STAT3和JNK在食管鱗狀細胞癌中的表達及與臨床病理特征的關(guān)系

劉惠民 張洪亮 郭梅艷 瞿峰 時志民 王蕾 王秀清

·論著·

STAT3和JNK在食管鱗狀細胞癌中的表達及與臨床病理特征的關(guān)系

劉惠民 張洪亮 郭梅艷 瞿峰 時志民 王蕾 王秀清

目的探討食管鱗癌組織中Stat3和Jnk的表達及其與臨床病理特征的關(guān)系。方法采用免疫組織化學檢測食管正常鱗狀上皮 (30例)、食管鱗狀細胞癌(70例)中Stat3和Jnk的表達情況，分析其與食管鱗癌臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果Stat3在食管正常鱗狀上皮和食管鱗狀細胞癌中的陽性表達率分別為3.3%和72.9%， 而Jnk的陽性表達率分別為0和55.7%。Stat3和Jnk在食管鱗狀細胞癌中的陽性表達率均明顯高于食管正常鱗狀上皮(P<0.05)。食管鱗狀細胞癌中Stat3、Jnk的表達與腫瘤浸潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的情況之間差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，但是兩者與患者的性別、年齡及腫瘤的病理分級均無相關(guān)性(P>0.05)。結(jié)論隨著食管癌的出現(xiàn)，Stat3和Jnk的表達增加，提示兩者與食管鱗狀細胞癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，并且有助于判斷腫瘤的侵襲和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況。

信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄活化因子3；c-Jun氨基末端激酶；食管腫瘤；腫瘤，鱗狀細胞免疫組織化學

STAT3作為STAT(signal transducers and activators of transcription)家族的重要成員之一，也是重要的信號級聯(lián)成分，其通路的不斷激活可引起細胞異常增殖，與腫瘤的發(fā)生有密切關(guān)系[1，2]。作為MAPK激酶超家族成員，JNK在細胞周期調(diào)節(jié)、細胞增殖和轉(zhuǎn)化生長中具有重要作用，與腫瘤及多種疾病發(fā)生機制有關(guān)[3，4]。目前，有關(guān)Stat3和Jnk表達在食管鱗癌組織中的表達與臨床病理特征的關(guān)系很少有相關(guān)報道。為探討Stat3和Jnk在食管鱗狀細胞癌中的表達變化及其與臨床病理特征間的關(guān)系，本研究在既往研究的基礎(chǔ)上應(yīng)用免疫組織化學方法，檢測了Stat3和Jnk在食管癌鱗癌中的表達情況。

1 資料與方法

1.1 一般資料 實驗材料為2010年至2013年河北工程大學病理科存檔的蠟塊，按病史及病理資料選取食管鱗狀細胞癌病例70例，其中男49例，女21例；年齡43～77歲，中位年齡63.3歲。按照WHO標準[5]由高年資病理醫(yī)師對全部食管癌病例的HE切片進行復(fù)診。同時，選取上述食管癌切除患者的食管上、下殘端黏膜30例作為對照研究。

1.2 方法與試劑 采用免疫組織化學染色的SP法對全部食管癌病例及正常食管黏膜進行實驗，嚴格按照實驗說明書進行實驗操作：將4 μm厚的切片常規(guī)脫蠟入水，3%雙氧水孵育，枸櫞酸緩沖液高溫修復(fù)，滴加一抗(稀釋度均為1∶80)，4℃冰箱過夜，滴加二抗，DAB顯色，封片。以乳腺癌組織切片作為陽性對照，以磷酸緩沖鹽溶液(phosphate-buffered saline,PBS)代替第一抗體作為陰性對照。實驗所用試劑為兔抗人Stat3多克隆抗體、鼠抗人Jnk單克隆抗體及相應(yīng)二抗試劑盒，均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 結(jié)果判定 Stat3 及Jnk蛋白的陽性表達均位于細胞質(zhì)，染色結(jié)果判定分別參照劉惠民等[6，7]的方法并稍加改進，依據(jù)腫瘤細胞的染色強度及陽性細胞百分比綜合評分。染色強度以多數(shù)陽性細胞呈現(xiàn)的染色計分，無色計0分，淡黃色計1分，棕黃色計2分，棕褐色計3分；同時隨機選取10個高倍鏡視野計數(shù)陽性細胞百分比的平均數(shù)，無陽性細胞計0分，≤25%計1分，26%～50%計2分，51%～75%計3分，﹥75%計4分；將兩者的計分相加，0～2分為陰性(-)，≥3分為陽性(+)。

