地塞米松對人顆粒脂肪裸鼠移植成活的影響

黃偉 黃靜 王廣寧 王玨 邸晶 張玉

·論著·

地塞米松對人顆粒脂肪裸鼠移植成活的影響

黃偉 黃靜 王廣寧 王玨 邸晶 張玉

目的 探討地塞米松對自體脂肪顆粒移植成活率、脂肪纖維化及壞死程度的影響。方法 將抽脂獲得的顆粒脂肪組織經洗滌純化后分為兩組, 實驗組(A組)加入地塞米松, 對照組(B組)不加地塞米松, 只加入同等體積的生理鹽水, 將經過不同處理的兩組脂肪分別移植于裸鼠背部皮下, 3個月后取出裸鼠皮下的脂肪組織, 測量其重量, 計算其成活率, 并進行HE染色測定脂肪的囊腔數,評價其纖維化及壞死程度。結果 濕重測定結果顯示實驗組脂肪顆粒注射移植的成活率(19.77±2.22)%高于對照組(12.80±1.73)%, 兩組間差異有統計學意義(P<0.01)。HE染色結果顯示實驗組脂肪的囊腔數(209.68±16.74)顯著高于對照組(11.72±1.11), 兩組間差異有統計學意義(P<0.01)。結論 地塞米松可以提高顆粒脂肪移植后的成活率, 并能有效降低注射脂肪的纖維化和壞死程度。

地塞米松；顆粒脂肪注射；成活率

自體脂肪顆粒移植在整形外科領域應用已久, 經常用于治療面部軟組織缺失導致的凹陷畸形或是面部美容手術, 但人體脂肪顆粒注射后吸收率較高, 可達30%~40%, 對于較大面積的面部凹陷, 吸收率可達50%［1］, 嚴重影響和限制了其在整形美容領域的應用。為提高其成活率, 本研究采用裸鼠作為動物模型探討地塞米松促進顆粒脂肪注射移植的效果。作者將臨床抽脂獲得的顆粒脂肪經洗滌、純化等處理后, 分為地塞米松處理組(實驗組)和非處理組(對照組), 移植到裸鼠背部皮下, 觀察其移植效果。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 4~6周雄性裸鼠 (為單純T淋巴細胞缺陷BALB/C-null)8只, 體重15~18 g (SPF級)。

1.2 材料和儀器 地塞米松(Sigma公司), 4%多聚甲醛(sigma), 0.9%生理鹽水(上海試劑廠), 梯度酒精(上海試劑廠), 二甲苯(上海試劑廠), 蘇木精(上海試劑廠), 伊紅(上海試劑廠), 中性樹脂(上海試劑廠), 精密天平秤(Shangping, China), 倒置相差顯微鏡(Olympus, Japan), 超凈工作臺(蘇州安泰空氣技術有限公司), 冰箱(海爾, 中國), 50 ml離心管(FALCON Franklin Lakes NT’U.S.A)。

1.3 實驗方法

1.3.1 脂肪移植模型制備及分組 脂肪取自腹部抽脂患者, 將抽取的脂肪用生理鹽水反復沖洗, 組織剪剪碎獲得顆粒脂肪。

脂肪體積的計算方法為:將沖洗、過濾后的脂肪顆粒放入標記好液面的5 ml注射器中, 抽吸脂肪顆粒, 使液面恰好上升0.3 m1, 即獲得0.3 ml體積的脂肪組織, 0.3 ml脂肪組織濕重約為270 mg。實驗組(A組)將顆粒脂肪浸入含地塞米松5 mg的100 ml NS中, 10 min后用16號針頭注射于裸鼠背部皮下；對照組(B組)將顆粒脂肪浸入100 ml NS中10 min, 同法注射于裸鼠背部皮下。

取裸鼠8只, 以2%戊巴比妥鈉50 mg/kg腹腔注射麻醉,用注射器將A組移植物注入每只裸鼠背部皮下A、B區域, B組移植物注入每只裸鼠背部皮下C、D區域,如圖1所示。術后裸鼠均單籠飼養。

圖1 A、B區為經地塞米松處理的實驗組注射區, C、D區為對照組注射區

1.3.2 脂肪移植術后觀察 術后3個月對游離移植脂肪組織進行觀察, 指標有:①3個月后移植脂肪組織濕重:術后3個月沿移植物被膜外分離, 完整取出移植物, 對其進行濕重測定, 計算存活率。②纖維化及壞死程度的測定:將取出的移植物進行HE染色。

隨機選取10個100倍視野, 計數10個視野的囊腔的平均數目, 將各組移植物測量得到囊腔數目進行比較。

1.4 統計學方法 應用SPSS13.0軟件統計分析, 數據以均數±標準差表示。脂肪濕重、成活率及囊腔數目比較采用T-TEST檢驗。

2 結果

2.1 脂肪移植物濕重及存活率測定 脂肪移植后3個月,完整取出移植物, 如圖2A所示, 稱重(如圖2B所示)。實驗組脂肪平均濕重為(0.053±0.006)g, 對照組脂肪平均濕重為(0.035±0.005)g, 實驗組平均濕重明顯高于對照組, 對照組之間的差異具有統計學意義(P<0.01)(如圖2C所示)。與最初脂肪濕重比較, 實驗組脂肪的成活率為(19.77±2.22)%, 對照組脂肪為(12.80±1.73)%, 可見實驗組脂肪的成活率要遠遠高于對照組, 對照組之間的差異具有統計學意義(P<0.01)(如圖2D所示)?？梢? mg/100 ml地塞米松可提高移植脂肪的成活率。脂肪濕重及存活率具體數據見表1。

