hTERC在宮頸脫落細胞及宮頸活檢中表達

文麗芳+丁進進

摘 要：通過檢測HR-HPV感染的宮頸脫落細胞和宮頸活檢中hTERC的表達，并對實驗結果進行比較分析，探討其與宮頸病變的相關性。對84例HR-HPV陽性（宮頸活檢結果為正常及慢性炎 12例、CINⅠ20例、CINⅡ20例、CINⅢ20例 、SCC 12例）應用熒光原位雜交技術（FISH檢測），分別檢測患者的宮頸脫落細胞和宮頸活檢組織中hTERC的表達；應用受試者工作特征曲線（ROC曲線），分別確立細胞學和組織學中宮頸高度鱗狀上皮內病變的最佳界值。實驗結果為：①在正常及慢性炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ 、SCC組所對應的宮頸脫落細胞中，hTERC基因擴增的陽性率分別為8.33%（1/12）、15.00%（3/20）、80.00%（16/20）、90.00%（18/20）、100%（12/12），與宮頸病變的惡性程度呈正相關（rs=0.713，p<0.001）。②在正常及慢性炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ 、SCC組所對應的的宮頸活檢中，hTERC基因擴增的陽性率分別為16.67%（2/12）、25.00%（5/20）、80.00%（16/20）、95.00%（19/20）、100%（12/12），與宮頸病變的惡性程度呈正相關（rs=0.671，p<0.001）。③宮頸脫落細胞中hTERC的擴增在預測≥CINⅡ病變中的敏感度、特異度，分別為92.00%和82.35%；宮頸活檢組織中hTERC預測≥CINⅡ的敏感度、特異度，分別為87.03%和83.33%.實驗可以得出：hTERC在HR-HPV陽性宮頸病變患者宮頸脫落細胞和宮頸活檢組織中的表達具有一致性，hTERC在預測HR-HPV陽性且宮頸細胞學檢查為異常的宮頸病變的病理結果中具有重要的意義。

關鍵詞：hTERC；宮頸；脫落細胞；活檢

中圖分類號：R737.33 文獻標識碼：A 文章編號：2095-6835（2014）11-0155-02

hTERC（Human Telomerase RNA Component，人端粒酶RNA組成基因）位于人類3號染色體長臂，其異常擴增可導致腫瘤的發生。目前研究證明，hTERC在子宮頸鱗癌或腺癌、食管鱗癌、肺鱗癌等多種惡性腫瘤中存在異常擴增，與腫瘤的發展密切相關。目前研究顯示，hTERC在宮頸活檢和宮頸脫落細胞中的表達與宮頸病變具有一定的相關性。HR-HPV（High-risk Human Papilloma Virus，高危型人乳頭瘤病毒）感染是宮頸上皮內瘤變和宮頸癌的主要致病原因，這一點已達成共識，但在15%～20%HPV持續感染病例中，只有低于5%發生宮頸癌。因此，如何從HPV感染者中分流出真正具有癌變風險的人群，是當前所面臨的難題。本研究通過檢測HR-HPV陽性宮頸脫落細胞和宮頸活檢中hTERC的表達，并對實驗結果進行比較分析，探討其在HR-HPV陽性患者宮頸病變中診斷分流的意義。

1 資料來源

選擇2013-07—2014-04就診于山西省汾陽醫院門診HR-HPV陽性，且均有宮頸活檢結果的宮頸脫落細胞學標本84例。患者年齡27～62歲，中位年齡37歲，均為有性生活婦女，其中宮頸活檢結果為正常12例、CINⅠ20例、CINⅡ20例、CINⅢ20例、SCC12例。用熒光原位雜交技術檢測宮頸脫落細胞和宮頸活檢組織中hTERC基因擴增情況。

2 實驗方法

應用熒光原位雜交技術，按照參考文獻分別檢測宮頸脫落細胞和宮頸活檢中hTERC基因拷貝數，hTERC/CSP3DNA雙色熒光探針（購自廣州安必平科技有限公司）。hTERC DNA探針作為檢測探針，雜交到3號染色體長臂，熒光信號為紅色（四甲基羅丹明）；CSP3DNA作為對照探針，雜交到3號染色體著絲粒，熒光信號為綠。正常細胞為單個細胞核中紅綠信號各2個，hTERC基因擴增異常細胞為單個細胞核中紅信號>2個，綠信號≥2個。每張片子隨機計數100個細胞，記錄陽性信號細胞的個數和信號模式，繪制ROC曲線，確定高度鱗狀上皮內病變（CINⅡ/Ⅲ/SCC）的陽性界值。本實驗宮頸脫落細胞中驗臨界值為6%，宮頸活檢中的臨界值為11%，

