手足口病患兒T淋巴細胞亞群和相關細胞因子水平變化的臨床意義分析

唐漢慶，盧 蘭，黃月艷，李清鋒，李曉華

(1. 廣西壯族自治區右江民族醫學院，廣西 百色，533000;2. 廣東省惠州市第四人民醫院，廣東 惠州，516055)

手足口病(HFMD)是兒科常見傳染病，主要由腸道病毒引起，具有傳播快、傳染性強的特點，部分患兒可發展為重型或危重型，其發病機制尚未完全闡明，一般認為T細胞的激活及其釋放的細胞因子引起的細胞免疫和介導的炎性反應或體液免疫有密切的聯系[1-2]。T 淋巴細胞對炎性反應起著重要的調控作用[3-4]，本研究通過檢測HFMD患兒外周血T 淋巴細胞亞群和相關細胞因子水平變化，探討其對臨床的指導意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年4月—2014年5月在本院收治的HFMD患兒56例作為病例組，其中男34例，女22例；普通病例48例，重癥病例8例；年齡8個月～6歲，平均(1.85±0.36)年。另外選取同期經過健康體檢中心體檢的健康幼兒48例作為對照組，其中男28例，女20例，年齡6個月～7歲，平均(2.08±0.66)年。2組在年齡、性別方面無顯著差異(P>0.05)。

1.2 入選及排除標準

依據衛生部頒發的《醫療機構手足口病診療技術指南》(2008年版)[5]診斷標準，病例分型標準如下：普通病例：以發熱、手、足、口、臀部出現斑丘疹、皰疹為主要表現；重癥病例: ① 重型：出現神經系統受累表現：包括精神差、嗜睡、易驚、譫妄；頭痛、嘔吐；肢體抖動、肌陣攣、眼球震顫、共濟失調、眼球運動障礙；無力或急性遲緩性麻痹；驚厥。體征可見腦膜刺激征，腱反射減弱或消失; ② 危重型：出現下列情況之一者：頻繁抽搐、昏迷、腦疝；呼吸困難、紫疳、血性泡沫痰、肺部羅音等；休克等循環功能不全表現。排除其他腸道病毒性疾病或近1個月有呼吸道等感染病史。本研究和所有患兒家屬均簽署知情同意書。

1.3 指標檢測

1.3.1 T淋巴細胞亞群檢測:病例組入院后第1天清晨空腹抽取靜脈血2 mL，置于EDTA抗凝管。管中依次加入3種抗體各10 μL，室溫避光孵育25 min，每管加入200 μL溶血素，輕輕吹打，在室溫下避光靜置 15 min，裂解紅細胞；觀察溶液澄清透明后，加入預冷PBS液1 mL，室溫下分離血清(3 000 r/min分離10 min)，去上清，加入1 mL PBS 液搖勻，滴加1%多聚甲醛液100 μL固定，用流式細胞儀檢測外周血T淋巴細胞亞群。CD4+Ftc、CD8+pe 、CD3+Percp 三色抗體(BD公司，USA); 流式細胞儀(Coulter Epics Eliteesp型，美國Beckman-Coulter公司)。

1.3.2 細胞因子IL-17、IL-22、IL-23 和TNF-α檢測:無菌非抗凝管采集新鮮外周血2 mL，室溫靜置0.5 h后3 000 r/min離心10 min吸取血清，每管50 μL分裝于EP管中，置-80 ℃冰箱保存待檢。ELISA法檢測IL-17、IL-22、IL-23和TNF-α水平，IL-17、IL-22、IL-23和TNF-試劑盒(北京生物科技有限公司)，嚴格按照試劑盒操作說明進行。

2 結 果

2.1 T淋巴細胞亞群檢測結果

與對照組比較，病例組T淋巴細胞總數顯著降低(P<0.01)，CD4+百分比顯著降低(P<0.01)，CD8+百分比顯著降低(P<0.01)，CD4+/CD8+比值下降(P<0.05)。見表1。

表1 T淋巴細胞亞群檢測結果比較 %

2.2 細胞因子IL-17、IL-22、IL-23和TNF-α檢測結果

與對照組比較，病例組IL-17、IL-22、IL-23 和水平TNF-α水平均顯著升高(P<0.05或P<0.01)。見表2。

表2 IL-17、IL-22、IL-23 和TNF-α檢測結果比較

3 討 論

HFMD是兒科常見的腸道傳染性疾病，主要致病原是腸道病毒 71 型[6]、柯薩奇病毒A組，好發于3歲以下兒童，臨床以手、足、口、臀部出現斑丘疹、皰疹為主要體征，重癥病例累及神經系統，需要及時處理。HFMD的發病機制與機體的細胞免疫、炎癥反應和體液免疫有緊密的聯系。

研究[7-8]已經表明T淋巴細胞在免疫過程中扮演重要的角色，對免疫過程起著重要的調控作用。T淋巴細胞根據表型的不同分為CD4+細胞和CD8+細胞亞群，正常情況下，這兩個亞群在數量和功能上保持穩定、相互協調，維持機體正常的免疫應答[9]。其中，CD4+細胞為免疫輔助性細胞，作用是促進體液免疫和細胞免疫；而CD8+為細胞毒性細胞或抑制性細胞，抑制免疫反應，CD4+細胞和CD8+細胞兩者協調，調節機體的免疫反應，CD4+細胞數量、CD8+細胞數量以及CD4+/CD8+比值維持穩定或處于平衡狀態是機體免疫功能得以發揮的重要前提條件，因此，檢測T淋巴細胞亞群對免疫性疾病的發生發展和預后有重要的臨床意義[10]。本研究中，和對照組相比，病例組T淋巴細胞總數、CD4+細胞數量、CD8+細胞數量以及CD4+/CD8+比值均下降，提示HFMD患兒患病后出現免疫功能紊亂，抗病毒感染能力嚴重不足，免疫清除致病原的能力減弱。因此，在使用抗病毒藥物如干擾素等的同時，還要關注如何使用有益于調節機體免疫功能的方法或藥物。中西醫結合綜合治療有可能縮短治療周期并預防出現危重癥[11]。例如，部分“扶正固本”中藥具有免疫功能雙向調節作用，可以考慮使用。

HFMD患兒感染病毒后，機體發生免疫應答，伴有炎癥反應，使與之相關的細胞因子水平發生變化，從有關細胞因子的變化可以推測炎癥對組織的損害和病變的嚴重程度。研究表明IL-17與受體結合后誘導成纖維細胞、上皮及內皮細胞分泌IL-22、IL-23等細胞因子，引起局部炎癥和皮膚斑丘疹損害[12-13]，其中IL-23通過TNF-α和IL-22能誘導表皮增生、炎性滲出等維持皮膚斑丘疹或皰疹形態[14]，TNF-α還可以直接啟動炎性反應過程[15]，IL-17、 IL-22、IL-23和TNF-α等細胞因子相互作用，是HFMD炎癥反應的病理環節。在本研究中，和對照組相比，病例組IL-17、IL-22、IL-23和TNF-α水平均升高，表明HFMD患兒存在炎癥反應，針對HFMD的治療需要考慮抗感染治療，因此，完善的HFMD治療方案既包括抗病毒治療也要考慮相關細胞因子正常水平的恢復問題，綜合考慮后制定全面的治療方案。

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