靜注人免疫球蛋白(pH4)的穩定性研究

黃軍民 梁小明 何淑琴 張麗鈴 黃璠

靜注人免疫球蛋白(pH4)的穩定性研究

黃軍民 梁小明 何淑琴 張麗鈴 黃璠

目的 考察靜注人免疫球蛋白(pH4)的穩定性。方法 對三批靜注人免疫球蛋白(pH4)進行2～8℃條件下為期3年的長期穩定性試驗, 對考察的制品依照《中華人民共和國藥典》2005年版二部中附錄XIX C藥物穩定性試驗指導原則及《中華人民共和國藥典》2010年版二部中附錄XIX C原料藥及藥物制劑穩定性試驗指導原則進行檢測。結果 在長期穩定性試驗過程中, 可見異物, 純度、pH值、IgG含量、蛋白質含量、分子大小分布等均無明顯的變化趨勢。結論 靜注人免疫球蛋白(pH4)穩定性良好, 在進行3年長期穩定性試驗后, 其質量仍符合《中華人民共和國藥典》2010年版三部的要求。

靜注人免疫球蛋白(pH4)；質量；穩定性

以健康人血漿為原料, 采用先進的生物工程技術或分離技術制備的靜注人免疫球蛋白, 是治療原發性免疫缺乏癥、繼發性免疫缺陷病和自身免疫性疾病(如川崎病、特發性血小板減少性紫癜)的有效藥物, 有著其它藥品不可替代的作用［1］。近年來, 隨著靜注人免疫球蛋白的需求量不斷增加,其穩定性也倍受各制藥企業及廣大用戶的關注。本公司生產規格為5% 1.25g/25 ml靜注人免疫球蛋白(pH4)的液體劑型已有多年, 原批準的有效期為2年。為確定靜注人免疫球蛋白(pH4)的穩定性, 保證制品在最有效情況下使用, 實驗中采用長期穩定性試驗對其進行了全面質量檢測, 以觀察制品的各項質量指標的變化情況, 為延長其有效期提供試驗依據。

1 材料與方法

1.1 材料 3批靜注人免疫球蛋白(pH4)制品, 為江西博雅生物制藥股份有限公司于2009年生產。白喉抗體診斷試劑由中國食品藥品檢定研究院提供, 抗-HBs標準品由中國食品藥品檢定研究院提供, 抗-HBs檢測試劑盒購買于北京北方生物技術研究所, 其他試劑均為國產分析純。

1.2 主要儀器 智能放免γ測量儀(SN-695A)購自上海核所日環光電儀器有限公司；高效液相色譜儀購自日本島津公司；凱氏定氮儀購自 Foss公司；全自動電泳儀(Genios)購于INTERLAB公司；澄明度檢測儀購于天津大學精密儀器廠。

1.3 方法

1.3.1 穩定性試驗 抽取的3批靜注人免疫球蛋白(pH4)制品, 在保存前按照2005版《中國藥典》三部標準進行全面質量檢測。再取足夠量樣品置于2～8℃條件下進行為期3年(2009年～2011年)的長期試驗。按長期試驗 0、3、6、9、12、18、24、36個月試驗點對樣品進行質量檢測。其中第0、12、24和36個月為所有項目全部進行質量檢查, 其他試驗點為重點項目檢測。第0個月的首次全檢項目完全參照《中華人民共和國藥典》2005年版三部《靜注人免疫球蛋白(pH4)》中成品檢定的所有檢測項目, 第12、24和36個月全檢項目完全參照《中華人民共和國藥典》2010年版三部《靜注人免疫球蛋白(pH4)》中成品檢定的所有檢測項目。重點檢測項目包括外觀、可見異物、pH值、IgG含量(因2010版藥典中無IgG含量檢測項目, 故第12個月將此項檢測項目改為蛋白質含量)和無菌檢查等5項質量指標。

1.3.2 IgG含量檢測 采用紫外-可見分光光度法(見2005版《中國藥典》三部附錄Ⅺ K)。

1.3.3 蛋白質含量檢測 采用凱氏定氮法(見2010版《中國藥典》三部附錄ⅥB第一法)。結果計算：蛋白質含量(g/L) =(總氮-非蛋白氮)×6.25×10-1。

