轉化生長因子-β1在家兔羊水栓塞后肺損傷中的作用

岳 艷，范 麗，劉伯毅（湖北醫(yī)藥學院附屬人民醫(yī)院婦產科，湖北十堰 442000）

羊水栓塞（amniotic fluid embolism，AFE）是由于羊水進入母體血液循環(huán)而引起的一系列嚴重的臨床綜合征，發(fā)病急，病情進展迅速，病死率高。AFE后患者易出現(xiàn)急性肺損傷與急性呼吸窘迫綜合征（ARDS），部分患者死于嚴重的低氧血癥。本研究旨通過動物實驗，探討AFE后肺損傷的機制，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 動物模型制作 健康妊娠晚期（24～26d）家兔20只，體質量3.3～4.0kg（湖北醫(yī)藥學院動物實驗中心提供）。隨機分為兩組：對照組（生理鹽水組）及羊水組，每組各10只。術前禁食12h，禁水2h。用3%戊巴比妥鈉30mg／kg靜脈注射麻醉，仰臥固定于兔臺上，固定頭部和四肢，備皮，常規(guī)局部消毒、鋪巾，腹正中線切口10cm，暴露子宮并切開子宮，取出胎兔、胎盤，用注射器抽取羊膜腔羊水300mL備用。羊水組家兔經耳緣靜脈注射羊水3mL／kg，對照組注射生理鹽水3mL／kg，1h后處死動物，切開家兔胸腔，取肺組織備用。

1.2 實驗方法

1.2.1 病理學檢查 取一小塊肺組織用4%多聚甲醛溶液固定5h，用磷酸緩沖液（PBS）沖洗，石蠟包埋、切片、HE染色，在顯微鏡下觀察肺組織病理學變化。

1.2.2 肺組織轉化生長因子-β1（TGF-β1）表達的檢測 取肺組織稱重，加生理鹽水（按100mg肺組織，加生理鹽水0.9mL比例），用玻璃勻漿器制備肺組織勻漿，以1 000r／min的速度離心20min，取上清液，置于-20℃冰箱凍存，采用鏈霉素親和素-生物素-過氧化酶復合物（SABC）法對肺組織 TGF-β1蛋白表達進行免疫組織化學染色（試劑盒及TGF-β1的單克隆抗體購自武漢博士德生物工程有限公司）。按照試劑盒操作步驟操作，以PBS代替一抗作陰性對照，陽性染色為細胞質呈棕黃色。采用MIAS-2000醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)，進行蛋白半定量分析，以最大灰度值反映TGF-β1蛋白表達量。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS15.0軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 肺組織病理變化 羊水組可見肺間質及肺泡水腫、充血，肺泡可見炎癥細胞浸潤（圖1）。

2.2 肺組織TGF-β1見圖2。對照組肺組織TGF-β1呈陰性表達，為（5.02±0.76）μg／L；羊水組肺組織 TGF-β1胞質可見棕黃色染色，呈陽性表達，為（19.85±1.92）μg／L，兩組 TGF-β1水平比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

圖1 家兔肺組織（HE×200）

圖2 家兔肺組織TGF-β1的表達

3 討 論

本研究中羊水組可見肺間質及肺泡水腫、充血，提示肺部發(fā)生肺損傷。近年來，AFE后肺部病理變化受到重視［1］，許多患者AFE后因ALI／ARDS，而出現(xiàn)頑固性低氧血癥危及患者生命AFE后肺損傷的機制：（1）羊水進入肺循環(huán)導致肺血管痙攣、肺動脈高壓、換氣功能下降［2］；（2）肺部白三烯、前列腺素、補體等物質釋放，導致肺部炎性反應，引起肺損傷［3］；（3）大量中性粒細胞在肺泡腔內黏附、聚集、活化，介導炎性反應加重肺損害［4］。部分研究發(fā)現(xiàn)，AFE后肺損傷發(fā)病機制及病理生理變化復雜，某些機制不明［5-6］。

TGF-β是一種多功能細胞因子，TGF-β1是TGF-β亞型，能調節(jié)多種細胞的增殖、分化、凋亡和合成細胞外基質等，在組織的發(fā)生、發(fā)育及損傷后修復過程中發(fā)揮重要作用［7］。TGF-β1在多種細胞和組織中均有表達，在肺部主要表達于氣道上皮及肺泡巨噬細胞，妊娠期可表達于胎盤滋養(yǎng)層細胞、子宮蛻膜細胞、肌層細胞及羊水中，對滋養(yǎng)層細胞和蛻膜細胞內分泌、免疫及黏附分子表達功能及胚胎發(fā)育均具有重要的調節(jié)作用［8］。AFE后TGF-β1與肺損傷的關系目前并無相關研究，本實驗發(fā)現(xiàn)，羊水組肺組織TGF-β1明顯升高（P＜0.05），而對應的病理切片有炎癥細胞浸潤和肺實質及間質水腫和充血。表明TGF-β1在AFE后肺損傷發(fā)病機制上有重要作用。肺損傷后肺組織TGF-β1表達升高機制尚不明確［9］。升高的TGF-β1引起肺損傷的機制：（1）TGF-β1作用于細胞纖維化的多個環(huán)節(jié)，刺激各種細胞外基質起作用，使纖維化降解抑制劑的合成增加，基質降解酶減少，導致肺纖維化，加重肺損傷［10］；（2）TGF-β1抑制肺表面活性物質，誘導肺細胞凋亡［11］，導致肺泡壁上皮細胞和血管內皮細胞通透性增高、肺泡炎癥和水腫；（3）TGF-β1抑制肺內皮細胞、上皮細胞增殖［12］，使損傷的肺組織得不到及時的修復。

綜上所述，AFE肺損傷發(fā)生與TGF-β1表達升高密切相關，從而導致肺組織損傷、纖維化，同時因損傷的肺組織不能及時修復，加重肺損傷。抑制TGF-β1表達，可以減輕或預防肺損傷，改善AFE患者預后。

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