3 統計學分析

采用SPSS1 6.0統計軟件進行分析，比較各級病變中hTERC基因的擴增的陽性率；采用卡方檢驗，檢驗水準α=0.05；利用Spearman秩相關檢驗，分析hTERC的表達與宮頸病變的相關性。

4 實驗結果

4.1 宮頸脫落細胞中hTERC基因的檢測結果

在84例患者中，50例hTERC擴增陽性。在正常及慢性炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ 、SCC組所對應的宮頸脫落細胞中hTERC基因擴增的陽性率分別為8.33%（1/12）、15.00%（3/20）、80.00%（16/20）、90.00%（18/20）、100%（12/12），五組間比較差異具有統計學意義（（x2=48.858，p<0.001）。Spearman秩相關檢驗顯示宮頸脫落細胞中hTERC的擴增與宮頸病變的惡性程度呈正相關，rs=0.713，p<0.001）。

宮頸脫落細胞中hTERC的擴增在預測≥CINⅡ病變中的敏感度、特異度，分別為92.00%和82.35%.

4.2 宮頸活檢組織中hTERC基因的檢測結果

在84例患者中，54例hTERC擴增陽性。在正常及慢性炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ 、SCC組所對應的的宮頸活檢中hTERC基因擴增的陽性率分別為16.67%（2/12）、25.00%（5/20）、80.00%（16/20）、95.00%（19/20）、100%（12/12），五組間比較差異具有統計學意義（（x2=42.332，p<0.001）。Spearman秩相關檢驗顯示宮頸脫落細胞中hTERC的擴增與宮頸病變的惡性程度呈正相關，rs=0.671，p<0.001）。endprint

宮頸活檢組織中hTERC預測≥CINⅡ的敏感度、特異度，分別為87.03%和83.33%.

5 討論

hTERC與端粒酶逆轉錄酶、端粒酶結合蛋白等共同參與端粒的組成，在人類端粒酶RNA基因中，在長約450個堿基的人端粒酶RNA序列中，有一段長11個核苷酸區域，發生在該模板區域的hTERC突變，將導致端粒酶功能改變，從而出現染色體異常。 hTERC基因由Feng等于1995年首次從腎癌293細胞系eDNA文庫中篩選出，定位于3q26區，是合成端粒重復序列的模板。其模板序列為5—CUAACCCUAAC—3。雖然大量實驗證明，HPV感染是宮頸癌的主要致病因素，甚至95%的癌前病變患者攜帶HPV癌基因；但在15%～20%HPV持續感染病例中，只有低于5%發生宮頸癌。只有當病毒持續感染且整合入宿主細胞，才會發展為宮頸高度鱗狀上皮內病變。目前研究顯示，hTERC在宮頸病變中的表達與宮頸病變具有一定的相關性。本課題較之前的研究不同，主要集中在對HR-HPV感染的宮頸脫落細胞和宮頸活檢組織中的表達，通過檢測宮頸脫落細胞與宮頸活檢中hTERC基因的表達，發現二者的表達具有很好的一致性，hTERC的表達與宮頸病變的惡性程度呈正相關，預測宮頸高度上皮內病變的敏感度和特異度均較高。宮頸脫落細胞中hTERC的表達完全可以替代宮頸活檢組織中hTERC的表達，對宮頸病變的活檢結果提供一定的預測價值。對于hTERC擴增陽性的宮頸低度病變應密切隨訪，對于hTERC擴增陰性的宮頸低度病變可延長隨訪時間；而對于hTERC擴增陽性的宮頸高度上皮內病變，要警惕宮頸浸潤癌的可能，并且及時治療。

關于FISH檢測宮頸高度鱗狀上皮內病變中hTERC最佳界值的確定，目前主要有兩種方法：一種為均數加減3倍的標準差；另一種為以宮頸活檢為≥CINⅡ為金標準，繪制受試者特征曲線（ROC曲線），我們在這里更推薦后者。該界值的范圍國內外報道多在5%～20%，本研究中應用ROC曲線確立宮頸脫落細胞中和宮頸活檢中高度鱗狀上皮內病變界值，分別為6%和11%，二者的誤差考慮為宮頸活檢組織中FISH細胞雜交的成功率略高于宮頸脫落細胞。對于不同文獻報道中界值的誤差考慮，與樣本含量、是否合并HPV的感染及感染類型具有一定的相關性。總之，宮頸脫落細胞、宮頸活檢組織中hTERC基因擴增與宮頸癌前病變和宮頸癌的發生相關，利用FISH技術檢測hTERC的擴增，可對HR-HPV陽性患者病理診斷和可能的進展進行預測，避免宮頸癌前病變的診斷不足、宮頸低度病變的過度治療，對長期無價值的隨訪等具有一定的意義。

參考文獻

[1]Heselmeyer·Haddad K，Sommerfeld K，White NM，et a1.Ge-nomic amplification of the human telomerase gene（TERC）in papsmears predicts the development of cervical cancer[J].Am J Pathol，2005（04）.

