參紅補(bǔ)血顆粒對(duì)乙酰苯肼/環(huán)磷酰胺血虛證模型動(dòng)物免疫調(diào)節(jié)相關(guān)因子的影響

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(1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，長(zhǎng)春 130117；2.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院，北京 100700)

參紅補(bǔ)血顆粒對(duì)乙酰苯肼/環(huán)磷酰胺血虛證模型動(dòng)物免疫調(diào)節(jié)相關(guān)因子的影響

張文卓1，楊海淼1，張碩1，常影1，崔云晶1，仇志凱1，段青2，黃曉巍1*

(1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，長(zhǎng)春 130117；2.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院，北京 100700)

目的 觀察參紅補(bǔ)血顆粒對(duì)乙酰苯肼/環(huán)磷酰胺血虛證模型動(dòng)物免疫調(diào)節(jié)相關(guān)因子的變化，探討參紅補(bǔ)血顆粒對(duì)血虛證動(dòng)物免疫功能的影響及相關(guān)機(jī)制。方法 采用乙酰苯肼/環(huán)磷酰胺復(fù)合因素復(fù)制血虛證動(dòng)物模型,酶聯(lián)免疫法檢測(cè)動(dòng)物血清白細(xì)胞介素-2(IL-2)，白細(xì)胞介素-6(IL-6)，腫瘤壞死因子(TNF)的含量變化,取脾臟，計(jì)算脾臟系數(shù)。結(jié)果 參紅補(bǔ)血顆粒各給藥組動(dòng)物血清中IL-2、IL-6、TNF含量均明顯高于模型組(P<0.05,P<0.01)，脾臟指數(shù)均低于模型組(P<0.05)。結(jié)論 參紅補(bǔ)血顆粒可增加與免疫功能有關(guān)的細(xì)胞因子的含量，降低脾臟系數(shù)，提示參紅補(bǔ)血顆粒可能通過(guò)調(diào)節(jié)與免疫功能有關(guān)的細(xì)胞因子，改善血虛證模型動(dòng)物的免疫功能。

參紅補(bǔ)血顆粒；血虛證；IL-2；IL-6；TNF；脾臟系數(shù)

血虛證屬中醫(yī)“虛勞”“血虛”“血證”“血枯”“亡血”等范疇，見(jiàn)于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中的再生障礙性貧血，腫瘤放化療后的貧血、慢性消耗性疾病等造血功能障礙性疾病[1-2]。參紅補(bǔ)血顆粒主要由紅參、紅景天、黃精、丹參、麥冬等組成，具有益氣滋陰、補(bǔ)血活血的功效，作為院內(nèi)制劑應(yīng)用多年，對(duì)血虛證治療有明顯的療效。本研究采用乙酰苯肼/環(huán)磷酰胺復(fù)合因素復(fù)制血虛證動(dòng)物模型,觀察參紅補(bǔ)血顆粒對(duì)模型動(dòng)物免疫功能相關(guān)因子的變化，探討參紅補(bǔ)血顆粒對(duì)血虛證動(dòng)物免疫功能的影響及相關(guān)機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料 ICR小鼠，60只，雌雄各半，體質(zhì)量(18±2)g，吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供(動(dòng)物合格證號(hào)20144877)；參紅補(bǔ)血顆粒：長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)研究中心制備(每克含生藥量1.39 g)；復(fù)方阿膠漿：山東東阿阿膠股份有限公司產(chǎn)品(批號(hào)：111154)；注射用環(huán)磷酰胺：Baxter Oncology GmbH公司產(chǎn)品(批號(hào)：1B640A)；乙酰苯肼：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司(批號(hào)：F20110127)；IL-2試劑盒、IL-6試劑盒、TNF試劑盒,均購(gòu)自美國(guó)R&D公司。

1.2 儀器 血液分析儀(MEK-6318K型，日本)；恒溫箱(ULT1386-3-V41型，美國(guó));酶標(biāo)儀(BIO RAD-680型，日本)；臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)(Biofuge stratos型，德國(guó))。

