PTEN、Survivin蛋白在子宮內膜異位癥相關的卵巢癌組織中表達的相關性及臨床意義

蔣 蘋 許 紅 王中彌 于 璐 孫 潔 曹良杰 周亞麗 栗 瓊

PTEN、Survivin蛋白在子宮內膜異位癥相關的卵巢癌組織中表達的相關性及臨床意義

蔣 蘋 許 紅 王中彌 于 璐 孫 潔 曹良杰 周亞麗 栗 瓊

目的 探討卵巢子宮內膜異位囊腫、子宮內膜異位癥相關的卵巢癌(卵巢子宮內膜樣癌和卵巢透明細胞癌)中抑癌基因PTEN蛋白和凋亡抑制基因Survivin蛋白表達及意義。方法 利用免疫組織化學二步抗法檢測卵巢子宮內膜異位囊腫20例、子宮內膜異位癥相關的卵巢癌17例, 正常子宮內膜20例中PTEN蛋白、Survivin蛋白的表達。結果 PTEN蛋白在正常子宮內膜的陽性表達低于子宮內膜異位癥相關的卵巢癌、卵巢子宮內膜異位囊腫, 差異具有統計學意義(P＜0.05)。Survivin蛋白的趨勢與PTEN相反, 差異具有統計學意義(P＜0.05)。PTEN、Survivin蛋白表達與分期、分化程度, 差異無統計學意義(P>0.05)。PTEN、Survivin蛋白表達無明顯相關性(r=0.143, P＞0.05)。結論 卵巢子宮內膜異位囊腫發生惡變的過程中可能與PTEN、Survivin蛋白表達異常有關, 可能PTEN蛋白表達異常更有意義。

PTEN; Survivin；子宮內膜異位癥; 卵巢腫瘤; 基因表達

子宮內膜異位癥(endometriosis, EMs) 最常異位于卵巢,是育齡期婦女的常見良性病, 但具有類似惡性腫瘤的行為,并可發生惡變。卵巢子宮內膜異位癥惡變的主要細胞學類型為子宮內膜樣癌和透明細胞癌, 稱為子宮內膜異位癥相關的卵巢癌(endometriosis associated ovarian cancers, EAOCs)。

目前認為細胞的異常凋亡和腫瘤的發生關系密切。第10號染色體同源丟失性磷酸酶張力蛋白基因(phosphatase and tension homology deleted on chromosome ten, PTEN)是1997年由Li等［1］研究命名, PTEN基因具有誘導腫瘤細胞凋亡功能。目前研究認為人類多種惡性腫瘤中存在PTEN基因缺失或突變［1,2］。凋亡調節基因被認為是繼原癌基因、抑癌基因之后的第三類癌基因。Survivin是1997年由美國的Ambrosini等［3］發現的一種細胞凋亡抑制基因, 是凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein, IAP)基因家族的成員。Survivin具有抑制細胞凋亡和調節細胞增殖的雙重作用［4］。Survivin的異常表達及其導致的凋亡抑制對腫瘤的發生、發展、預后及抗腫瘤治療都有著極其重要的影響。總之, PTEN與Survivin均參與細胞周期調控和細胞凋亡, 兩者作用環節一致, 但生物學效應相反。作者采用免疫組化二步抗法檢測PTEN與Survivin在卵巢子宮內膜異位囊腫、EAOCs及正常子宮內膜中的表達,探討之間的關系及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2003~2013年昆明市第一人民醫院及昆明市延安醫院病理科臨床資料完整的存檔蠟塊。17例卵巢子宮內膜相關惡性腫瘤(11例卵巢子宮內膜樣癌, 6例卵巢透明細胞癌), 20例卵巢子宮內膜異位囊腫, 20例正常子宮內膜。卵巢癌Ⅰ~Ⅱ期6例, Ⅲ~Ⅳ期11例, 高、中分化8例、低分化9例, 卵巢癌患者中位年齡53歲, 所有患者術前均未接受放化療。

1.2 試劑與方法 即用型兔抗人PTEN單克隆抗體、即用型兔抗人Survivin多克隆抗體、二步法抗兔/鼠通用型免疫組化檢測試劑盒, 購自基因科技(上海)有限公司。常規制片,采用DAKO Envision二步法并經pH抗兔/鼠9.0之EDTA修復液高壓修復。具體染色步驟按試劑盒說明書進行, 用試劑公司提供的陽性切片作為對照, 以PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照。

1.3 結果判斷 PTEN蛋白抗體陽性均為細胞核內出現棕黃色信號顆粒；Survivin蛋白抗體陽性均為細胞核/漿內出現棕黃色顆粒。

1.4 統計學方法 應用SPSS 16.0統計軟件, 計數資料采用χ2檢驗, 頻數<5的用Fisher精確概率法, 等級相關檢驗采用Spearman相關檢驗, P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 PTEN、Survivin蛋白在不同組織中的表達 PTEN蛋白、Survivin蛋白陽性表達分別定位于細胞核和細胞漿內,見圖1、2。