[2]Andersson S，Wallin KL，Hellstrom AC，et a1.Frequent gain of the human telomerase gene TERC at 3q26 in cervical adenocarcinomas[J].Br J cancer，2006（03）.

[3]Chen Q，Wang X，Ru Y，et a1.Amplification of the telomcrascRNA component gene in the process of human esophageal carcinogenesis[J].Tohoku J Exp Med，2011（02）.

[4]Bobadilla D，Enriquez EL，Alvarez G，et a1.An interphase fluorescenee in situ hybridization assay for the detection of 3q26.2/EVI，rearrangements in myeloid malignancies[J].Br J Haema—tol，2007（06）.

[5]李靜然，魏麗惠，劉寧，等.應用雙色間期FISH技術中宮頸脫落細胞取材及制片方法的探討[J].中國婦產科臨床雜志，2007（06）.

[6]李素紅，劉玲玲，馬海霞，等.宮頸上皮癌變過程中人端粒酶逆轉錄酶基因擴增與人乳頭狀瘤病毒的表達[J].中華病理學雜志，2012（02）.

[7]Feng J，Funk WD，Wang SS，et a1.The RNA componet of human telomerase [J].Science，1995（522a）.

〔編輯：李玨〕endprint

宮頸活檢組織中hTERC預測≥CINⅡ的敏感度、特異度，分別為87.03%和83.33%.

5 討論

hTERC與端粒酶逆轉錄酶、端粒酶結合蛋白等共同參與端粒的組成，在人類端粒酶RNA基因中，在長約450個堿基的人端粒酶RNA序列中，有一段長11個核苷酸區域，發生在該模板區域的hTERC突變，將導致端粒酶功能改變，從而出現染色體異常。 hTERC基因由Feng等于1995年首次從腎癌293細胞系eDNA文庫中篩選出，定位于3q26區，是合成端粒重復序列的模板。其模板序列為5—CUAACCCUAAC—3。雖然大量實驗證明，HPV感染是宮頸癌的主要致病因素，甚至95%的癌前病變患者攜帶HPV癌基因；但在15%～20%HPV持續感染病例中，只有低于5%發生宮頸癌。只有當病毒持續感染且整合入宿主細胞，才會發展為宮頸高度鱗狀上皮內病變。目前研究顯示，hTERC在宮頸病變中的表達與宮頸病變具有一定的相關性。本課題較之前的研究不同，主要集中在對HR-HPV感染的宮頸脫落細胞和宮頸活檢組織中的表達，通過檢測宮頸脫落細胞與宮頸活檢中hTERC基因的表達，發現二者的表達具有很好的一致性，hTERC的表達與宮頸病變的惡性程度呈正相關，預測宮頸高度上皮內病變的敏感度和特異度均較高。宮頸脫落細胞中hTERC的表達完全可以替代宮頸活檢組織中hTERC的表達，對宮頸病變的活檢結果提供一定的預測價值。對于hTERC擴增陽性的宮頸低度病變應密切隨訪，對于hTERC擴增陰性的宮頸低度病變可延長隨訪時間；而對于hTERC擴增陽性的宮頸高度上皮內病變，要警惕宮頸浸潤癌的可能，并且及時治療。

關于FISH檢測宮頸高度鱗狀上皮內病變中hTERC最佳界值的確定，目前主要有兩種方法：一種為均數加減3倍的標準差；另一種為以宮頸活檢為≥CINⅡ為金標準，繪制受試者特征曲線（ROC曲線），我們在這里更推薦后者。該界值的范圍國內外報道多在5%～20%，本研究中應用ROC曲線確立宮頸脫落細胞中和宮頸活檢中高度鱗狀上皮內病變界值，分別為6%和11%，二者的誤差考慮為宮頸活檢組織中FISH細胞雜交的成功率略高于宮頸脫落細胞。對于不同文獻報道中界值的誤差考慮，與樣本含量、是否合并HPV的感染及感染類型具有一定的相關性。總之，宮頸脫落細胞、宮頸活檢組織中hTERC基因擴增與宮頸癌前病變和宮頸癌的發生相關，利用FISH技術檢測hTERC的擴增，可對HR-HPV陽性患者病理診斷和可能的進展進行預測，避免宮頸癌前病變的診斷不足、宮頸低度病變的過度治療，對長期無價值的隨訪等具有一定的意義。

參考文獻

[1]Heselmeyer·Haddad K，Sommerfeld K，White NM，et a1.Ge-nomic amplification of the human telomerase gene（TERC）in papsmears predicts the development of cervical cancer[J].Am J Pathol，2005（04）.