1.3 方法

1.3.1 血虛證動(dòng)物模型的復(fù)制[3-5]除空白對(duì)照組外,其他各組動(dòng)物于實(shí)驗(yàn)第2天，經(jīng)皮下注射乙酰苯肼20 mg/kg,于第4天 ，再次皮下注射乙酰苯肼40 mg/kg,同時(shí)從第4天起，動(dòng)物經(jīng)腹腔注射環(huán)磷酰胺40 mg/kg，1次/d，連續(xù)4 d。復(fù)制血虛證動(dòng)物模型。空白對(duì)照組動(dòng)物皮下注射等容量生理鹽水。

1.3.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥方法 取小鼠60只，雌雄各半，隨機(jī)分為6組，即空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、參紅補(bǔ)血顆粒高、中、低劑量組，每組10只。

1.3.3 給藥劑量與方法 于實(shí)驗(yàn)第1天起開(kāi)始給予受試藥物，劑量分別為：參紅補(bǔ)血顆粒高劑量組9 g/kg、中劑量組6 g/kg、低劑量組3 g/kg，陽(yáng)性對(duì)照組給予復(fù)方阿膠漿11 mL/kg，空白對(duì)照組與模型對(duì)照組小鼠給予等容量蒸餾水。1次/d，連續(xù)給藥14 d。末次給藥后30min，眶靜脈取血，室溫靜置4 h后，2 500 r/min離心10 min，分離出血清,-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.4 觀察指標(biāo) 白細(xì)胞介素2(IL-2)、白細(xì)胞介素6(IL-6)、腫瘤壞死因子(TNF)。脾臟指數(shù)：處死小鼠后，在無(wú)菌條件下取出脾臟， 脾臟用濾紙吸干殘血后稱(chēng)重。脾臟指數(shù)=脾臟濕重(g)/體質(zhì)量(g)×100%。

2 結(jié)果

2.1 參紅補(bǔ)血顆粒對(duì)血虛模型小鼠血清IL-2含量的影響 見(jiàn)表1。

表1 各組動(dòng)物血清IL-2表達(dá)水平的比較 pg/mL

注：與空白對(duì)照組比較,#P<0.05；與模型組比較,△P<0.05

2.2 參紅補(bǔ)血顆粒對(duì)血虛模型小鼠血清白細(xì)胞介素-6(IL-6)水平的影響 見(jiàn)表2。

2.3 參紅補(bǔ)血顆粒對(duì)血虛模型小鼠血清TNF水平的影響 見(jiàn)表3。

表2 各組動(dòng)物血清IL-6表達(dá)水平的比較 pg/mL

注:與空白對(duì)照組比較,#P<0.05；與模型組比較,△P<0.05,△△P<0.01

表3 各組動(dòng)物血清TNF表達(dá)水平的比較 pg/mL

注：與空白對(duì)照組比較，##P<0.01；與模型組比較，△P<0.05

2.4 參紅補(bǔ)血顆粒對(duì)血虛模型小鼠脾臟指數(shù)的影響 見(jiàn)表4。

表4 各組動(dòng)物脾臟指數(shù)的比較 pg/mL

注:與空白對(duì)照組比較,##P<0.001；與模型組比較,△△P<0.01

3 討論

祖國(guó)醫(yī)學(xué)認(rèn)為，人身不外氣、血二字，氣血為人體立命之本，氣衛(wèi)于外，血營(yíng)于內(nèi)，無(wú)形之氣寓于有形之血中，有形之血藏于陽(yáng)氣之內(nèi)，有形之血賴(lài)于無(wú)形之氣推動(dòng)，無(wú)形之氣賴(lài)于有形之血濡養(yǎng)[6]。因此血旺則氣強(qiáng)，血虛則氣弱，衛(wèi)外則不足。參紅補(bǔ)血顆粒正是基于氣血相生相容的密切關(guān)系，通過(guò)益氣滋陰，養(yǎng)血補(bǔ)血。方中紅參具有大補(bǔ)元?dú)猓瑥?fù)脈固脫，益氣攝血等功能，黃精、麥冬具有滋陰補(bǔ)血功效，紅景天、丹參具有補(bǔ)血益氣，扶正固本等功效，諸藥配合具有益氣生血之功效。

研究[7-8]表明，血虛癥與免疫功能相關(guān)，凡機(jī)體氣血兩虛時(shí)，常伴有免疫功能低下，臨床上治療免疫功能異常往往通過(guò)調(diào)理氣血來(lái)實(shí)現(xiàn)。