圖1 PTEN蛋白在各組織的表達(免疫組織化染色 ×200)

圖2 Survivin蛋白在各組織的表達(免疫組織化染色 ×200)

PTEN蛋白在正常子宮內膜、卵巢子宮內膜異位囊腫和EAOCs的陽性表達率呈下降趨勢, 而Survivin蛋白的陽性表達率呈上升趨勢。見表1。

PTEN蛋白表達中, EAOCs與前兩組比較P＜0.05；Survivin蛋白表達中, 與正常子宮內膜組比較P＜0.05, 與卵巢巧克力囊腫組比較P＞0.05。

2.2 子宮內膜異位癥相關的卵巢癌中PTEN、Survivin蛋白表達與臨床病理參數間的關系 PTEN蛋白陽性表達在Ⅰ-Ⅱ期組織中高于Ⅲ~Ⅳ期, 在高、中分化癌組織中高于低分化組織, 但差異無統計學意義(P＞0.05)；Survivin蛋白與之相反；PTEN、Survivin蛋白與年齡無關。見表2。

表1 PTEN、Survivin蛋白在不同組織中的陽性表達(n, %)

表2 PTEN、Survivin蛋白在EAOCs的表達與臨床病理參數的關系［n(%)］

2.3 PTEN、Survivin蛋白在EAOCs中表達的關系 在17例EAOCs中PTEN蛋白陽性表達的4例中, Survivin蛋白表達陽性2例、陰性2例；PTEN蛋白陰性表達的13例中, Survivin蛋白表達陽性12例, 陰性1例；經Spearman相關分析表明, 二者表達無明顯相關(r=0.143, P>0.05)。

3 討論

3.1 PTEN蛋白在EAOCs中的表達及臨床意義 自1925年Sampson首次報道Ems惡變以來, Omer等［5］報道的惡變率為0.7%~1.0%。Ems惡變病例中, 以卵巢子宮內膜樣癌和透明細胞癌為主。本研究結果PTEN在正常子宮內膜、卵巢子宮內膜異位囊腫、EAOCs中的陽性表達逐漸減低, 各組之間差異有統計學意義, 提示PTEN在卵巢子宮內膜囊腫及卵巢子宮內膜囊腫惡變相關腫瘤中失活, 可能在卵巢子宮內膜囊腫發展中起重要作用, 可能是卵巢子宮內膜囊腫向卵巢子宮內膜囊腫惡變相關腫瘤發生過程中的重要原因, 這與Sato等［6］、李淑娟等［7］的研究一致。本研究提示, PTEN蛋白的表達與組織分化程度、臨床分期有關, 組織分化程度越低,分期越晚, PTEN蛋白的表達下降, 盡管差異無統計學意義,但表達率明顯下降, 提示PTEN蛋白的表達與組織分化程度、臨床分期有關。

3.2 Survivin蛋白在EAOCs中的表達及臨床意義 大多數學者認為凋亡抑制蛋白基因Survivin與Caspsse特異性結合主要抑制效應蛋白Caspase-3, Caspase-7的活性, 阻斷細胞的凋亡過程［3］。Survivin的過度表達可致細胞的異常增殖。本研究提示Survivin蛋白在卵巢子宮內膜異位囊腫表達高于正常子宮內膜, 和Fujino等［8］研究一致, 差異有統計學意義。提示Survivin可能和逃避凋亡, 并發展為子宮內膜異位癥緊密相關。

Yoshida等［9］的研究發現, Survivin表達在Ⅰ期透明細胞癌中表達明顯高于Ⅰ期漿液性囊腺癌。故卵巢子宮內膜囊腫惡變可能關系到該基因的改變。本研究提示Survivin蛋白在正常子宮內膜、卵巢子宮內膜異位囊腫和EAOCs的陽性表達率呈上升趨勢, 盡管卵巢子宮內膜異位囊腫和卵巢子宮內膜樣癌和卵巢透明細胞癌的陽性表達的差異無統計學意義, 但后兩者均高于前者, 差異具有統計學意義(P＜0.05), 提示Survivin與卵巢子宮內膜異位囊腫和EAOCs有關。

3.3 PTEN和Survivin蛋白在EAOCs中的表達及臨床意義PTEN和Survivin均參與了細胞周期調控和細胞凋亡, 作用環節一致, 但生物學效應相反。其可能的機制為PI3K/Akt信號轉導途徑對Survivin基因表達有調控作用, 而PTEN在正常生理情況下抑制了PI3K/Akt通路, 從而抑制Survivin的表達［10］。本研究提示PTEN蛋白在正常子宮內膜、卵巢子宮內膜異位囊腫和EAOCs的陽性表達率呈下降趨勢, Survivin蛋白表達呈上升趨勢, 但兩者無相關性。朱曉會［11］用免疫組化法研究認為PTEN、Survivin的表達異常與上皮性卵巢癌的發生具有密切的關系。而Erkanli等［12］研究Survivin、PTEN和p27在正常子宮內膜、增生子宮內膜和子宮內膜癌的表達, 認為Survivin、PTEN在子宮內膜癌的發生發展中不存在聯系。故結合本研究結果, Survivin、PTEN在EAOCs是否存在關聯有待于進一步的研究。

