微生物實驗室內部質量控制分析

吳正銅（廣西壯族自治區環江毛南族自治縣疾病預防控制中心 547100）

隨著經濟全球化和國際間的交流合作越來越密切，國內外的各種進出口商檢、檢疫以及醫療機構和疾病預防控制系統等對樣品微生物的檢測越來越多。在檢驗過程中，常常用到定性實驗和手工操作，這些都離不開人為的主觀判斷，由于個體差異可能會導致檢驗結果不一致［1］。因而對微生物實驗室進行質量控制，確保檢驗結果的準確性是非常重要的。質量控制包括室內質量控制和室間質量控制，其中室內質量控制是質量保證的核心和基礎，也是做好室間質控的基礎和前提，它貫穿于微生物學檢驗質量控制技術的各個方面。作者根據國內一些資料和結合自身的工作經驗，總結出要做好微生物實驗室內部質量控制，主要從以下9個方面著手。

1 實驗室技術人員

1.1 從事微生物檢驗的技術人員必須經過系統、全面的基礎培訓教育，包括微生物學、基礎微生物學、臨床醫學等知識的學習，以及一定的專業化技能培訓，經考核合格后持證上崗。

1.2 實驗室人員應定期或不定期到上級技術指導單位進行業務培訓或進修學習，更新和掌握微生物新知識和新技術，隨時了解微生物實驗室的質量控制。

1.3 實驗室技術人員的有關學習、培訓經歷及個人的技術業績材料要整理完善和歸檔保存。

2 工作手冊

2.1 實驗室技術負責人要組織專業人員根據所在實驗室的條件需要而編寫標準的工作手冊，并定期進行修改、完善和補充，使之成為全體人員需要共同尊守的標準操作程序，不能因為人員的變動而隨意更改。工作手冊應該包含以下內容：實驗室可開展的檢驗項目；各檢驗項目具體的操作規程；儀器設備的操作步驟；標本采集和處理指南；培養基和試劑的配制方法及保存措施；菌（毒）種管理；環境設施的監控和要求；廢棄物的處理；實驗室的安全措施等［2］。

2.2 實驗室還應同時配備一些參考書，如關于部分少見微生物的檢驗參考書，以指導某些少見菌種的分離鑒定。

2.3 專業雜志是了解新的檢驗方法的主要來源，實驗室應訂閱一些權威的、知名度很高的專業雜志，以便快速了解、掌握新檢驗方法的有關信息。

3 標準菌株

3.1 標準菌株是指具備典型的、穩定的生理生化特征，并被國際社會所認可的菌株。它來自權威機構，如我國的衛生和計劃生育委員會（原衛生部）藥品生物制品鑒定所菌種保藏中心，美國菌種保藏中心等。各檢驗中心下發的質控菌株可作為平時試驗用的質控菌株。

3.2 實驗室應保存其試驗所需要的標準菌毒株，并設有專人管理，在文件中明確其職責，對菌毒株的保存地點或設施應有嚴格的措施、要求，使其他人員無法獲得。保存方法分為一般保存法和冷凍保存法。一般保存法是將細菌接種于半固體培養基中，35℃培養18～24h后封蓋1cm厚的無菌液狀石蠟置4℃保存，此方法簡單、方便，不需要貴重儀器，故在大多數實驗室廣泛使用，是最簡單的保存法。冷凍干燥保存法的優點主要是不改變菌種的性狀以及保存時間長，缺點是要有專門的冷凍干燥設備，但此法是最可靠的菌種保存方法。

4 培養基

4.1 配制好的培養基應標明名稱、濃度、pH值、配制日期、失效日期、配制者姓名等信息，同時應做全面檢定和性能試驗，配制完成的培養基pH應與規定的pH相差±0.2之內。

4.2 培養基質量好壞通常以目標細菌能否在培養基中生長或能否形成典型菌落而其他細菌受抑制不能生長或生長很弱來判斷。購買培養基時，應該選擇著名的生物培養基生產公司生產的產品。

5 試劑、染色劑和診斷血清

5.1 試劑和染色劑必須注明購入日期，按試劑要求的條件貯存并在有效期內使用。使用配制時要做好記錄，對穩定性較差的試劑，每次實驗時必須進行陽性和陰性對照實驗。

5.2 診斷血清的來源必須可靠，在購進各種診斷血清時，在檢查其基本特性的同時，均應詳細記錄診斷血清名稱、包裝規格及數量、生產廠家、聯系電話、廠址、郵編、批號、失效期、購買日期、驗收者姓名等。在使用時應觀察其是否澄清透明，如果有任何混濁和顔色改變，都不能再使用。