1.4 統(tǒng)計學分析 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗及Fisher確切概率法，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 免疫組化結(jié)果 Stat3蛋白陽性反應(yīng)定位于細胞質(zhì)，呈棕黃色，彌漫性或散在分布。Stat3蛋白在正常食管黏膜和食管癌組織中的陽性表達率分別為3.3%和72.9%。食管癌組織中的陽性表達率明顯高于食管正常鱗狀上皮(P<0.05)。Jnk蛋白陽性反應(yīng)主要定位于細胞漿，呈棕黃色，彌漫性或散在分布。Jnk蛋白在正常食管黏膜和食管癌組織中的陽性表達率分別為分別為0和55.7%。食管癌組織中的Jnk陽性表達率明顯高于食管正常鱗狀上皮(P<0.05)。見表1。

表1 2組Stat3和Jnk的表達比較 例(%)

注：與食管正常鱗狀上皮比較，*P<0.05

2.2 Stat3和Jnk蛋白的表達與臨床病理特征的關(guān)系 食管鱗狀細胞癌中Stat3、Jnk的表達與腫瘤浸潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的情況之間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05，表2)，但是與患者的性別、年齡及腫瘤的病理分級間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 Stat3和Jnk的表達與臨床病理特征之間的關(guān)系 例(%)

3 討論

隨著對腫瘤病因?qū)W的研究，信號傳導(dǎo)途徑在腫瘤細胞中抗凋亡和促進分化增殖作用越來越受到重視。Stat3作為重要的信號傳導(dǎo)級聯(lián)成分，接受細胞外信號刺激，作用于細胞核內(nèi)特異性的DNA片段，參與細胞的生長、分化等多種過程，并在細胞惡性轉(zhuǎn)化過程中起重要作用。目前研究發(fā)現(xiàn)，Stat3在甲狀腺癌[8]、胃癌[9]、乳腺癌[10]等多種腫瘤組織中表達異常，提示Stat3過度表達與腫瘤發(fā)生發(fā)展有關(guān)。也有研究發(fā)現(xiàn)STAT3在食管癌組織中的表達異常[11,12]，提示STAT3過度表達與食管癌的演變過程有關(guān)。本研究顯示，隨著食管癌的出現(xiàn)，Stat3蛋白的陽性表達率明顯高于食管正常鱗狀上皮(P<0.05)，說明正常細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中 Stat3 的激活快速而短暫，而在食管癌組織中Stat3被不斷激活，且激活水平很高，并維持這種高水平表達狀態(tài)，由于Stat3活性發(fā)生了變化，從而促進了細胞的不斷增殖及惡性轉(zhuǎn)化，提示Stat3的過度激活破壞了正常細胞的增殖，可能參與了食管癌的發(fā)生發(fā)展。同時，研究發(fā)現(xiàn)Stat3的表達與腫瘤浸潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示Stat3的表達變化與食管癌的局部進展有關(guān)，也可能是一個影響食管癌淋巴結(jié)發(fā)生轉(zhuǎn)移的重要因素。

