復方紅黃洗劑質量標準研究*

★ 黃曉巧 李養學 胥愛麗 李素梅

(1.廣東省第二中醫院 廣東 廣州 510095；2.廣東省中醫研究所 廣東 廣州 510095)

復方紅黃洗劑由白芷、黃柏、干姜、側柏葉等中藥組成，具有清熱解毒、燥濕止癢、活血化瘀、益發生發之功效，主要用于斑禿、脂溢性脫發、頭皮發癢、頭屑多等癥。為了更好地控制產品質量，保證臨床療效，對復方紅黃洗劑中的白芷、黃柏、干姜、側柏葉4味藥材進行了定性鑒別，并采用高效液相色譜法對本品中白芷的有效成分歐前胡素進行了含量測定，為該制劑建立完善的質量標準提供了依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器 CAMAG TLC SAMPLER 4型自動點樣儀；CAMAG TLC Visualizer型薄層成像系統；Waters 2695-2998高效液相色譜儀(PAD二級管陣列檢測器)；Kromasil C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)；Mettler Toledo XS205DU電子天平；DHG-9070A電熱鼓風干燥箱；SPX-150C型溫恒濕培養箱；KQ5200DE型數控超聲波清洗器。

1.2 材料 復方紅黃洗劑(批號：20130401、20130402、20130403)由廣東省第二中醫院制劑室提供。歐前胡素對照品(批號：110826-201013)、白芷對照藥材(批號：120945-200707)、黃柏對照藥材(批號：121510-200703)、干姜對照藥材(批號：120942-200606)、側伯葉對照藥材(批號：121396-200401)均購于中國食品藥品檢定研究院。乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，試驗用水為純化水。

2 方法與結果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 白芷的鑒別[1]取本品5mL，置蒸發皿中，加硅藻土適量吸附，蒸干，轉移至錐形瓶中，加乙醚10mL，浸泡1h，時時振搖，濾過，濾液揮干，殘渣加乙酸乙酯1mL使溶解，作為供試品溶液。另取白芷對照藥材1g，加乙醚10mL，同法制成白芷對照藥材溶液。再取歐前胡素對照品、異歐前胡素對照品，加乙酸乙酯制成每1mL各含1mg的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB)試驗，吸取上述3種溶液各4μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60℃)-乙醚(3∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。

2.1.2 黃柏的鑒別[1]取本品2mL，置蒸發皿中，加硅藻土適量吸附，蒸干，轉移至錐形瓶中，加1%醋酸甲醇溶液40mL，60℃超聲處理20min，濾過，濾液濃縮至2mL，作為供試品溶液。另取黃柏對照藥材0.5g，加1%醋酸甲醇溶液40mL，同法制成黃柏對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB)試驗，吸取上述2種溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)為展開劑[2,3]，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

2.1.3 干姜的鑒別[2]取本品20mL，用正丁醇振搖提取2次，每次20mL，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇2mL使溶解，作為供試品溶液。另取干姜對照藥材1g，加水100mL，煮沸1h，冷卻，濾過，濾液用正丁醇振搖提取2次，每次20mL，同法制成干姜對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB)試驗，吸取上述三種溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(2∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以香草醛硫酸試液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，置日光下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾。

2.1.4 側柏葉的鑒別[3]取本品12mL，置蒸發皿中，水浴蒸干，加硅藻土適量吸附，轉移至錐形瓶中，加水25mL，再加鹽酸3mL，水浴加熱水解30min，立即冷卻，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，用水洗滌3次，每次10mL，棄去水液，乙酸乙酯液蒸干，殘渣加甲醇5mL使溶解，作為供試品溶液。另取側柏葉對照藥材1g，加水25mL，再加鹽酸3mL，同法制成側柏葉對照藥材溶液。再取槲皮素對照品，加乙醇制成每1mL含0.1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB)試驗，吸取上述3種溶液各3μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶2∶1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品和對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。

2.2 含量測定[1]

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取歐前胡素對照品12.30mg，置于50mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，精密吸取10mL，置于100mL容量瓶中，加甲醇至刻度，即制得每1mL含歐前胡素24.5016μg的對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品4mL，置蒸發皿中，加硅藻土適量吸附，蒸干，轉移至50mL量瓶中，加甲醇45mL，超聲處理(功率300W，頻率50kHz)1h，取出，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 取缺白芷的陰性樣品4mL，按3.2項下供試品溶液制備方法制成白芷陰性對照溶液。

