炎癥性腸病患者腸道菌群變化及其與炎性指標的關系

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2010年1月—2014年5月在南方醫科大學南方醫院治療的IBD患者65例，均符合2010年世界胃腸病學組織關于IBD的診療指南中規定的診斷標準[5]。其中UC患者36例設為UC組，男20例，女16例；年齡35～64歲，平均(42.15±3.48)歲。CD患者29例設為CD組，男14例，女15例；年齡32～54歲，平均(36.37±3.68)歲。再依據病情活動情況將65例IBD患者分為活動組34例，緩解組31例，分組標準: UC患者根據腹瀉和便血癥狀、內鏡下黏膜病變及醫師評估等因素進行評分，每項0～3分，總分≥2 分為活動期，<2分為緩解期; CD患者依據患者一般情況、腹痛腹瀉癥狀、腸外表現等因素進行CD活動指數(CDAI)評分，≥150 分為活動期，<150分為緩解期。另選取同期健康體檢人群30例設為對照組，各組性別、年齡等一般資料無顯著差異(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 菌群檢測：無菌操作獲取所有患者自然排出的新鮮糞便，迅速置入厭氧罐內，并立即送至實驗室進行培養。準備以下10種細菌的培養基(購自北京拜爾迪生物技術有限公司)：葡萄球菌(SP)、腸桿菌(EMB)、腸球菌(EC)、消化球菌(PS)、擬桿菌(BD)、雙歧桿菌(BL)、乳桿菌(LC)、真桿菌(ES)、酵母菌(SB)、小梭菌(SC)。采用日本光岡知足法[6]進行檢測：將0.5 g糞便標本置于含有4.5 mL稀釋液的安剖瓶中，置旋渦混合器震蕩1 min; 另取7只含1.8 mL稀釋液的無菌青霉素安剖瓶，從首只瓶中取0.2 mL混懸液至第2只瓶中震蕩均勻，依次稀釋后將標本接種于培養基上，以47滴/mL的標準滴管由高稀釋度向低稀釋度滴種，3個稀釋度/平板。完成后稍干燥，將平板倒置于37 ℃恒溫培養箱內，需氧菌和厭氧菌平板分別于24 h和72 h后觀察結果。

1.2.2 炎性指標檢測：所有患者取靜脈血3 mL，以流式細胞儀檢測WBC和PLT計數，以魏氏法檢測ESR，以酶聯免疫吸附法檢測CRP含量。

1.3 觀察指標

觀察UC和CD組患者腸道菌群含量與對照組之間的差異；活動組和緩解組之間腸道菌群含量及WBC、PLT、ESR和CRP等炎性指標差異；以及菌群含量與炎性指標的相關性。菌群含量均以菌落對數值表示。

2 結果

2.1 UC和CD組患者腸道菌群含量與對照組比較

經統計分析，2組患者EMB、EC、SB均較對照組顯著升高(P<0.05或P<0.01)，UC組CD較對照組顯著升高(P<0.05); PS、BD、BL、LC和ES均較對照組顯著下降(P<0.05或P<0.01)。見表1。

表1 UC和CD組腸道菌群含量與對照組比較±s) lg 10n/g

2.2 活動組和緩解組腸道菌群含量比較

經統計分析，活動組的EMB、ES、SB和SC顯著高于緩解組(P<0.05或P<0.01)；BD、BL和LC顯著低于緩解組(P<0.05或P<0.01)。見表2。

表2 活動組和緩解組腸道菌群含量比較±s) lg 10n/g

2.3 活動組和緩解組炎性指標比較

經統計分析，活動組WBC、PLT、ESR、CRP均顯著高于緩解組，見表3。

表3 活動組和緩解組炎性指標比較±s)

2.4 菌群含量與炎性指標的相關性分析

將WBC、PLT、ESR、CRP分別與10種細菌的數量做pearson相關性分析，結果表明，WBC、PLT和CRP均與EC負相關(P<0.01，r=-0.513，-0.478，-0.681)，ESR與SB正相關(P<0.01，r=0.791)，見圖1。

圖1 炎性指標與菌群含量相關性分析

3 討論

近年來IBD在中國的發病率逐步上升[7]，由于病情反復發作，嚴重影響患者生活質量，且長期用藥給患者和家庭帶來沉重經濟負擔。正常人體腸道菌群種類眾多，數量巨大，多數學者認為腸道菌群失衡是IBD發病的重要原因，如Zoetendal等[8]研究發現厚壁菌門的數量或多樣性減少與IBD發病相關，Ricanek等[9]發現，CD患者腸黏膜中BD門細菌多樣性較健康人群顯著減少，而變形菌門和厚壁菌門的多樣性則顯著增加。戎建明等[10]研究表明，IBD患者腸道菌群結構與健康人群有較大差異，存在某些特異性細菌的缺失，且細菌多樣性顯著下降。實驗研究表明，無菌條件下飼養的動物腸道內缺乏共生菌群，即便是具有IBD易感基因或采用其他反復干預，均很難導致這些動物發生IBD[11]，這是腸道菌群紊亂與IBD發病密切相關的重要證據。但也有學者持相反意見，認為腸道菌群紊亂是IBD患者腸道功能受損造成的結果，而非致病因素[12]。本研究檢測了IBD患者的10種細菌，除SP外，所有細菌含量均與對照組差異顯著(P<0.05或P<0.01)，與上述報道一致。此外，有學者研究發現，活動期和緩解期IBD患者的腸道菌群結構也存在差異[13]，本研究結果亦證實了此點。

國外研究顯示，血常規的多項檢測，如白細胞和血小板計數、紅細胞體積分布寬度等與IBD的病情活動相關[14-15]。國內楊榮萍等[16]研究表明，活動期UC患者的平均血小板體積顯著低于緩解期患者和健康人群，而血小板計數顯著高于緩解期患者。ESR反映紅細胞在一定條件下沉降的速度，機體在急性炎癥時產生大量急性反應相物質，從而造成ESR加快。研究[17]表明，IBD活動期患者的ESR顯著高于緩解期患者，且與SB含量呈正相關[18]。CRP是機體急性時相反應性蛋白，在發生細菌感染和損傷時其血清表達水平會顯著升高。大量研究表明，IBD患者的血清CRP水平顯著升高，尤其是活動期患者的表達水平顯著高于緩解期，且與病變嚴重程度正相關[19]，因此CRP是評價IBD疾病活動性的有效指標之一。本研究結果表明，活動組WBC、PLT、ESR、CRP均顯著高于緩解組，且WBC和PLT均與EC負相關，ESR與SB正相關，CRP與EC、BL弱負相關，與上述報道基本一致。

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