Jnk是MAPK(絲裂霉素活化的蛋白激酶)信號傳導(dǎo)通路的重要部分，研究顯示，Jnk(c-Jun的N末端激酶) 信號途徑在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用受到醫(yī)學界的廣泛關(guān)注，其參與細胞增殖與分化，與多種腫瘤的發(fā)生有關(guān)，在宮頸癌[13]、乳腺癌[14]等多種腫瘤組織中表達異常，本研究在蛋白水平檢測了食管癌中Jnk的表達變化情況，發(fā)現(xiàn)隨著食管癌的出現(xiàn)，Jnk蛋白的陽性表達率明顯高于食管正常鱗狀上皮，提示Jnk 表達上調(diào)可能與腫瘤細胞增殖有關(guān)，Jnk信號途徑可能參與了食管鱗狀細胞癌的發(fā)生。研究結(jié)果還顯示，Jnk的表達與腫瘤浸潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示Jnk蛋白過表達可能與食管癌的侵襲深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)。因此，Jnk有可能成為判斷食管癌預(yù)后的一個重要臨床參考指標，在一定程度上可以判斷其預(yù)后。

本研究從蛋白水平檢測了Stat3和Jnk在食管癌組織中的表達，初步探討了兩者在食管癌中的表達變化及其與臨床相關(guān)病理參數(shù)間的關(guān)系，提示Stat3和Jnk的異常表達在食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展可能起著重要的作用，但是兩者在食管鱗癌發(fā)生過程中的關(guān)系還有待進一步研究。

1 Ma XT,Wang S,Ye YJ,et al.Constitutive activation of Stat3 signaling pathway in human colorectal carcinoma.World J Gastroenterol,2004,10:1569-1573.

2 高安定，林寶順，蘭小鵬.STAT3與腫瘤.中國生物化學與分子生物學報，2013，29：397-403.

3 劉啟，趙志英.ERK和JNK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與疾病關(guān)系的研究進展.醫(yī)學綜述，2011，17：1637-1639.

4 孟津，趙敏，金海紅，等.磷酸化STAT3和Bcl-2在子宮內(nèi)膜異位癥的表達及相互關(guān)系.河北醫(yī)藥，2012，34：1933-1935.

5 朱雄增.胃腸道癌前病變和癌的WHO診斷標準.中華病理學雜志， 2003，32：168-169.

6 劉惠民，吳文新，張祥宏，等.Stat3和p38在散發(fā)性大腸管狀腺瘤癌變過程中的表達及意義.中華腫瘤雜志，2007，29：168-169.

7 丁濤，張祥宏，李學民，等.p-JNK JNK和PPARγ在食管癌變過程中的表達及其意義.中華腫瘤雜志，2008，30：1348-1352.

8 汪永旭，蔣偉豐，朱陳宏.Stat3和VEGF-C在甲狀腺癌中表達及其與臨床病理特征間的關(guān)系.腫瘤學雜志，2013，19：118-121.

9 叢麗，陶林，趙瑾，等.胃癌組織中Stat3的活化及P53、C-erb-B2表達.中國實驗診斷學，2013，17：896-899.

10 陳玉娟，汪靜，王曉東，等.Stat3在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌表達水平與臨床病理特征相關(guān)研究.中國腫瘤臨床，2013，40：583-591.

11 李素梅，鐘雪云，林琛蒞，等.Stat3、CyclinD1及Bcl - 2在食管鱗癌組織芯片中的表達及意義.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學，2009，17：681-684.

12 高遠，軒小燕，張紅燕，等.STAT3信號蛋白與食管鱗癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的關(guān)系及其意義.世界華人消化雜志，2010，18：447-452.

13 馮姝，瞿全新.宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變及宮頸癌組織中JNK、STAT3的表達變化及意義.山東醫(yī)藥，2013，53：34-36.

14 吳向華，陸云飛，黃名威.ERK及JNK/MAPK通路在復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移乳腺癌的表達及臨床意義.廣東醫(yī)學，2010，31：1841-1843.

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.22.038

056002 河北省邯鄲市，河北工程大學醫(yī)學院病理教研室(劉惠民、時志民、王蕾)；河北工程大學附屬醫(yī)院(張洪亮、郭梅艷、瞿峰、王秀清)

R 735.1

A

1002-7386(2014)22-3454-02

2014-04-10)