基于免疫激發態指標觀察補中益氣湯對小鼠免疫功能調節作用

楊光 羅紅 陳晨 孫文平 劉輝

·短篇論著·

基于免疫激發態指標觀察補中益氣湯對小鼠免疫功能調節作用

楊光 羅紅 陳晨 孫文平 劉輝

目的 探討補中益氣湯對免疫激發態小鼠免疫功能的調節作用。 方法 將經卵清蛋白免疫過的小鼠 40只分 A、B 兩組, 分別灌服補中益氣湯和葡萄糖, 1次/d, 每次0.5 ml/只, 連續7 d, 第8天將所有小鼠再次加強免疫 , 再經7 d, 采血分離血清, 用ELISA 法檢測血清中相應抗體的生成水平。結果 補中益氣湯組小鼠抗體生成水平明顯低于葡萄糖組, 差異有統計學意義(P＜0.01)。 結論 補中益氣湯可以下調小鼠的免疫應答水平, 降低抗體生成。

補中益氣湯；免疫激發態；抗體生成YANG Guang, LUO Hong, CHEN Chen, et al. Institute of Laboratory Medcine, Dalian Medical University, Dalian 116044, China

補中益氣湯出自金元時期李東垣的《脾胃論》, 該方由黃芪、升麻、柴胡、人參、炙甘草、當歸、橘皮、白術所組成［1］。本方為補氣升陽、甘溫除熱的代表方, 是臨床治療脾虛證的有卓著療效的常用方劑。研究補中益氣湯的免疫調節作用多采用脾虛小鼠模型［2］, 但制備模型的動物種屬不同或制備方法不同, 結果差別也很大, 即使同一方法同一批次制備的動物模型也不盡相同, 都可能影響檢測指標的觀察。如果先用抗原刺激小鼠, 使小鼠免疫系統處于激發態, 這種狀態高低直接與小鼠免疫應答有關, 就可以靈敏觀察出中藥對小鼠免疫系統的影響。本實驗采用卵清蛋白抗原刺激后的小鼠, 通過補中益氣湯灌胃的給藥途徑, 用ELISA法檢測小鼠的抗體生成水平, 觀察中藥對小鼠體液免疫功能的影響。ELISA檢測方法容易建立, 整個實驗簡單、可靠、靈敏, 減少了實驗的影響因素, 得到較好的實驗結果。

1 材料與方法

1.1 試驗藥物 補中益氣湯所用生藥購于大連同仁堂大藥房, 經大連市藥檢所鑒定為正品。經大連同仁堂大藥房煎熬(生藥含量為20% ), 將該藥液密封, 置于冰箱冷藏保存, 備用。

1.2 實驗動物 昆明種小鼠, 40只, 雄性, 體重18～22 g(由大連醫科大學實驗動物中心提供)。

1.3 試劑與儀器 凍干辣根過氧化酶標記羊抗鼠 BALB/ CIgG 結合物(衛生部北京生物制品研究所)；底物顯示劑A、B液(北京科衛出品)；終止液(上海科華出品)；酶標儀(Read-er230s 全自動酶標儀)。

1.4 方法 將40只小鼠隨機分成2組, 每組20只, 分別標記灌服補中益氣湯組(A組), 5%葡萄糖組(B組)。第1天將所有小鼠于腹股溝皮下注射1:5的卵清蛋白抗原, 0.2 ml/只。第2天開始在固定時間進行灌胃, A組灌服補中益氣湯, B 組灌服5%葡萄糖, 1次/d, 每次0.5 ml/只, 連續7 d。第8天將所有小鼠加強免疫1次, 方法同前, 第15天將小鼠用摘眼球法取血, 2500 rpm離心5 min, 分離血清備用。卵清蛋白抗體效價測定采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)間接法測定。以稀釋的卵清蛋白包被酶標板, 測定小鼠血清的相應吸光度值, 根據標準血清的濃度與吸光度對應關系繪制標準曲線,求得小鼠血清中抗體含量。

