風疹IgM抗體測定的影響因素及質量控制

宋 康 熊建明 劉思寨

(四川省雅安市疾病預防控制中心 625000)

風疹是一種呼吸道傳染病，所致疾病分為兩種:風疹和先天性風疹綜合癥(CRS)，后者包括白內障、心臟疾病和耳聾等［1］，孕婦在懷孕早期感染風疹影響胎兒發育［2］，因此，風疹的早期血清學檢測非常重要，檢測風疹IgM抗體的方法主要有酶聯免疫法(抗體捕獲ELISA法)，該法靈敏度高、特異性強，但在實際操作中有諸多干擾因素，為了得到準確的實驗結果，必須進行嚴格的質量控制。

1 材料與方法

1.1 風疹病毒IgM抗體檢測試劑盒由珠海海泰生物制藥有限公司生產，試劑均在有效期內使用。

1.2 質量控制陰性對照值介于0-0.15，陽性對照值介于0.3-1.8，臨界對照平均值介于0.15-0.8，證明實驗成立;否則試驗結果無效，重新試驗。

1.3 結果判定樣品A值。

2 結果

影響試驗因素及質量控制

2.1 標本

2.1.1 標本采集后應盡快送檢，因送檢時間與IgM抗體檢出率密切相關［3］。

2.1.2 標本要避免出現嚴重溶血、高血脂和細菌污染，樣本溶血:以辣根過氧化酶為標記的elisa測定中，會導致非特異性顯色，干擾測定結果［4］，被細菌污染的標本同溶血一樣，也可產生非特異性顯色而干擾檢測結果［4］。

2.1.3 血清標本2℃ -8℃下保存一周，若長時間應置于-70℃保存。

2.1.4 要避免標本反復凍融［5］，因反復凍融所產生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產生破壞作用，從而引起假陰性結果。

2.2 實驗過程

2.2.1 試劑盒使用前先在室溫平衡20min以上，以便在溫育時很快達到反應要求溫度，避免弱陽性標本產生假陰性結果。

2.2.2 加樣時標本要混勻，應將液體及標本加在孔底，不外濺，避免加在孔壁上部，加樣量要準確。

2.2.3 洗板在ELISA試驗中洗板非常關鍵，如果洗板不干凈將直接影響測定結果。

2.2.4 溫育過高過低都會影響試驗，基層實驗室有時用孵箱代替水浴鍋，冬天溫度低，開關門箱內溫度迅速降低，孵箱內溫度達不到37℃，測定時臨界對照平均值常常低于0.15，試驗不成立，因此溫育要在水浴鍋里進行。

2.2.5 酶標儀測定測定前先用棉簽把酶標板底部的水珠擦干凈，檢查各孔是否有氣泡，否則測定值會變高，有可能產生假陽性結果。

2.3 儀器

2.3.1 移液器定期進行校正。

2.3.2 水浴鍋要有外部溫度計對儀器溫度進行校準。

2.3.3 洗板機定期檢查加樣孔是否暢通，每次用完后立即用蒸餾水反復進行內部沖洗。

2.4 質量控制

2.4.1 質控圖法常規質控圖(Levey-Jennings)將IHC血清放在常規樣本中，進行20次檢測，計算均值和標準差(SD)。并繪制質控圖。一般不直接使用IHC檢測OD值，而使用IHC的OD值與該次檢測的Cutoff的比值。如換算成單位，則直接使用IHC的單位濃度來計算均值和標準差。IHC“失控”的該次檢測結果無效，要對該次試驗所有的標本進行重新檢測。

常規質控圖的優點:簡單易行，便于基層使用 只需一個質控。

常規質控圖的缺點:需要進行20次IHC的檢測，才能做質控圖只有一個質控，規則簡單。

2.4.2 “即刻法”質控結果 即刻法質控使用:先將IHC的測定值與Cutoff比值從小到大排列。計算均值(X)和標準差(SD)。利用公式計算SDI上限和SDI下限值。將SDI上限、SDI下限值與SDI值中的數字比較。當SDI上限值和SDI下限值＜n2SD時，表示處于控制范圍內，可以繼續往下測定。繼續重復以上各項計算當SDI上限和SDI下限有一值處于n2SD和n3SD值之間時，說明該值在2SD～3SD范圍，處于“告警”狀態。當SDI上限和SDI下限有一值＞n3SD時，說明該值已在3SD范圍之外，屬“失控”。IHC“失控”的該次檢測結果無效，要對該次試驗所有的標本進行重新檢測。

即刻法質控有三個以上的數值就可以判斷是否有異常值的存在［7］，但前三次結果對后續質控結果影響較大［8］。

2.4.3 每次試驗設空白對照、陰性對照、陽性對照各一孔，臨界對照三孔、內部質控一孔。

2.5 人員素質

2.5.1 檢驗人員要定期接受培訓，以提高檢驗的準確性。綜上所述，風疹測定影響因素較多，故在實際操作中要加強質量管理，認真避免或減少影響因素，力求結果準確，為疾病的診斷提供可靠的依據。

［1］Chapter 12.Rubella，in Epidemiology and Prevention of Vaccine-Preventable Diseases.2004，Centers for Disease Control and Prevention:Atlanta.p.145-158.

［2］Robertson，s.E，et al，Rubella and congental rubella syndronae:global update，Rev Panam Salud Publica，2003，14(s)p.306-15.

［3］李瑞忠，大理州2000-2001年麻疹實驗室監測結果分析.中國初級衛生保健，2002，16(增刊):49-51.

［4］岳獻榮，孟毓.酶聯免疫吸附試驗檢測各環節中應注意問題［J］.中國臨床研究，2010.23(2):150-151.

［5］李會英.酶聯免疫吸附實驗影響因素的分析［J］.檢驗醫學與臨床，2007，4(10):985-986.

［6］周微雅、盧秋維，不同條件對酶聯吸附試驗的影響［J］.實用醫技雜志，2010，17.(8):744.

［7］王玉蘭.臨床免疫學和免疫檢驗［M］.北京:人們衛生出版社出版，2003，253-270.

［8］賴玉潔.“即刻法”室內質控的局限性［J］.中國輸血雜志，2004，17(6):442.