結核感染T細胞斑點試驗診斷結核性心包積液的意義

彭勇+陳偉寧

[關鍵詞]結核；T SPOT.TB試驗；心包積液

中圖分類號：R542.1+2文獻標識碼：B文章編號：1009_816X（2014）03_0260_02

doi：10.3969/j.issn.1009_816x.2014.03.36結核感染T細胞斑點試驗（T_SPOT.TB）通過酶聯免疫斑點技術（ELISPOT）檢測外周血中經結核菌特異性抗原刺激后釋放γ干擾素的T細胞，診斷結核分枝桿菌感染具有較高的敏感性和特異性，本文主要針對我院收治的高度懷疑結核性心包積液患者的外周血液行ELISPOT檢測，探討該方法對結核性心包積液的診斷價值。

1資料與方法

1.1一般資料：選取我院2011年11月至2013年11月住院患者48例，根據以下標準，將患者分為兩組：觀察組擬診結核性心包積液組21例，其中男12例，女9例，年齡16～72（38.9±13.5）歲，包括結核桿菌培養陽性、或結核桿菌培養陰性，但臨床表現、影像學檢查疑似結核，抗結核治療有效的患者；對照組27例，其中男15例，女12例，年齡14～75（48.3±18.7）歲； 其中7例非結核感染性滲出性心包積液、8例癌性心包積液（肺癌5例、淋巴瘤1例、乳腺癌2例） 、11例與心力衰竭有關、1例與腎上腺功能減退有關。所有病例均排除HIV感染。

1.2方法：

1.2.1T_SPOT.TB檢測：根據T_SPOT.TB試劑盒（Oxford Immunotec，Oxford UK）操作。肝素抗凝管采集6ml外周靜脈血，樣本室溫（15～25℃）保存與運輸，樣本采集后盡早（24小時內）送到杭州市艾迪康醫學檢驗中心。密度梯度離心法分離外周血單個核細胞（PBMCs）。洗滌后進行細胞計數。PBMCs和結核特異性抗原同時加入包被抗體的反應孔中，孵育過夜（37℃，5% CO2），效應T淋巴細胞釋放細胞因子，與預包被的抗體結合。洗板，加入二抗，孵育1小時。洗板，加入底物顯色液孵育7分鐘。蒸餾水終止反應。一個斑點代表一個效應T淋巴細胞。

1.2.2結果判定：根據T SPOT.TB試劑盒使用說明書。結果包括陰性對照、抗原A、抗原B和陽性對照。陽性結果參照以下標準：陰性對照孔斑點數0～5個，且（抗原A或者抗原B）-（陰性對照孔斑點數）≥6 。陰性對照孔斑點數6～10個，且（抗原A或者抗原B）≥2×（陰性對照孔斑點數）。如果上述標準不符合且陽性對照孔正常示檢測結果為“陰性”。

1.3評價指標：采用敏感性、特異性、陽性預測值（PPV）、 陰性預測值（NPV）。

1.4統計學處理：應用SPSS 16.0版統計軟件，率的比較采用卡方檢驗，對各組檢出陽性率進行統計學分析，P<0.05表示差異有統計學意義。

2結果

在觀察組21例可疑結核性心包積液患者中，20例T_SPOT TB試驗陽性，陰性1例；在對照組27例中T_SPOT TB試驗陽性4例，陰性23例。T_SPOT.TB試驗診斷結核性心包積液的敏感性為95.2%，特異性為85.2%，陽性預測值為83.3%，陰性預測值為95.8%。

3討論

肺外結核是指發生在肺部以外的全身其他臟器的結核感染，結核性心包積液屬肺外結核感染導致的滲出性病變。國外資料顯示肺外結核約占結核病的20%左右，在中國約占結核病的9.7%～11.8%，病死率占總結核病病死率的14.1%～17.6%[1]?，F在診斷肺外結核仍存在一定困難，結核菌素試驗（TST）雖然是目前篩查結核感染的主要的輔助手段，但有很多局限性，Madariaga等[2]對47例痰菌陽性的結核患者進行檢測，結果表明T_SPOT TB診斷活動性結核比TST的靈敏度高。目前，大量研究證實，T_SPOT TB檢測對于潛伏性結核感染及活動性肺結核具有較高的敏感性及特異性。Kim等[3]隨診72例疑診肺外結核患者的前瞻性研究顯示，對于活動性肺外結核，T_SPOT.TB的敏感性為94%，TST敏感性為47%。類似TST，如果T_SPOT.TB的斑點數在短時間內顯著增加，則強烈提示體內活動性結核，此時給予預防性治療十分必要[4]。

本文局限性在于例數較少，若準確評價外周血T_SPOT.TB檢測在中國人群診斷心包結核應用價值，尚需要進行大樣本、前瞻性隊列研究。此外，T_SPOT.TB結果的可靠性、穩定性與各個實驗室的質量控制水平有關。

參考文獻

[1]Mori T， Sakatani M， Yamagishi F， et al. Specific detection of tuberculosis infection： an interferon_gamma_based assay using new antigens[J]. Am J Respir Crit Care Med，2004，170（1）：59-64.

[2]Madariaga MG， Jalali Z， Swindells S. Clinical utility of interferon gamma assay in the diagnosis of tuberculosis[J]. Am Board Fam Med，2007，20（6）：540-547.

[3]Kim SH， Song KH， Choi SJ. Diagnostic usefulness of a T_cell_based assay for extrapulmonary tuberculosis in immunocompromised patients[J]. Am J Med，2009，122（2）：189-195.

[4]Pai M， Zwerling A， Menzies D. T_cell_based assays for the diagnosis of latent tuberculosis infection： an update[J]. Ann Intern Med，2008，149（3）：177-184.

（收稿日期：2013_12_26）