慢性阻塞性肺疾病急性加重患者呼吸道病毒及非典型病原體的檢測分析

童春堂 尤蘭華 郭沛艷 李雪輝 陳杭薇

慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是一種常見的危害人類健康的慢性呼吸系統疾病，嚴重影響患者的生活質量，隨著人口老齡化及環境污染的加重，其患病率呈逐年增高[1]。COPD患者每次病情的急性加重嚴重都會損害肺功能，加速病情進展，因而減少COPD急性加重成為延緩該病病情進展、改善生活質量的重要措施。既往研究發現大約50%的AECOPD和細菌感染有關，而AECOPD與呼吸道病毒及非典型病原體感染的關系報道較少[2]。本研究應間接免疫熒光法(immunofluorescence assay,IFA)快速定性檢測AECOPD患者血清中九種呼吸道病原體IgM抗體，旨在了解其在AECOPD患者中的感染情況，現報道如下。

對象與方法

一、檢測對象

2012年6月1日至2013年9月1日收住北京軍區總醫院呼吸內科的211例AECOPD患者，診斷標準符合2011年修訂版GOLD指南[2]，排除近期接種流感疫苗患者。其中男性128例，女性83例，年齡46～98(77.4±9.4)歲，臨床癥狀包括咳嗽、咳黃痰、喘憋加重等,其中發熱患者18例 (體溫>37.5 ℃)，記錄其入院季節、年患病次數等。

二、檢測試劑

九項呼吸道感染病原體IgM抗體檢測試劑盒(國食藥監械(進)字2010第3400365號)為西班牙VIRCELL公司原裝進口產品。采用間接免疫熒光法(IFA)技術，可同時檢測流感病毒A/B(influenza virus A/B,FluA/B)、副流感病毒(parainfluenza virus,PIV)1/2/3型、呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)、腺病毒(adenovirus,ADV)、嗜肺軍團菌(Legionellapneumophila,LP)血清1型、肺炎支原體(mycoplasma pneumoniae,MP)、Q熱立克次體(Q fever rickettsia,QFR)、肺炎衣原體(chlamydia pneumonia,CP)九種IgM抗體。

三、檢測方法

1. 標本收集與處理：①患者入院24 h內，靜脈穿刺采集血液2～3 ml，以離心半徑8 cm，2000 r/min離心5 min后取血清待測，按照1︰1比例稀釋血清樣本；②向稀釋后的血清加入吸附劑以避免干擾IgM檢測，處理后的血清以離心半徑8 cm，3000 r/min離心10～15 min，在載玻片的每孔中加入15 μl吸附劑處理過的血清，放入濕盒于37 ℃下溫育90 min；③用磷酸鹽緩沖液緩慢沖洗載玻片后放置水平搖床搖動10 min，再用蒸餾水緩慢水流沖洗；④將載玻片自然晾干，每孔加入15 μl熒光素標記的抗人IgM磷酸緩沖液后放入濕盒37 ℃溫育30 min，晾干后加封閉介質，加蓋玻片，即刻熒光顯微鏡下觀察結果，如不能立即觀察，可避光放置于2～8 ℃不超過24 h。

2. 結果判斷：陽性：Flu、PIV、ADV、RSV對陽性血清的細胞核、胞漿或胞膜出現蘋果綠色熒光(在PIV和RSV中可能同時觀察到著色的合胞)；LP、CP或QFR中所有的細菌呈現蘋果綠色熒光；MP對陽性血清在細胞外圍呈現蘋果綠色熒光。陰性：LP、CP和QFR無熒光，MP、Flu、ADV、PIV和RSV的細胞呈紅色。

四、統計學方法

應用SPSS19.0軟件對數據進行統計學處理，率的比較運用χ2檢驗。

結 果

一、不同季節組AECOPD患者IgM抗體檢測結果

AECOPD患者中不同季節IgM抗體總陽性率比較，χ2=15.6，bP=0.001，其中春季IgM抗體總陽性率為57.5%(46/80)，通過不同季節間的兩兩比較，顯著高于夏季和秋季的30%(12/40)、22.9%(8/35)，差異均有統計學意義；春季FluA IgM抗體陽性率為27.5%(22/80)，Fisher確切概率法計算aP=0.02，通過不同季節間的兩兩比較，顯著高于夏季的5%(2/40)，差異有統計學意義。其它病原體不同季節間IgM抗體陽性檢出結果差異無統計學意義。見表1。

