P53和Ki-67及Survivin在乳腺癌中的表達研究

郭秀芳

·論著·

P53和Ki-67及Survivin在乳腺癌中的表達研究

郭秀芳

目的探討P53、Ki-67和survivin在乳腺癌組織中的表達及相互關系。方法應用免疫組織化學(S-P)檢測35例乳腺浸潤癌、28例乳腺導管癌組織中P53、Ki-67和survivin的表達情況。結果乳腺浸潤癌組織中P53、Ki-67和survivin的表達陽性率與乳腺浸潤癌相比較，差異有統計學意義(P<0.01)。結論P53、Ki-67和survivin在乳腺癌中的表達增高，P53、Ki-67與survivin的表達無相關關系。

乳腺腫瘤；基因；P53；Ki-67；Survivin

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤。Survivin是能抑制細胞凋亡,從而延遲或阻止細胞自殺的蛋白質,屬于已知阻礙細胞自殺的蛋白質中之一[1]。Ki-67是癌細胞增殖情況的指標。P53抑癌基因是生物體內一種抑制細胞轉變癌細胞的基因。本研究探討P53、Ki-67和Survivin在乳腺癌組織中的表達及相互關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇邢臺市第一醫院病理科2008年6月至2010年3月手術切除39例乳腺癌標本，所有標本均經組織病理學確診，相關臨床資料完整，患者手術前均未經任何抗腫瘤治療，其中原位癌7例，浸潤癌32例；平均年齡(46±15)歲。另取同時期手術切除的乳腺導管癌標本24例作為對照，年齡18～73歲，平均年齡(46±15)歲。2組基線資料有均衡性。

1.2 試劑 P53、Ki-67(鼠抗人)單克隆抗體，配套S-P(羊抗鼠)超敏試劑盒，二氨基聯苯胺(DAB)顯色劑，購自北京中衫生物工程有限公司，survivin(兔抗人)多克隆抗體，配套S-P(羊抗兔)超敏試劑盒，購自北京中衫生物工程有限公司。

1.3 SP法 (1)脫蠟、水化；(2)PBS洗2～3次各5 min；(3)3%H2O2(80%甲醇)滴加在TMA上，室溫靜置10 min；(4)PBS洗2～3次各5 min；(5)抗原修復；(6)PBS洗2～3次各5 min；(7)滴加正常山羊血清封閉液,室溫20 min。甩去多余液體。(8)滴加一抗P53、Ki67、Survivin室溫靜置1 h或者4℃過夜或者37℃ 1 h。(9)4℃過夜后需在37℃復溫45 min。(10)PBS洗3次各5 min；(11)滴加二抗40～50 μl，室溫靜置，或37℃1 h；(12)Ⅱ抗中可加入0.05%的tween-20。(13)PBS洗3次各5 min；(14)DAB顯色5～10 min，在顯微鏡下掌握染色程度；(15)PBS或自來水沖洗10 min；(16)蘇木精復染2 min，鹽酸乙醇分化；(17)自來水沖洗10～15 min；(18)脫水、透明、封片、鏡檢。以已知陽性的乳腺痛切片作為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。

1.4 結果判定 免疫組化染色結果的判定采用雙肓法，由兩位病理醫師分別獨立閱片，觀察10個有代表性的高倍鏡視野(×40)計數1 000個細胞，對免疫組化結果進行評怙，兩者結果取均值作為最終結果。Ki-67定位表達于細胞核，survivin定位表達于細胞漿，P53在細胞漿和胞桉內均有表達，以細胞漿和(或)細胞核內出現清晰的棕黃色為陽性細胞。P53、survivin陽性細胞比例=(陽性細胞數/細胞總數1 000)×100%。Ki-67增殖指數=(陽性細胞數/細胞總數1 000)×100%。按照survivin P53陽性細胞比例和Ki-67增殖指數對組化結果分為4個等級：≤10%為“-”，11%～25%為“+”，26%～50%為“++”， ≥51%為“+++”[1，2]。

1.5 統計學分析 應用SPSS 13.0統計軟件，計數資料比較采用χ2檢驗；相關性分析運行Spearmam相關性檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3種因子陽性表達 在39例乳腺癌組織中，survivin表達陽性為26例，陽性率為66.6%；Ki-67表達陽性為23例，陽性率為58.9%；P53表達陽性為32例，陽性率為82.0%。在24例乳腺導管癌組織中，survivin表達陽性為7例，陽性率為25%；P53表達陽性為4例，陽性率為14.29%；Ki-67表達陽性為3例，陽性率為7.14%。見圖1～3。

圖1 survivin陽性(免疫組化×40)

圖2 Ki?67陽性(免疫組化×40)

