僅對病理技術人員的專業素養有極高的要求,需要我們具備極高的制片技術,還嚴格考驗著我們的社會道德感,尤其是責任心與同情心。為了滿足病理制片的要求,我們亟需建立健全一套完整的質量控制與質量保證體系,然而現階段我們還找不到這樣一個科學而規范的管理控制體系,因而各科室有必要聯系自己的實際工作情況,嘗試進行簡單的質量控制,以保證這樣科學有效的醫療方式,能進一步保證患者的生命安全。一般而言,我們可依據各種國際標準、國家標準,制定一套院方自己的操作標準,嚴格按照這個標準來,在進行標本接受、轉接,檔案生成、管理,組織預處理、紙片等過程時,切實注意保證標本質量。
筆者相信,只要病理技術人員刻苦專研,努力學習,精益求精地不斷探索,病理技術的應用價值一定會得到大幅提升,不僅會使診斷結果更加準確,還能促進醫療學科相關科研教育的發展,進一步推動整個行業的進步。
[1]馬恒輝,周曉軍.病理技術質量控制常見問題與對策[J].臨床與實驗病理學雜志,2011(5):533-536.
[2]沈琴.病理技術質量控制的探討[J].內蒙古中醫藥,2011(12):138-139.
[3]羅燦嶠,莫木瓊,鐘覺民.病理HE切片常見的質量問題及處理方法[J].中國實用醫藥,2010(1):39-40.
[4]王春陽,李世紅,尹惠蘭.病理制片技術中的常見問題及對策[J].承德醫學院學報,2009(2):210-211.
[5]葛英順.常規病理工作中遇到的技術問題及解決辦法分析[J].青海醫藥雜志,2010(4):54-55.