二、不同年齡組AECOPD患者IgM抗體檢測結果

不同年齡AECOPD患者IgM抗體陽性率比較，P>0.05，差異無統計學意義，見表2。

表1 不同季節組AECOPD患者IgM抗體檢測結果

表2 不同年齡組AECOPD患者IgM抗體檢測結果

表3 不同患病次數AECOPD患者IgM抗體檢測結果

三、不同年患病次數AECOPD患者IgM抗體檢測結果

AECOPD患者年患病次數≥2次與≤1次的IgM抗體總陽性率分別為46.2%(73/158)、35.8%(19/53)，P>0.05，差異無統計學意義，見表3。

四、呼吸道病原體IgM抗體混合陽性檢出情況

混合陽性率5.2%(11/211)，其中Flu合并其他病原體陽性者分別為7例，見表4。

表4 呼吸道病原體抗體混合陽性檢出情況

討 論

COPD是一種常見的慢性呼吸系統疾病，在全球各個地區均有較高的患病率，以持續存在氣流受限為特征，并呈進行性發展[3]。反復的急性加重是導致患者肺功能嚴重受損及死亡的主要原因，位居世界死亡原因的第4位，給社會及家庭帶來沉重的經濟負擔，大多COPD 患者每年會出現2～5次的急性加重[4]。因此，做好AECOPD的預防和診治，對于減少急性加重、延緩肺功能下降、提高患者生活質量乃至節約有限的醫療資源均有重大意義。

研究表明細菌感染是AECOPD最主要的原因[5-6]，但近年來隨著呼吸道病毒及非典型病原體(主要指肺炎支原體、嗜肺軍團菌、肺炎衣原體)檢測方法的改進和研究的深入，發現呼吸道病毒及非典型病原體感染與AECOPD密切相關[7-8]，其中約14%～40% 的AECOPD與病毒感染相關[9-10]，AECOPD患者入院后盡快明確致病病原體，對于選擇恰當的抗感染藥物具有指導意義。本研究中采用的檢測試劑盒基于IFA技術，可對血清中反映新近發生感染的九種呼吸道病原體IgM抗體行定性檢測，結果發現陽性率較高，并存在一定比例的混合感染，以Flu合并其它病原體最為多見，符合我們先前報道的混合感染是其特點的狀況[11]。

一些COPD患者因高齡、患有多種并發疾病，或長期吸入糖皮質激素，機體免疫力差，在流行季節較容易感染各種病原體導致病情急性加重，由于目前尚無有效的抗病毒藥物，接種流感病毒疫苗成為預防AECOPD的重要手段[12]。本研究中AECOPD患者春季IgM抗體總陽性率顯著高于夏季和秋季，其中以FluA IgM抗體陽性率顯著高于夏季為特點，提示COPD患者在穩定期應做好疫苗接種。另外，應該關注呼吸道病毒及非典型病原體感染與AECOPD年加重次數的關系，本研究中按年患病次數將AECOPD患者分為兩組，年患病次數≥2次組的IgM抗體陽性率高于≤1次組，但差異無統計學意義。

呼吸道病毒及非典型病原體尤其是流感病毒感染與AECOPD關系密切，嚴重影響患者的臨床療效及生活質量，混合感染不容忽視，同時提醒COPD患者在呼吸道病毒及非典型病原體流行的季節應做好預防工作。

參 考 文 獻

1 文富強. 重視慢性阻塞性肺疾病的合并癥[J/CD]. 中華肺部疾病雜志: 電子版,2013,6(2)：99-102.

2 Sethi S. Bacterial infection and the pathogenesis of COPD[J]. Chest,2000,117(5 Suppl 1): 286S-291S.

3 柳 濤,蔡柏薔. 慢性阻塞性肺疾病診斷、處理和預防全球策略(2011年修訂版)介紹[J]. 中國呼吸與危重監護雜志,2012,11(1): 1-12.

4 吳 清. 慢性阻塞性肺疾病急性加重期病原菌感染及耐藥研究[J]. 中華醫院感染學雜志,2012,22(23): 5234-5235.

5 徐 平,宋衛東,劉媛媛,等. 慢性阻塞性肺疾病急性細菌性加重患者病原菌分析[J]. 中國感染與化療雜志,2010,10(2): 108-111.

6 石寶平,錢葉長,王麗華,等. 慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者病原體檢測分析[J]. 山東醫藥,2010,50(15): 18-20.

7 Ko FW,Ip M,Chan PK,et al. Viral etiology of acute exacerbations of COPD in Hong Kong[J]. Chest,2007,132(3): 900-908.

8 徐 健,王慧玲. 肺炎支原體、衣原體IgM抗體在慢性阻塞性肺疾病急性加重期的檢出率研究[J]. 大連醫科大學學報,2009,31(2): 207-209.

9 李 兵,李雪輝,陳杭薇. 慢性阻塞性肺疾病急性發作患者流感病毒檢測結果[J]. 中國臨床保健雜志,2012,15(3): 253-254.

10 Seemungal T,Harper-Owen R,Bhowmik A,et al. Respiratory viruses,

symptoms,and inflammatory markers in acute exacerbations and stable chronic obstructive pulmonary disease[J]. Am J Respir Crit Care Med,2001,164(9): 1618-1623.

11 童春堂,陳杭薇,尤蘭華,等. 成人呼吸道病毒及非典型病原體快速檢測的臨床研究[J]. 中華肺部疾病雜志: 電子版,2013,6(4): 307-311.

12 Sumitani M,Tochino Y,Kamimori T,et al. Additive inoculation of influenza vaccine and 23-valent pneumococcal polysaccharide vaccine to prevent lower respiratory tract infections in chronic respiratory disease patients[J]. Internal medicine (Tokyo,Japan),2008,47(13): 1189-1197.