6 儀器設備

6.1 大容量高壓滅菌器必須定期（一般為3年）邀請特種設備檢驗所對其性能進行全面檢測，并取得檢測合格證書。新購買的滅菌器必須進行滅菌性能檢測，檢測合格后方可投入使用。要定期用生物指示劑，化學指示劑或留點溫度計對滅菌器的滅菌效果進行監測，發現異常問題立刻停止工作，查找原因并給予糾正。

6.2 二氧化碳培養箱要定期檢查箱內CO2的濃度，可用CO2檢測儀或血氣分析儀測定。也可用淋病奈瑟菌或腦膜炎奈瑟菌等CO2依賴細菌進行生長試驗。

6.3 生物安全柜必須定期請專業技術人員對儀器作一個全面檢查。紫外線消毒效果監測是每個季度進行檢測一次。

6.4 定期對微生物鑒定儀的探測部位進行清潔，并用標準模板進行校正。及時更新微生物鑒定系統操作軟件，對每批號的鑒定卡板條用標準菌株進行一次測定，并核對每個反應結果和藥物敏感結果與標準的一致性。

7 環境潔凈度

7.1 微生物實驗室常需要用到潔凈室和超凈工作臺，它們的潔凈度對產品的微生物檢驗結果影響很大，所以應定期監測其消毒滅菌效果以保證其符合樣品檢測所需的環境要求，當潔凈度不符合要求時，應立即采取有效措施進行徹底消毒，直至符合要求為止。

7.2 無菌室和超凈工作臺應有日常維護及監控的記錄。日常維護包括紫外線燈擦拭，空氣消毒及全面的清潔衛生，監控紫外線強度和空氣沉降菌菌落總數，空氣中紫外線燈以30W功率計，紫外線燈下方垂直1.0m處的253.7nm紫外線輻射強度應大于或等于70uw／cm2［3］；空氣沉降菌菌落總數以直徑為9cm平板暴露0.5h計，百級環境沉降菌菌落應達到每個器皿的沉降菌小于或等于1cfu［4］。

8 檢測方法

實驗室所使用的檢驗方法必須是經確認的現行有效版本。在日常工作中，應采用已知的標準菌株或陽性標本進行適時或定期監控，可以幫助發現了解檢測過程客觀存在的變異、程度和原因。

9 標本檢驗過程的控制

9.1 標本的采集和運送標本的采集是否符合要求，將直接影響檢驗質量。臨床標本采集應在病程急性期，使用抗菌藥物前，食物中毒標本采集應具有典型性和代表性，采集后用無菌容器送檢，必要時需冷藏、保溫或厭氧處理。

9.2 標本培養前的涂片是非常必要和重要的，一方面可確定標本是否合格，另一方面可直接發現病原體，尤其是形態特征典型者。

9.3 血清學鑒定單憑血清學凝集試驗陽性不能判斷結果，因為有可能存在交叉抗原或粗糙型菌落造成的假凝集，因此挑出的典型菌落要做生化反應和血清學凝集反應，兩者都符合時才能確認報告。

綜上所述，影響微生物實驗室檢測質量的內部因素很多，分布在整個檢測過程，為了避免實驗過程中人為、儀器、試劑等因素對檢測結果的影響，保證結果的準確、可靠和有可比性，必須不折不扣地全面加強內部質量控制，才能保證得到準確、可靠、滿意的檢測結果。

［1］張卓然.臨床微生物學和微生物檢驗［M］.北京：人民衛生出版社，2003：528.

［2］黃薇，蔡炯，黃劍屏，等.疾病預防控制系統微生物實驗室質量控制與評價［J］.中國衛生檢驗雜志，2007，17（1）：134-135.

［3］中國國家標準化管理委員會.GB／T27405-2008實驗室質量控制控制規范-食品微生物檢測［S］.北京：中國標準出版社，2008：21.

［4］中國國家標準化管理委員會.GB／T16294-2010醫藥工業潔凈室（區）沉降菌的測試方法［S］.北京：中國標準出版社，2011：13-17.