圖3 P53陽性(免疫組化×40)

2.2 Wilcoxon秩和檢驗 survivin(u=4.52032)、P53(u=5.64412)、Ki-67(u=4.68051)在乳腺浸潤癌組織中的表達與乳腺導管癌組織比較差異有統計學意義(P<0.01)。見表1。

表1 P53和Ki-67及survivin在乳腺浸潤癌與乳腺導管癌組織中的表達 例

3 討論

P53抑癌基因是生物體內一種抑制細胞轉變癌細胞的基因。細胞中本來就有致癌基因(oncogene)及抑癌基因的存在，只要一方產生病變而失去平衡，癌癥就可能會發生[2]。

人類P53基因定位于17號染色體P13，全長16～20 kb,含有11個外顯子，轉錄2.8kb的mRNA,編碼蛋白質為P53，是一種核內磷酸化蛋白。P53是迄今為止發現的與人類腫瘤相關性最高的基因[3]，過去一直把它當成一種癌基因，直至1989年才知道起癌基因作用的是突變的P53，后來證實野生型的P53是一種抑癌基因。P53基因表達產物P53蛋白由393個氨基酸殘基構成，在體內以四聚體的形式存在，半衰期為20～30 min[4，5]。

Ki-67是一種DNA結合蛋白，Ki-67陽性細胞率與生存時間呈顯著負相關(r=-0.587，P<0.01)[6]。Ki-67分裂活躍的細胞占腫瘤細胞的比例，這個是低增殖，預后好[6]。Ki-67與乳腺癌尤其是淋巴結轉移陰性患者的預后相關，有助于確定是否采用輔助性化學治療。

Survivin是凋亡抑制蛋白家族(IAP)的重要成員，是凋亡抑制蛋白家族的新成員，Survivin具有腫瘤特異性，只表達于腫瘤和胚胎組織，且與腫瘤細胞的分化增殖及浸潤轉移密切相關[7]。Survivin 可能主要通過兩條途徑來抑制細胞凋亡：(1)直接抑制凋亡終末效應酶Caspase-3 和Caspase-7的活性來阻斷各種刺激誘導的細胞凋亡過程;(2)Survivin 與周期蛋白激酶CDK4,CDK2相互作用阻斷凋亡信號轉導通路[8]。

在本研究中，P53、Ki-67和survivin在乳腺癌中的表達顯著增高(P<0.05)，這與相關研究，以及三者在其他惡性腫瘤中的表達情況[9,10]相一致。P53、Ki-67和survivin在乳腺癌中的表達明顯增高的生物學特點，可以聯合應用于相應疾病的鑒別診斷。同時，在作為腫瘤基因治療的靶點方面，也值得進一步研究。

1 范宇飛，朱嚴冰，孟繼昌，等.survivin、P53蛋白與細胞周期蛋白Dl在乳腺癌巾的表達及相關.臨床誤診誤治，2010,12:101-103.

2 趙延龍，陳江，姜漢國.survivin、P53基固在甲狀腺乳頭狀癌組織中表達的研究.哈爾濱醫科大學學報,2006,40:23-26.

3 鄧百凱，陳健，部紅梅.Smac和Ki-67在甲狀腺癌中的表達和意義.腫瘤防治研究,2008,35:800-802.

4 陳利民，鄭建華，王烯冬.P53 Survivin的研究進展.疾病監測與控制雜志,2009，4:243-245.

5 曾永群，陳秋月，李凡彩.CA-125抗原腫瘤抑制蛋白P53,Ki-67抗原及抑癌基因P27蛋白作為卵巢癌病理輔助診斷指標的評價.中國全科醫學,2010,13:1877-1879.

6 Dowsett M,Smith IE,Ebbs SR,et al.Prolifealion and apoptosis as markers of benefit in neoodjuvant endocrine therapy of breast Cancer.Clin Cancer Kes,2006，12：1024-1030.

7 王運端，張海娟，劉風軍.survivin和環氧合酶-2在卵巢腫瘤中的表達及意義.河北醫藥，2009,31:2746-2748.

8 李秀娟，廖琪，孫中華，等.Ki67和survivin在卵巢上皮性癌中的表達及意義.中國全科醫學,2009,12:1534-1535.

9 Chantalat L,Skonfias DA,Kleman JP,et al.Crystal strncture of human surviving reveals a bow tie-shaped dimmer with two unusnal alpha-heli-cal extensions.Mol Cell，2000,6:183-189.

10 王立芝，薛龍，譚冬梅，等.survivin的研究進展.醫學綜述，2006，12:1089-1092.

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.22.024

054001 河北省邢臺市第一醫院病理科

R 737.9

A

1002-7386(2014)22-3425-02

2014-04-29)