石家莊市女性HPV感染情況分析

孫曉慧 趙敏英 藺惠蘭 劉俊霞

·調查研究·

石家莊市女性HPV感染情況分析

孫曉慧 趙敏英 藺惠蘭 劉俊霞

目的研究石家莊市女性宮頸脫落細胞中人乳頭瘤病毒(HPV)的感染狀況及其特點。方法采用核酸分子快速導流雜交技術對石家莊市2 234例女性患者的宮頸脫落細胞進行HPV基因型檢測。結果所測標本中HPV陽性檢出率為36.3%(812/2 234)，21種基因型均被檢出，其中高危型651例，低危型161例。HPV高危型中，陽性率最高的是HPV16型，其他主要基因型依次是HPV52、58、53、18、66、68、31、33、39型；低危型主要為6、11、81(CP8304)型；單一HPV基因型感染的陽性率為17.1%(381/2 234)，多重HPV基因型感染的陽性率為12.1%(270/2 234)。結論石家莊市女性宮頸脫落細胞HPV感染率為36.3%，HPV 16、52、58型是主要的感染基因型。

人乳頭瘤病毒；核酸分子雜交技術；基因型；石家莊

宮頸癌是我國女性最常見的惡性腫瘤之一，近年來宮頸癌的防治研究中認為高危型人乳頭瘤病毒(HPV)持續感染是宮頸癌發生的主要危險因素[1，2]。因此，HPV檢測也成為宮頸癌篩查的必不可少的方法。核酸分子快速導流雜交技術通過寡核苷酸探針雜交可檢出15種高危型別HPV DNA，包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68，及6種低危型別HPV DNA，分別是HPV6、11、81(CP8304)、42、43、44。該技術建立在基因芯片和核酸雜交技術基礎之上，結果具有較高的可信性。因此，本研究通過核酸分子快速導流技術對石家莊市女性宮頸脫落細胞進行HPV基因分型檢測，分析石家莊市女性HPV的感染狀況及分布特點，探討HPV篩查在宮頸病變防治中的價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2011年5月至2013年8月來我院婦科門診就診，有性生活史，自愿接受宮頸脫落細胞HPV感染分型篩查的2 234例女性患者的宮頸脫落細胞標本進行HPV基因型別檢測，年齡18～78歲，中位年齡33歲，受檢者均來自石家莊市及周邊地區。

1.2 儀器及試劑 核酸分子快速雜交基因分型檢測系統，包括PTC-200(MJ Reasearch)PCR擴增儀，HybriMax核酸分子快速導流雜交儀，基因組抽提試劑盒、PCR擴增試劑盒及雜交試劑盒，由凱普生物科技有限公司生產；高速離心機由白洋公司生產；超凈工作臺由蘇州凈工生產。

1.3 方法 (1) 宮頸脫落細胞的采集：先用棉拭子將陰道及宮頸口過多的分泌物輕輕擦拭干凈，再用宮頸刷采集宮頸脫落細胞，然后將其放入含專用細胞保存液的試管中，4℃保存。 (2) HPV DNA的提取 吸取800 μl細胞懸液標本，14 000 r/min離心5 min后，棄上清，留取沉淀。按基因組抽提試劑盒說明書提取HPVDNA。(3)PCR擴增：反應體系25 μl，其中提取的DNA模板為1 μl，每一批同時擴增HPV18型陽性對照和陰性對照各一份。反應條件為95℃ 9 min，95℃ 20 s，55℃ 30 s，72℃ 30 s擴增40個循環，72℃ 延伸5 min。(4) 導流雜交：在HybriMax核酸分子快速導流雜交儀上進行導流雜交，雜交儀及雜交液45℃預熱，在雜交平臺上放入標記21種HPV基因型寡核苷酸探針的低密度基因芯片：將擴增產物95℃變性5 min，冰浴2 min后，加入檢測孔內進行導流雜交，具體操作按照雜交試劑盒說明書進行。(5) 結果判斷：陽性點為藍紫色圓點，其他為陰性。每張芯片上均有PCR反應質控點和雜交顯色質控點各1個以進行質控。