1.3.4 pH值檢測 將待檢品蛋白質用生理氯化鈉溶液稀釋至質量濃度為10 g/L, 第0個月至第9個月檢測按2005版《中國藥典》三部附錄VA方法測定其pH值；第12個月至第36個月檢測按2010版《中國藥典》三部附錄VA方法測定其pH值。

1.3.5 其他項目的檢測 外觀、可見異物、無菌檢查、分子大小分布、PKA、抗-HBs、白喉抗體、抗補體活性、異常毒性檢查、熱穩定性試驗、熱原檢查等質量指標均采用《中國藥典》三部收錄的標準分析方法。

2 結果與分析

2.1 重點檢測項目的穩定性試驗結果 3批靜注人免疫球蛋白(pH4)制品在2～8℃條件下保存3年, 重點考察項目中的外觀檢查、無菌檢查、可見異物在長期穩定性試驗期間無任何變化, 且均符合《中國藥典》的規定要求。用t檢驗對保存前及保存第36個月檢測的pH值、蛋白質含量、IgG含量進行分析, 三批產品的pH值從0個月～36個月保持在4.0～4.2；蛋白質含量保持在55g/L～59g/L；從0個月～9個月3批產品的IgG含量維持在4.9%～5.3%, 3項指標的數據變化無統計學意義(P＞0.05)。因2010版藥典中無IgG含量檢測項目, 故第12個月將IgG含量檢測項目改為蛋白質含量檢測,蛋白質含量一般情況下會高于IgG含量0.5%左右。

2.2 首檢與末檢的結果對比 將0個月時全項檢定(首檢)結果與2～8℃條件下保存36個月后的檢測(末檢)結果進行對比, 外觀、可見異物、裝量、熱穩定性、無菌檢查、異常毒性檢查、熱原檢查等檢測項目無任何變化, 且均符合《中國藥典》的規定要求。從表1可知：pH值、PKA含量、抗補體活性這3項指標的數據變化差異無統計學意義, 3批制品的純度、分子大小分布、每瓶抗-HBs的總效價均有下降的趨勢, 而糖含量有微小的上升, 每瓶白喉抗體總效價卻有明顯的增加, 但仍符合《中國藥典》的要求標準。

表1 首次檢測與末次檢測的結果對比

3 討論

實驗結果顯示, 靜注人免疫球蛋白(pH4) 具有良好的穩定性, 在進行3年長期穩定性試驗后, 其各項質量指標仍符合《中華人民共和國藥典》2010年版三部的要求。3批制品的分子大小分布在2～8℃條件下保存3年后均有緩慢的下降趨勢, 分析圖譜發現, 該下降趨勢主要是因為部分單體裂解成小分子雜蛋白所致。第36個月, 制品中的IgG單體及二聚體含量之和為98.2%, 優于藥典標準的IgG單體及二聚體含量之和 96%［2］, 因此, 產品在運輸及貯存過程符合 2～8℃冷鏈保藏的要求時, 36個月內制品是安全、有效。

［1］ 周海云.靜注人免疫球蛋白的研究與應用.微生物學免疫學進展.2009,37(4):70-73.

［2］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典.三部.2010版.北京:中國醫藥科技出版社,2010:233.

Study on the stability of the human immunoglobulin(pH4) for intravenous injection

HUANG Jun-min, LIANG Xiao-ming, HE Shu-qin, et al. Jiangxi Boya Biopharmaceutical Limited by Share Ltd, Fuzhou, 344000, China

Objective Investigate the stability of human immunoglobulin (pH4) for intravenous injection.Methods The three batch of human immunoglobulin(pH4) for intravenous injection were carried on the long term stability test of 3 years in 2～8℃.Tested the inspection product in accordance with the “drug stability test guiding principle” of the Chinese Pharmacopeia(VolumeⅡ, 2005 edition)in appendix XIX C and “stability principle of raw material medicine and drug " of the Chinese Pharmacopeia(VolumeⅡ, 2010 edition)in appendix XIX C.Results In the long term stability of the test process, visible foreign matter, purity, pH value, IgG content, protein content, molecular size distribution have no obvious variation trend.Conclusion Human immunoglobulin (pH4) for intravenous injection has good stability, after 3 years of long term stability test, the quality is still in accordance with the requirements of Chinese Pharmacopeia(VolumeⅢ, 2010 edition).

Human immunoglobulin (pH4) for intravenous injection; Quality; Stability

344000 撫州, 江西博雅生物制藥股份有限公司