1.5 統計學方法 實驗結果用 SPSS11.5軟件協助完成, 數據以均數±標準差( x-±s)表示, 兩組數據間均值比較采用t檢驗, P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

經2周喂養, B組小鼠死亡1只, 死亡原因為隨機死亡。其他小鼠的精神狀態良好。A組小鼠血清中卵清蛋白抗體生成水平明顯低于B組( t=3.329, P＜0.01)。實驗結果見表1。

表1 小鼠血清中卯清蛋白抗體生成水平

3 討論

機體受抗原刺激后, 產生抗體的水平是評估體液免疫狀態的重要指標, 抗體的產生需要T細胞的輔助和細胞因子的參與, 因此抗體生成水平在一定程度上也可以反映機體細胞免疫狀態, 是一種評價機體免疫應答水平的有效方法。本實驗以抗原刺激后的小鼠為研究對象, 測定其灌服中藥后抗體激發水平的變化, 結果顯示激發態小鼠灌服補中益氣湯后, 抗體生成水平明顯低于對照組, 且差異有統計學意義(P＜0.01),初步證實了補中益氣湯可以下調小鼠的免疫應答水平, 對免疫調節有一定程度的影響。近年來, 補中益氣湯的雙向免疫調節觀念在臨床多有應用［3］, 機體受抗原刺激后, 很可能出現過高的免疫反應, 這種反應可能對機體是不利的, 到達一定程度時得到抑制, 對于機體而言又是一種有益的、保護性的調節作用。這種作用能否應用于類風濕關節炎等自身免疫性疾病、組織器官移植中降低排斥反應, 具有一定的實際價值。

中藥對免疫功能的調節受其劑量、成分、藥物的配伍等多方面的影響, 同時給藥途徑、實驗動物種屬及檢測方法都會影響到實驗結果。同一種中藥使用情況不同, 可表現促進或抑制機體免疫功能的作用, 這是中藥獨特而復雜的藥性決定的［4-6］, 我們將在以后的試驗中增加實驗動物數量, 選擇不同的給藥途徑及劑量等, 進一步闡明補中益氣湯的作用機制。本研究旨在拋磚引玉, 希望能引起更多關于中藥方劑對免疫功能作用的研究。近些年, 中藥的免疫調節作用成為研究中藥藥理作用的熱點, 其原因可能是中藥的免疫調節作用確實有優于西藥之處, 而且毒副作用相對于西藥小。中藥的免疫調節作用還用于抗炎、抗腫瘤等臨床輔助治療［7-9］, 可以作為中西醫結合治療研究的新方向。

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［3］ 王梅娟.中藥雙向調節免疫功能的探討.中國中醫藥信息雜志,2006, 13(5):7.

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［6］ 劉輝,常波,劉微微,等.因中藥免疫組學而進行的中藥免疫調節作用的實驗研究.中國免疫學雜志, 2008, 24(8):719.

［7］ 韓棟,周晨.補中益氣湯類方主治規律探.中華中醫藥學刊, 2010, 28(3):595.

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Regulation of functional immunity in mice with Buzhong Yiqi Tang based on immune excited state index

Objective To investigate the regulation of functional immunity in mice with Buzhong Yiqi tang. Methods 40 mice immuned by egg protein were randomly divided into group A and group B, administered with Buzhong Yiqi Tang and glucose individually.The dose was 0.5 ml for each mouse one day and lasted for 7 days.The second immunization was conducted 7 days after the first immunization.Blood serum was separated and ELISA was used to examine antibody to egg protein on day 14 postimmunization. Results Compared with group B, antibody level was low in group A, and had statistic meaning (P＜0.01). Conclusion Buzhong Yiqi Tang is possible to decrease levels of antibody and immunity in mice.

Buzhong Yiqi Tang； Immune excited state； Antibody formation

遼寧省教育廳科技發展基金資助(項目編號：990221063)

116044 遼寧省大連醫科大學檢驗醫學院

劉輝