2 結果

2.1 HPV DNA基因分型檢測結果 2 234例患者標本中共檢出812例陽性，陽性檢出率為36.3%， 且21種基因型別均被檢測到；其中高危型別651例，占陽性標本總數的80.2%，低危型別161例，占總陽性標本總數的19.8%。

2.2 HPV DNA基因型別分布

2.2.1 高危型HPV主要基因型別陽性率：高危型別中陽性率最高的是HPV16(9.0%，200/2 234)，其他主要型別依次是52(5.7%)、58(5.1%)、53(2.7%)、18(2.5%)、66(2.1%)、68(2.0%)、31(2.0%)、33(2.0%)、39(2.0%)型。見表1，圖1。

表1 高危型HPV主要基因型別陽性率

圖1 高危型HPV主要基因型別在陽性標本中的陽性率

2.2.2 高危型HPV單一、多重感染陽性率：單一HPV高危型別感染的陽性率為21.6%(483/2 234)，多重HPV基因型別感染的陽性率為13.8%(309/2 234)，其中二重感染161例，和三重感染148例，四重感染12例，五重感染5例，還有七重感染3例。見表2。

表2 高危型HPV單一、多重感染陽性率

3 討論

宮頸癌是女性生殖系統常見的惡性腫瘤之一，是威脅女性健康甚至導致女性病死的主要疾病[1]。近年來宮頸癌的發病率和病死率逐年上升且呈現地區增長趨勢。HPV是引發宮頸癌的主要致病因子，有近20種HPV基因亞型與宮頸癌的發生密切相關[2]。在普通人群中HPV感染較為普遍，且HPV感染具有很強的地域差異，不同國家與地區HPV感染分型的流行病學分布不同[3]。

本研究對石家莊市2 234例婦科門診患者進行篩查，以了解石家莊市女性HPV的感染狀況及分布特點，為宮頸病變的防治提供依據，早期預防宮頸癌的發生。研究結果顯示，HPV21種基因型全部被檢出，石家莊市HPV總陽性率為36.3%，低于北京地區[4]的57.1%，高于呼和浩特地區[5]13.04%及西藏地區[6]9.19%，與浙江省臺州地區[7]35.08%結果相近。本研究結果顯示HPV16型是石家莊市女性最常見的HPV基因亞型，其次為HPV52、58型，與國內其他地區研究結果基本一致，而與歐美人群中分布的HPV18型位于第二位的結果存在差異[8]，由此推測中國女性人群中HPV基因型別分布與歐美女性人群相比可能存在一定的地域特性。本研究中HPV53、18型陽性率較高，僅次于HPV52、58型，與其他研究結果有所不同，這可能與選取的篩查人群為婦科門診就診患者及研究樣本數偏少有關。

本研究結果顯示HPV基因亞型單一感染率為59.5%(483/812)，多重感染率為40.5%(309/812)，與北京地區44.35%的結果相一致。在多重感染中，二重感染和三重感染占極大比例，還檢出了罕見的3例七重感染，與其他研究中多重感染以二重感染為主不同，且很少有七重感染病例的報道，表明HPV多重感染存在人群和地區差異。對于HPV感染的基因型數目與宮頸病變發生的相關性這一問題，目前爭議頗多。有學者認為HPV多重感染增加了其持續感染的危險性，而高危型HPV的持續感染是宮頸癌發生的主要危險因素，因此，多重感染可增加宮頸病變的發生[9]。也有學者認為HPV多重感染各亞型之間存在競爭關系，相對于HPV單一感染而言，對宮頸細胞的侵害小，更易清除，因此不易導致宮頸癌的發生[10]。但另有研究發現[11]，HPV單一感染和多重感染的清除率無顯著差異，對某些特殊亞型如HPV16型的感染清除率較低，易導致其持續性感染，發生宮頸病變，甚至最終導致宮頸癌。

目前，大量的研究中，尚無對石家莊地區女性人群HPV感染情況的流行病學調查。因此，本研究對石家莊市2 234例婦科門診患者進行HPV感染篩查，對于石家莊市女性宮頸癌的早期防治提供了依據。

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11 Kazunari Kondo,Asami Uenoyama,Ryo Kitagawa,et al.Genotype Distribution of Human Papillomaviruses in Japanese Women with Abnormal Cervical Cytology.Open Virol J,2012,6:277-283.

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.06.049

項目來源：石家莊市科技指導計劃項目(編號：12146803)

050011 河北省石家莊市第一醫院

劉俊霞，050011 河北省石家莊市第一醫院；

E-mail：20309337@qq.com

R 173

A

1002-7386(2014)06-0913-03

2013-10-17)