大腸癌中CD44V6和β-catenin蛋白的表達及相關性研究

姚海燕 張志利

·論著·

大腸癌中CD44V6和β-catenin蛋白的表達及相關性研究

姚海燕 張志利

目的探討CD44V6、β-catenin蛋白與大腸癌臨床病理的關系及其在腫瘤轉移中的作用。方法通過普通病理學及免疫組織化學過氧化物酶標記鏈霉卵白素(S-P)法檢測大腸癌組織73例、正常大腸黏膜組織(對照組)27例中CD44V6、β-catenin蛋白的表達情況。結果CD44V6和β-catenin在正常大腸黏膜中陽性率與大腸癌組織比較，差異有統計學意義(P<0.05)。CD44V6和β-catenin在大腸癌組織中的表達呈正相關(r=0.373，P<0.05)。結論CD44V6和β-catenin的過表達在大腸癌發生、發展過程中發揮重要的作用；二者具有正協同作用，聯合檢測CD44V6和β-catenin蛋白可作為大腸癌進展的生物學指標。

大腸癌；CD44V6；β連環素；免疫組織化學

大腸癌是一種常見的消化道惡性腫瘤,細胞黏附分子(cellular adhesion molecules，CAM)是細胞膜上的一類跨膜糖蛋白，是介導細胞之間以及細胞與細胞外基質連接的重要的大分子。CD44V6及β-連環素(β-catenin，β-cat)均屬于黏附分子家族的成員。本研究收集大腸癌病例73例，正常大腸黏膜27例的石蠟包埋組織及其詳細的臨床資料，通過免疫組織化學方法檢測CD44V6和β-catenin在其表達情況，以研究CD44V6及β-catenin與大腸癌患者的性別、年齡、部位及TNM分期、分化程度、淋巴結轉移之間的關系，探討CD44V6、β-catenin蛋白與大腸癌臨床病理的關系及其在腫瘤轉移中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2008年7月至2010年10月手術切除原發性大腸癌標本。男56例，女17例；年齡32～78歲，中位年齡55歲；結腸癌35例，直腸癌38例；全部患者術前均未經過放化療。另選取正常大腸黏膜組織27例作為對照。

1.2 免疫組織化學染色

1.2.1 主要試劑：CD44V6鼠抗人單克隆抗體(稀釋度：1∶100)(福州邁新公司)β-catenin鼠抗人單克隆抗體(工作液) SP kit試劑盒 DAB kit顯色 PBS 磷酸鹽緩沖 H2O2 過氧化氫 DAB 二氨基聯苯 APES 防脫片膠。

1.2.2 實驗方法：每一標本的蠟塊切片均切2片，每張切片厚度為4～5 μm。分別檢測CD44V6、β-catenin蛋白在正常組織、大腸癌組織的表達情況。免疫組化采用SP法同步檢測CD44V6、β-catenin蛋白的表達情況。均設陽性對照并以PBS溶液代替一抗做空白對照，以排除假陽性結果。

1.3 統計學分析 應用SPSS13.0統計軟件，計數資料比較采用χ2檢驗、Fisher精確概率法、Spearman相關檢驗，P<0.05差異有統計學意義。

2 結果

2.1 CD44V6在正常大腸黏膜組和大腸癌組中的表達 CD44V6在正常大腸黏膜中陽性率與大腸癌組織中比較，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 CD44V6在正常大腸黏膜組和大腸癌組中的表達 例

2.2 β-catenin在正常大腸黏膜組織和大腸癌組織中的免疫組化結果 見表2。

表2 β-catenin在正常大腸黏膜組和大腸癌組中的表達 例

2.3 大腸癌組織中CD44V6和β-catenin的表達之間的相關性 在60例β-catenin表達陽性的患者中，54例CD44V6也表達陽性；而在13例β-catenin表達陰性的患者中，僅7例CD44V6表達陽性， CD44V6和β-catenin在大腸癌組織中的表達呈正相關(r=0.373，P<0.05)。見表3。