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[7]Feng J，Funk WD，Wang SS，et a1.The RNA componet of human telomerase [J].Science，1995（522a）.

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宮頸活檢組織中hTERC預測≥CINⅡ的敏感度、特異度，分別為87.03%和83.33%.

5 討論

hTERC與端粒酶逆轉錄酶、端粒酶結合蛋白等共同參與端粒的組成，在人類端粒酶RNA基因中，在長約450個堿基的人端粒酶RNA序列中，有一段長11個核苷酸區域，發生在該模板區域的hTERC突變，將導致端粒酶功能改變，從而出現染色體異常。 hTERC基因由Feng等于1995年首次從腎癌293細胞系eDNA文庫中篩選出，定位于3q26區，是合成端粒重復序列的模板。其模板序列為5—CUAACCCUAAC—3。雖然大量實驗證明，HPV感染是宮頸癌的主要致病因素，甚至95%的癌前病變患者攜帶HPV癌基因；但在15%～20%HPV持續感染病例中，只有低于5%發生宮頸癌。只有當病毒持續感染且整合入宿主細胞，才會發展為宮頸高度鱗狀上皮內病變。目前研究顯示，hTERC在宮頸病變中的表達與宮頸病變具有一定的相關性。本課題較之前的研究不同，主要集中在對HR-HPV感染的宮頸脫落細胞和宮頸活檢組織中的表達，通過檢測宮頸脫落細胞與宮頸活檢中hTERC基因的表達，發現二者的表達具有很好的一致性，hTERC的表達與宮頸病變的惡性程度呈正相關，預測宮頸高度上皮內病變的敏感度和特異度均較高。宮頸脫落細胞中hTERC的表達完全可以替代宮頸活檢組織中hTERC的表達，對宮頸病變的活檢結果提供一定的預測價值。對于hTERC擴增陽性的宮頸低度病變應密切隨訪，對于hTERC擴增陰性的宮頸低度病變可延長隨訪時間；而對于hTERC擴增陽性的宮頸高度上皮內病變，要警惕宮頸浸潤癌的可能，并且及時治療。

關于FISH檢測宮頸高度鱗狀上皮內病變中hTERC最佳界值的確定，目前主要有兩種方法：一種為均數加減3倍的標準差；另一種為以宮頸活檢為≥CINⅡ為金標準，繪制受試者特征曲線（ROC曲線），我們在這里更推薦后者。該界值的范圍國內外報道多在5%～20%，本研究中應用ROC曲線確立宮頸脫落細胞中和宮頸活檢中高度鱗狀上皮內病變界值，分別為6%和11%，二者的誤差考慮為宮頸活檢組織中FISH細胞雜交的成功率略高于宮頸脫落細胞。對于不同文獻報道中界值的誤差考慮，與樣本含量、是否合并HPV的感染及感染類型具有一定的相關性。總之，宮頸脫落細胞、宮頸活檢組織中hTERC基因擴增與宮頸癌前病變和宮頸癌的發生相關，利用FISH技術檢測hTERC的擴增，可對HR-HPV陽性患者病理診斷和可能的進展進行預測，避免宮頸癌前病變的診斷不足、宮頸低度病變的過度治療，對長期無價值的隨訪等具有一定的意義。

參考文獻

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[2]Andersson S，Wallin KL，Hellstrom AC，et a1.Frequent gain of the human telomerase gene TERC at 3q26 in cervical adenocarcinomas[J].Br J cancer，2006（03）.

[3]Chen Q，Wang X，Ru Y，et a1.Amplification of the telomcrascRNA component gene in the process of human esophageal carcinogenesis[J].Tohoku J Exp Med，2011（02）.

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[5]李靜然，魏麗惠，劉寧，等.應用雙色間期FISH技術中宮頸脫落細胞取材及制片方法的探討[J].中國婦產科臨床雜志，2007（06）.

[6]李素紅，劉玲玲，馬海霞，等.宮頸上皮癌變過程中人端粒酶逆轉錄酶基因擴增與人乳頭狀瘤病毒的表達[J].中華病理學雜志，2012（02）.

[7]Feng J，Funk WD，Wang SS，et a1.The RNA componet of human telomerase [J].Science，1995（522a）.

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