綜上所述, PTEN、Survivin在卵巢子宮內膜異位囊腫及EAOCs表達均有差異, PTEN表達差異有統計學意義(P<0.05),兩者無明顯相關性, 說明卵巢子宮內膜異位囊腫向卵巢子宮內膜相關惡性腫瘤發生過程中, PTEN蛋白表達異常可能更有意義。

［1］ Li J, Yen C, Liaw D, et al.PTEN, a putative protein tyrosine phosphatase gene mutated in human brain , breast, and prostate cancer.Science, 1997, 275(5308):1943-1947.

［2］ Steck PA, Persbous MA, Jasser SA, et al.Identification of a candidate tumor suppressor gene, MMACI, at chromosome 10q23.3 that is mutated in multiple advanced cancer.Nat Genet, 1997, 15(4): 356-362.

［3］ Ambrosini G, Adida C, Altieri DC.A novel ant-apoptosis gene, surviving, expressed in cancer and Iymphoma.Nat Med, 1997, 3(8): 917-921.

［4］ Ambrosini G, Adida C, Sirugo G, et al.Induction of apoptosis and inhibition of cell proliferation by survivin gene targeting.J Biol Chem , 1998, 273(18):11177-11182.

［5］ Omer GW, Hu CY, Herting AT.Ovarian carcinoma arising in endometriosis.Am Obstet Gynecol, 1950, 59(4):760-774.

［6］ Sato N, Tsunoda H, Nishida M, et al.ILoss of heterozygosity on 10q23 13 and mutation of the tumor suppressor gene PTEN in benign endometrial cyst of the ovary.Cancer Res, 2000, 60(24):7052-7056.

［7］ 李淑娟, 郭科軍, 花向鋒, 等.PTEN蛋白在卵巢子宮內膜異位囊腫及卵巢子宮內膜樣癌組織中的表達及臨床意義.中國實用婦科與產科雜志, 2008, 24(4):285-288.

［8］ Fujino K, Ueda M, Takehara M, et al.Transcriptional expression of survivin and its splice variants in endometriosis.Mol Hum Reprod, 2006, 12(6): 383-388.

［9］ Yoshida H, Ishiko O, Sumi T, et al.Survivin, bcl-2 and matrix metalloproteinase-2 enhance progression of clear cell - and seroustype ovarian carcinomas.Int J of Oncology, 2001, 19(3):537-542.

［10］ Carter BZ, Milella M, Altieri DC et al.Cytckine-regulated expression of survivin in mycloid leukemia.Blood, 2001, 97(9): 2784- 2790.

［11］ 朱曉會.卵巢上皮性腫瘤中PTEN和Survivin的表達的意義.中國實用醫藥, 2012, 7(1):93-94.

［12］ Erkanli S, Kayaselcuk E, Kuscu E, et al.Exp ression of survivin, PTEN and p27 in normal hyperp lastic, and carcinomatous endometrium.Int J Gynecol Cancer, 2006, 16(3):1412-1418.

Expression of PTEN and Survivin protein in ovarian cancers associated to endometriosis and its clinical significance JIANG Ping, XU Hong, WANG Zhong-mi, et al. Department of Gynecology, Kunming First People's

Hospital, Kunming 650011, China

Objective To investigate the expression of PTEN protein and Survivin protein in endometriosis associated ovarian cancers(EAOCs) and their significance and correlation.Methods Immunohistochemical method was used to detect the expression of PTEN and Survivin in 17 cases of EAOCs, 20 cases of endometrial cyst of the ovary and 20 cases of normal endometrium.Results The positive rates of PTEN immunostaining showed higher expression in normal endometrium than the others.Respectively, there were significant difference between the three groups(P<0.05).The tendency of Survivin expression was opposite to that of PTEN.The positive expression of PTEN and Survivin was not correlated with clinical stage and differentiation degree of cancer cells (P>0.05).The positive expression of PTEN was not correlated with Survivin.Conclusion PTEN and Survivin protein may be associated between endometrial cyst of the ovary and ovarian cancer associatedto endometriosis, and PTEN protein is more significant.

PTEN; Survivin; Endometriosis; Ovarian neoplasms; Gene expression

2014-04-01］

650011 昆明市第一人民醫院婦科(蔣蘋 許紅王中彌 曹良杰 周亞麗 栗瓊), 病理科(于璐 孫潔)