2.2 脂肪移植物纖維化及壞死程度的測定 如圖3所示, ×100倍視野下實驗組脂肪移植物中脂肪囊腔小而排列緊密,而對照組中囊腔較大, 排列疏松。實驗組平均脂肪囊腔數為(209.68±16.74), 對照組為(11.72±1.11), 實驗組顯著高于對照組, 差異有統計學意義(P<0.01)(如圖3C所示)。5 mg/100 ml地塞米松可降低移植脂肪的纖維化及其壞死程度, 提高脂肪細胞增殖能力(100倍光鏡下脂肪囊腔數)。

表1 實驗組和對照組脂肪濕重及成活率

圖2 (A)剝離裸鼠背部皮膚后暴露脂肪移植物；(B)剝離取出的脂肪移植物；(C)脂肪濕重；(D)脂肪成活率(左為實驗組, 右為對照組), Exp, 實驗組, Ctrl, 對照組；** P<0.01

圖3 (A)光鏡下實驗組脂肪囊腔數(×100)；(B)光鏡下對照組脂肪囊腔數(×100)；(C)兩組脂肪囊腔數比較(左為實驗組, 右為對照組), Exp, 實驗組, Ctrl, 對照組

3 討論

自體脂肪移植, 是將患者自身脂肪移植填充到軟組織缺損部位, 從而使該部位達到豐滿塑形的效果。自1889年, Vander Meulen將大網膜和脂肪游離移植到肝臟與膈肌之間,首次臨床應用人類自體脂肪組織移植技術, 至1986年 IIIouz提出了脂肪顆粒移植的理論, 自體脂肪移植的發展備受矚目。但在實驗和臨床應用中, 顆粒脂肪注射移植的吸收仍然較多［2,3］,極大限制了此項技術在臨床中的廣泛應用。國內外眾多學者在提高其存活率方面做了大量的實驗研究, 認為影響自體脂肪顆粒成活率的因素包括取脂部位、體積大小及純化方法、受區因素、注射方法及細胞因子的作用等。目前, 促進移植顆粒脂肪組織成活的研究主要有兩個方面：向移植組織內補充營養物質, 如MCDBI53細胞培養基［4］；用成纖維細胞生長因子FGF、胰島素樣生長因子IGF, 促進移植組織內的血管增生和脂肪細胞分化等［5］。大量動物實驗發現移植脂肪吸收、壞死的原因是脂肪細胞缺血造成［6］。移植體周邊區脂肪組織由于血運恢復較快, 成活較好, 而中央區因不能及時得到充足血供, 脂肪細胞壞死較多, 故提高自體脂肪細胞對缺血缺氧的耐受性是其成活的關鍵。

地塞米松具有抗炎、抑制免疫、穩定巨噬細胞和中性粒細胞細胞膜, 從而減少其相應細胞因子生成等多方面生理功能。此外, 有文獻報道地塞米松還能阻止炎癥應答反應并抑制血小板聚集［7］, 對細胞凋亡可表現為抑制作用, 還可以有效地防止中性粒細胞的活化, 減少中性粒細胞釋放腫瘤壞死因子［8］。因此地塞米松能夠有效提高脂肪細胞離體及注射后血運尚未建立時對缺血缺氧的耐受性, 從而提高了顆粒脂肪注射移植的成活率。本研究中裸鼠動物模型也證實了, 5 mg/100 ml地塞米松確實能夠提高顆粒脂肪注射移植的成活率并能有效減少注射移植脂肪的纖維化和壞死。

總之, 隨著各種理論研究的不斷深入, 分子生物學、生物工程等學科突飛猛進的發展, 自體脂肪移植的成活率將不斷提高, 脂肪顆粒移植必將有更加廣闊的應用前景。

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Influence of dexamethasone on the survival rate of human fat particle in nude mice transplantation

HUANG Wei, HUANG Jing, WANG Guang-ning, et al.Department of Plastic and Reconstructive Surgery, Zaozhuang Municipal Hospital, Zaozhuang 277100, China

Objective To explore the influence of dexamethasone on the survival rate, fat fibrosis and necrosis degree of fat particle autologous.Methods Fat particle after washed from human liposuction were randomly divided into two groups: group A and group B.Dexamethasone were added as experimental group(group A), and the same volume of saline added as control group(group B).Two Groups of fat particle were respectively transplanted on the back of nude mice.Three months later, took out the fat in subcutaneous tissue to measure the weight and calculation survival rate and HE staining for the determination of fat fibrosis and necrosis degree.Results The fat particle auto-transplantation survival rate (19.77±2.22)% in experimental group was higher than that in control group (12.80±1.73)% the differences between the two groups were significant(P<0.01).After HE staining, the number of vesicles(209.68±16.74)in experimental group was higher than that in control group(11.72±1.11), the differences between the two groups were significant(P<0.01).Conclusion Dexamethasone can raise survival rate of fat particle autologous, and decrease fat fibrosis and necrosis degree.

Dexamethasone; Fat particle autologous; Survival rate

277102 山東棗莊市立院醫療美容科