穿孔素基因?qū)κ裳?xì)胞綜合征患兒細(xì)胞因子影響與臨床分析

鄒旭鳳 任一帆 趙瑞

穿孔素基因?qū)κ裳?xì)胞綜合征患兒細(xì)胞因子影響與臨床分析

鄒旭鳳 任一帆 趙瑞

目的 探討穿孔素基因?qū)LH患兒血清IL-18、IL-10、IL-12、TNF-α、NF-Kβ及新碟呤的影響。方法 應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)20例HLH患兒確診時(shí)、化療第1～2周、第2～3周、第3～4周、第5～7周及8～10周, 共6組的血清IL-18、IL-10、IL-12、TNF-α、NF-Kβ及新碟呤水平變化,11例患兒穿孔素基因陰性, 5例患兒穿孔素基因陽(yáng)性, 對(duì)穿孔素陰性組和陽(yáng)性組的細(xì)胞因子水平進(jìn)行比較。 結(jié)果 穿孔素陽(yáng)性組的IL-10、IL-12、TNF-α水平明顯高于穿孔素陰性組, 兩組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。穿孔素陽(yáng)性組的IL-18水平高于穿孔素陰性組, 兩組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。穿孔素陽(yáng)性組與穿孔素陰性組相比新碟呤水平無(wú)差異, 兩組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論 穿孔素基因影響HLH患兒IL-10、IL-12、TNF-α及IL-18的表達(dá)。

穿孔素基因；噬血細(xì)胞綜合征；細(xì)胞因子；臨床分析

噬血細(xì)胞綜合征(HPS), 又稱(chēng)噬血細(xì)胞性淋巴組織細(xì)胞增多癥(HLH), 該病病因病機(jī)錯(cuò)綜復(fù)雜, 早期癥狀不典型, 診斷非常困難, 常因持續(xù)發(fā)熱而與感染性疾病等相混淆, 且病情進(jìn)展迅速, 許多患兒因不能明確診斷和及時(shí)治療導(dǎo)致死亡。本研究對(duì)收治的16例HLH患兒血清細(xì)胞因子IL-18、IL-10、IL-12、TNF-α、NF-Kβ及新碟呤進(jìn)行檢測(cè), 觀(guān)察其變化,探討穿孔素基因?qū)LH患兒細(xì)胞因子的影響, 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 以2010年1月～2012年5月本科收治的20例HLH患兒為研究對(duì)象, 20例患兒中15例患兒穿孔素基因陰性, 5例穿孔素基因陽(yáng)性。20名患兒中男12例, 女8例；年齡4個(gè)月～4.9歲。病例診斷均符合HLH-2004診斷標(biāo)準(zhǔn),確診前無(wú)糖皮質(zhì)激素應(yīng)用史。收集20例患兒確診時(shí)、化療第1～2周之間、第2～3周之間、第3～4周之間、第5～7周之間及第8～10周之間的血清標(biāo)本, 檢測(cè)IL-18、IL-10、IL-12、TNF-α、NF-Kβ及新碟呤水平變化,令穿孔素基因陰性的15例患兒為穿孔素基因陰性組, 5例穿孔素基因陽(yáng)性的患兒為穿孔素陽(yáng)性組, 將穿孔素基因陰性患兒和陽(yáng)性患兒的細(xì)胞因子水平進(jìn)行比較。各組資料具有可比性。

1.2 試劑和儀器 ELISA試劑盒購(gòu)自美國(guó)RB公司。酶標(biāo)儀購(gòu)自上海熱電儀器有限公司。高精度加樣器及槍頭購(gòu)自德國(guó)BRAVD公司。恒溫水箱購(gòu)自北京市醫(yī)療設(shè)備廠(chǎng)。離心機(jī)購(gòu)自安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司。

1.3 細(xì)胞因子測(cè)定 抽取患兒空腹靜脈血2 ml, 3000轉(zhuǎn)離心10 min后分離血清, 按一次用量分裝, 凍存于-20°冰箱備用。檢測(cè)之前室溫下溶解標(biāo)本, 并提前20 min取出試劑盒,平衡至室溫。嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟檢測(cè)IL-18、IL-10、IL-12、TNF-α、NF-Kβ及新碟呤水平。

2 結(jié)果

穿孔素陽(yáng)性組的IL-10、IL-12、TNF-α水平明顯高于穿孔素陰性組, 兩組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。穿孔素陽(yáng)性組的IL-18水平高于穿孔素陰性組, 兩組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。穿孔素陽(yáng)性組與穿孔素陰性組相比新碟呤水平無(wú)差異, 兩組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 結(jié)果見(jiàn)表1。5例穿孔素基因陽(yáng)性的患兒死亡4例, 15例穿孔素基因陰性的患兒死亡3例。穿孔素陽(yáng)性組5例患兒均出現(xiàn)多臟器功能損傷, 穿孔素陰性組15例患兒5例出現(xiàn)多臟器功能障礙。