2.2.4 色譜條件與系統適應性條件 色譜柱：Kromasil-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動相：乙腈-水(48∶52)[5]；檢測波長為254nm；流速：1.0mL/min；柱溫：25℃。在上述色譜條件下，歐前胡素與其他成分能較好分離，陰性對照溶液在歐前胡素對照品相同保留時間位置上未見色譜峰，說明陰性對照無干擾，見圖1～3。

圖1 歐前胡素對照品HPLC圖譜

圖2 供試品HPLC圖譜

圖3 陰性對照HPLC圖譜

2.2.5 線性范圍的考察 精密量取“2.2.1”項下配制好的對照品溶液1，2，3，4，5mL，分別置于5mL量瓶中，加入甲醇溶解并稀釋至刻度，得歐前胡素的濃度分別為4.90032，9.80064，14.70096，19.60128，24.50160μg的對照品溶液。精密吸取上述溶液各10μL，按“2.2.4”項下色譜條件進行測定，測定峰面積，并以峰面積(Y)對歐前胡素含量(X)進行回歸，得標準曲線：Y=4239.8X-9114.5(r=0.9999)。表明歐前胡素在49.0032ng～245.0160ng范圍內呈良好的線性關系。

2.2.6 精密度試驗 精密吸取對照品溶液10μL連續重復進樣6次，測得峰面積積分值RSD<2%，表明儀器精密度良好。

2.2.7 穩定性試驗 取同一供試品(批號：20130401)溶液，分別于0，2，4，8，12h進樣10μL，測得樣品中歐前胡素峰面積值的RSD<2%，表明供試品溶液12h內穩定性良好。

2.2.8 重復性試驗 取同一批樣品(批號：20130401)按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液6份，按擬定的含量測定方法，分別精密吸取10μL進樣，測得峰面積積分值并計算含量，得歐前胡素含量RSD<2%，表明本方法重現性較好。

2.2.9 加樣回收率試驗 取已知含量的樣品溶液(批號20130401)9份，每份精密量取2mL，分別精密加入一定量的歐前胡素對照品，按供試品制備與測定方法，計算平均回收率為99.30%，RSD為1.42%(n=9)，表明本含量測定方法準確度高，方法可靠，結果見表1。

表1 歐前胡素加樣回收率測定結果(n=9)

2.2.10 樣品測定 取不同批次樣品，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.2.4”項下色譜條件進行含量測定，結果見表2。

表2 樣品含量測定結果(n=2)

3 討論

3.1 采用現行版《中國藥典》一部白芷、黃柏項下的薄層鑒別方法分別對方中白芷、黃柏進行鑒別，結果色譜斑點清晰，能檢出其特征斑點，且陰性無干擾。

3.2 在進行干姜的薄層鑒別研究時，曾采用現行版《中國藥典》一部干姜項下薄層鑒別方法進行鑒別，結果色譜斑點不清晰，分離效果欠佳，經不斷摸索試驗，改用正丁醇提取，并以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(2∶1)作為展開劑，結果色譜斑點清晰，分離較好，可用于本制劑中干姜的質量控制。

3.3 對方中側柏葉的薄層色譜鑒別研究，也曾采用現行版《中國藥典》一部側柏葉項下薄層鑒別方法進行鑒別，結果分離效果不佳，在參考文獻的基礎上，用鹽酸水解后再進行提取，結果斑點清晰，分離度好。

3.4 方中白芷所含歐前胡素的含量測定方法，參考了《中國藥典》白芷項下的含量測定方法，其流動相為甲醇-水(55∶45)，但因本制劑成分較復雜，用此流動相時，所測成分未能與雜質很好的分離，經過條件摸索，將甲醇改為乙腈，并將比例調整為48∶52，分離效果顯著提高，歐前胡素色譜峰能達到基線分離，且空白對照無干擾，重現性良好。該方法簡單易行，結果準確可靠，可作為復方紅黃洗劑中歐前胡素的含量測定方法。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典·一部[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010.

[2]肖林林.活血解痛膏的薄層色譜鑒別研究[J].中國現代藥物研究，2012,6(22):129-130.

[3]王淑英,吳啟端,林雙峰,等.舒金克喘膠囊中桑白皮、川貝母、厚樸、側柏葉的薄層色譜鑒別[J].中成藥，2006，28(4):601-602.