IL-2具有刺激NK細(xì)胞增殖，增強(qiáng)NK殺傷活性，促進(jìn)B細(xì)胞增殖和分泌抗體、激活巨噬細(xì)胞等多重功能，是參與細(xì)胞免疫的重要因子。IL-6具有刺激活化B細(xì)胞增殖，促進(jìn)抗體分泌，刺激T細(xì)胞增殖,促進(jìn)肝細(xì)胞合成蛋白、促進(jìn)血細(xì)胞發(fā)育等功效,對(duì)細(xì)胞免疫和體液免疫均有明顯的影響。TNF主要由活化的巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，具有免疫調(diào)節(jié)作用[9]。

本研究中采用乙酰苯肼/環(huán)磷酰胺復(fù)合因素復(fù)制血虛證模型動(dòng)物,觀察參紅補(bǔ)血顆粒對(duì)模型動(dòng)物血清IL-2、IL-6和TNF含量的影響，結(jié)果證明,血虛證模型動(dòng)物的上述相關(guān)細(xì)胞因子含量明顯下降，參紅補(bǔ)血顆粒給藥組動(dòng)物血清IL-2、IL-6和TNF含量明顯升高,提示參紅補(bǔ)血顆粒對(duì)血虛證模型動(dòng)物的免疫功能有明顯的調(diào)節(jié)作用。

脾臟是體內(nèi)重要的免疫器官，當(dāng)感染或損傷時(shí)脾臟隨之發(fā)生明顯的變化，脾臟指數(shù)通常可以作為反映免疫功能變化的指標(biāo)。當(dāng)機(jī)體免疫功能受損時(shí)，脾臟可能出現(xiàn)代償性增大，功能亢進(jìn)或臟器充血、水腫或增生等[10]。本研究表明參紅補(bǔ)血顆粒可降低模型動(dòng)物脾臟指數(shù)，表明對(duì)動(dòng)物免疫器官有調(diào)節(jié)作用。

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EffectsofShenhongBuxueGranuleontherelatedcytokinesofimmunoregulationofmodelanimalwithphenylhydrazine/cyclophosphamidetypeofblooddeficiency

ZHANG Wenzhuo1,YANG Haimiao1,ZHANG Shuo1,CHANG Ying1,CUI Yunjing1,QIU Zhikai1,DUAN Qing2,HUANG Xiaowei1*

(1.Changchun University of Traditional Chinese Medicine,Changchun 130117,China;2.China Academy of Traditional Chinese Medicine,Beijing 100700,China)

ObjectiveTo observe the changes ofShenhongBuxueGranuleon the related cytokines of immunoregulation of model animal with phenylhydrazine/cyclophosphamide type of blood deficiency and to explore the effects and related mechanism ofShenhongBuxueGranuleon the immune function of animals with blood deficiency.MethodsModels of animals with blood deficiency were replicated by compound factors of phenylhydrazine/cyclophosphamide.The content changes of IL-2,IL-6 and tumor necrosis factor (TNF) were detected by enzyme-linked immune sorbent assay(ELISA),the spleen was taken out and the spleen coefficient was calculated.ResultsThe content of IL-2,IL-6 e and TNF in every drug group ofShenhongBuxueGranulewas significantly higher than those in the model group(P<0.05，0.01),while the spleen coefficient in every drug group ofShenhongBuxueGranulewas lower than that in the model group(P<0.05).ConclusionsShenhongBuxueGranulecan increase the content of the related cytokines of immune function,decrease the spleen coefficient,showing thatShenhongBuxueGranulemay improve the immune function of model animal with blood deficiency through regulating the related cytokines of immune function.

ShenhongBuxueGranule;blood deficiency syndrome;IL-2;IL-6;TNF;spleen coefficient

10.13463/j.cnki.cczyy.2014.05.006

吉林省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(201109031)。

張文卓(1987-)，女，碩士研究生。研究方向：心腦血管疾病中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)研究。

] 黃曉巍，女，主任藥師，碩士研究生導(dǎo)師，電話：0431-86172281，電子信箱：15948000740@163.com。

R285.5

：A

：2095-6258(2014)05-0776-03

2014-04-22)

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