表1 穿孔素基因陰性患兒與穿孔素基因陽(yáng)性患兒IL-18、IL-10、IL-12、NF-Kβ、TNF-α及新碟呤水平比

表1 穿孔素基因陰性患兒與穿孔素基因陽(yáng)性患兒IL-18、IL-10、IL-12、NF-Kβ、TNF-α及新碟呤水平比

組別nIL-18(pg/ml)IL-10(pg/ml)IL-12(pg/ml)NF-Kβ(pg/ml)TNF-α(pg/ml)新碟呤(nmol/liter)穿孔素陰性組15271.2±86.451.1±60.4108.8±73.49.6±3.75.4±2.819.1±16.4穿孔素陽(yáng)性組5353.6±111.5213.5±133.5211.8±144.319.5±5.610.2±6.684.9±19.4 t -3.48-7.70-3.33-9.31-4.77-15.07 P＜0.05＜0.01＜0.01＜0.05＜0.01＞0.05

3 討論

HLH分為原發(fā)性或遺傳性HLH和繼發(fā)性HLH兩類(lèi), 其中原發(fā)性HLH又分為家族性HLH和免疫缺陷病兩類(lèi), 家族性HLH分為FHL1～FHL5五型, 免疫缺陷病分為Chediak-Higashi 綜合征、格利塞里綜合征Ⅱ、X性聯(lián)淋巴增生綜合征1及X性聯(lián)淋巴增生綜合征2四型。原發(fā)性HLH患者多有噬血家族史或被證明有明確的基因突變, 多于1歲之內(nèi)發(fā)病,偶見(jiàn)青少年和成年患者［1］。目前尚不能對(duì)所有患兒進(jìn)行與原發(fā)性HLH有關(guān)的基因的缺陷, 本院對(duì)疑似HLH的患兒常規(guī)進(jìn)行穿孔素基因檢測(cè)。目前已知該基因編碼穿孔素蛋白,該蛋白同細(xì)胞毒細(xì)胞顆粒內(nèi)的顆粒酶B一起從細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞分泌結(jié)合在效應(yīng)器和靶細(xì)胞之間。鈣存在的條件下它能插入靶細(xì)胞膜(打孔), 并聚合形成誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的孔, 孔的形成允許顆粒進(jìn)入觸發(fā)凋亡而致靶細(xì)胞破壞［2］。PRF1基因突變可導(dǎo)致穿孔素表達(dá)下調(diào), 穩(wěn)定性下降,從而影響穿孔素傳遞顆粒酶進(jìn)入靶細(xì)胞誘導(dǎo)其凋亡和滲透性溶解, 最終導(dǎo)致FHL2的發(fā)生［1］。本研究中穿孔素陽(yáng)性組的5例患兒均出現(xiàn)多臟器功能損傷, 4例患兒死亡, 比例遠(yuǎn)高于穿孔素陰性組, 提示穿孔素基因陽(yáng)性的HLH患兒臨床表現(xiàn)較重, 可能預(yù)后較差。

家族性噬血細(xì)胞綜合征為常染色體隱性遺傳疾病, 常無(wú)家族史, 主要見(jiàn)于嬰幼兒, 發(fā)病率1/50000, 90%發(fā)生在2歲以下, 病死率極高。1999年Stepp等［3］首次證實(shí)定位于10q21的穿孔素基因與FHL-2有關(guān), 約20%的HLH患兒存在穿孔素基因突變。但是該病具體發(fā)病機(jī)制不明, 多數(shù)人認(rèn)為該病是由多種致病因素引起的淋巴細(xì)胞和組織細(xì)胞過(guò)度增殖、活化, 產(chǎn)生大量炎癥因子, 從而引起的一種可危及生命的過(guò)度炎癥反應(yīng)［4,5］。有人認(rèn)為隨著化療的進(jìn)行及臨床癥狀的好轉(zhuǎn), 患兒的細(xì)胞因子會(huì)逐漸下降至正?；純核?。為避免化療的不同階段細(xì)胞因子下降程度不同對(duì)本試驗(yàn)的影響,本研究收集了HLH患兒化療前8周內(nèi)不同階段的血清標(biāo)本, 檢測(cè)IL-18、IL-10、IL-12、NF-Kβ、TNF-α及新碟呤的活性, 以8周內(nèi)不同階段的因子總和為研究對(duì)象來(lái)探討穿孔素基因?qū)?xì)胞因子的影響。研究發(fā)現(xiàn)：穿孔素陽(yáng)性組的IL-10、IL-12、TNF-α水平明顯高于穿孔素陰性組。穿孔素陽(yáng)性組的IL-18水平輕度高于穿孔素陰性組, 提示穿孔素基因可能影響IL-10、IL-12、TNF-α及IL-18的表達(dá),穿孔素基因陽(yáng)性患兒細(xì)胞因子水平持續(xù)處于較高水平導(dǎo)致患兒預(yù)后較差。

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［2］ 王學(xué)文.噬血細(xì)胞性淋巴組織細(xì)胞增生癥的診斷和治療策略.東南國(guó)防醫(yī)藥, 2009,11(1):40-44.

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［5］ Ohga S, Kudo K, Ishii E, et al.Hematopoietic stem cell transplantation for familial hemophagocytic lymphohistiocytosis and Epstein-Barr virus-associated hemophagocytic lymphohistiocytosis in Japan.Pediatr Blood Cancer, 2010,54(2):299-305.

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