3 討論

惡性腫瘤的發生機制、發展過程是多因素和多步驟參與的，而且是多基因突變的復雜過程。CD44V6發揮其作用主要是通過與細胞外某些變種基質成分相結合，一方面參與了腫瘤細胞與細胞外基質的黏附過程，另一方面可能是體細胞內某些信號的傳導機制被激活，促使腫瘤細胞生成蛋白水解酶，加快細胞外基質降解，促進腫瘤細胞擴散。另外，CD44V6陽性細胞更容易與毛細血管微小靜脈中內皮細胞相結合，使腫瘤更容易侵入淋巴系統和循環系統，同時降解產物還能啟動血管的發生機制，這些都可促使CD44V6陽性腫瘤細胞能夠獲得較強的浸潤轉移能力[1]。近年來，越來越多的國內外學者認為，CD44V6的過表達與多種人體惡性腫瘤，如食管癌、胃癌、乳腺癌等的發生機制、發展過程、侵襲及轉移過程密切相關[2]，CD44V6可以作為惡性腫瘤早期診斷、轉移和預后的判斷指標。本組實驗資料顯示，CD44V6在大腸癌組織和大腸正常組織中都有表達，但是CD44V6在大腸癌組織中的表達陽性率顯著高于大腸正常組織，且兩者之間差異有統計學意義(P<0.01)，這說明，CD44V6在大腸癌組織中表達增強，提示CD44V6參與了大腸癌的發生發展過程。

表3 大腸癌組織中CD44V6和β-catenin的表達的相關性 例

β-catenin是連環素家族的成員之一，β-catenin介入信號傳遞與腫瘤發生機制可能是：(1)β-catenin突變后與相關蛋白結合下降導致細胞漿內游離β-catenin水平升高；(2)β-catenin突變使GSK-3β磷酸化位點失活，β-catenin不被降解；(3)β-catenin與轉錄因子Tcf/Lef結合，激活并使靶基因轉錄促進腫瘤發生。細胞內游離狀態的β-catenin以及與E-cadherin、APC等相關蛋白結合狀態的β-catenin共同夠成一個“胞內β-catenin庫”，可以互相達到某種平衡，一旦失衡，則可以導致惡性腫瘤的發生[3]。本研究結果顯示，27例正常大腸黏膜組織中有7例β-catenin陽性表達，陽性表達率為25.9%，73例大腸癌組織中有60例β-catenin陽性表達，陽性信號主要定位于胞漿，陽性表達率為82.8%，β-catenin在大腸癌黏膜組織中的陽性表達高于正常大腸黏膜，兩者間差異有統計學意義(χ2=28.222，P<0.05)。實驗結果證明大腸癌組織中存在β-catenin胞漿異常表達增多，提示β-catenin在大腸癌組織中表達增加的同時伴有結構和功能紊亂，參與了大腸癌的發生過程。

惡性腫瘤的形成機制和轉移過程是一個多基因、多因子共同作用的復雜結果。目前，許多學者提出了多基因協同作用學說，認為在腫瘤發生機制、發展過程及轉移過程中，至少有兩個或兩個以上不同功能的突變癌基因各自發揮作用，互相配合，共同促使細胞癌變及轉移。CD44V6與β-catenin同屬黏附分子家族，參與了細胞與細胞之間和細胞與基質之間的黏附，推測它們可能在介導腫瘤的浸潤過程和轉移過程中起協同作用。本研究結果顯示，在大腸癌組織中，CD44V6和β-catenin的表達呈正相關(r=0.373，P<0.05)。結果提示，隨著CD44V6的表達增加，β-catenin 在大腸癌中也高異位表達，CD44V6和β-catenin在大腸癌的發生發展、浸潤和轉移中可能發揮不同的相互協同作用。目前有關上述指標因子相關性的研究比較少，結果也不盡相同，其間具體的相互作用機理有待進一步研究證實，筆者認為，深層次探尋它們之間的相互作用機理，對于研究阻斷腫瘤發生機制、發展過程及侵襲轉移過程的方法將有重要深遠意義。

1 Kim HR,Wheeler MA,Wilson CM,et al.Hyaluronan facilitates invasion of colon carcinoma cells in vitro via interaction with CD44.Cancer Research 2004,64：4569-4576.

2 Hal NL,Dongen GA,Stigtervan Walsum M,et al.Characterization of CD44V6isoforms in head-and-neck squamouscell carcinoma.Int J Cancer,1999,82:837-845.

3 Cong F，Zhang J，Pao W，et al.A protein knockdown strategy to study the function of beta-cateninin tumor genesis.BMC Mol Bio，2003，4:10.

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.06.018

066000 河北省秦皇島市婦幼保健院(姚海燕)；河北省秦皇島市人民醫院(張志利)

R 735.34

A

1002-7386(2014)06-0854-03

2013-10-16)