兔脂肪干細胞（ADSCs）與聚羥基乙酸/殼聚糖（PLGA/CS）支架材料生物相容性研究

李春波 王 紅 陳增淦 陳統一 張 峰 周建平 崔 磊 尹靜波

（1復旦大學附屬中山醫院骨科，2普外科 上海 200032；3上海交通大學醫學院附屬第九人民醫院整形外科 上海 200011；4上海大學材料科學與工程學院高分子材料系 上海 200444）

兔脂肪干細胞（ADSCs）與聚羥基乙酸/殼聚糖（PLGA/CS）支架材料生物相容性研究

李春波1▲王 紅2▲陳增淦1△陳統一1張 峰1周建平1崔 磊3尹靜波4

（1復旦大學附屬中山醫院骨科，2普外科 上海 200032；3上海交通大學醫學院附屬第九人民醫院整形外科 上海 200011；4上海大學材料科學與工程學院高分子材料系 上海 200444）

目的探討兔脂肪來源干細胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）作為種子細胞復合新型聚羥基乙酸（polylactic-co-glycolic acid，PLGA）/殼聚糖（chitosan，CS）支架材料的生物相容性，為進一步構建組織工程化脂肪組織提供實驗依據。方法取雄性新西蘭大白兔腹股溝脂肪組織，Ⅰ型膠原酶消化分離出ADSCs進行培養，貼壁細胞至3～5代，評價其多向分化能力。將干細胞收集重懸后，以l×107/mL的密度接種于多孔PLGA/CS支架，形成細胞-支架材料復合物。培養7天后，掃描電子顯微鏡觀察細胞在支架材料上的黏附生長和基質分泌情況，評價細胞與支架材料的生物相容性；Dil熒光標記檢測細胞在支架材料上的分布；Hochest 33258檢測細胞在支架上的生長情況。接種1和7天后，分別對細胞-材料復合物行Annexin V/PI雙染色法檢測材料對細胞的毒性作用。用成脂誘導條件培養基誘導分化ADSCs及ADSCs支架材料復合物，7天后，尼羅紅熒光染色液檢測ADSCs在不同環境下的成脂分化能力。結果原代培養的ADSCs呈成纖維細胞樣外觀，在相應誘導條件下能夠分化為脂肪細胞和骨細胞。細胞接種于PLGA/CS支架材料上第8天分裂增殖達到高峰，掃描電子顯微鏡下提示ADSCs在支架表面貼附生長良好，并向孔隙內壁充分延伸，細胞周圍形成豐富的基質成分。活死雙染結合共聚焦顯微鏡顯示材料對細胞活性無影響，尼羅紅染色可見成脂誘導后的ADSCs細胞質內有紅色脂滴顆粒形成。結論多孔PLGA/CS支架與兔ADSCs具有良好的生物相容性，可作為構建組織工程脂肪組織的支架材料。

脂肪干細胞（ADSCs）；生物相容性；組織工程；聚羥基乙醇（PLGA）；殼聚糖（CS）

*This work was supported by the Key Project of Science and Technology Commission of Shanghai Municipality（10411953900）.

組織工程的核心是形成細胞-支架材料復合物來重建缺損的組織，選用何種干細胞及支架材料仍是需要解決的重要問題。脂肪源性干細胞（adiposederived stem cells，ADSCs）是一類存在于脂肪組織基質中、具有極強的自我更新能力和多向分化潛能的干細胞，因而被廣泛應用于組織修復和細胞替代治療［1-3］。ADSCs具有來源豐富、取材方便及對機體損傷小等優勢，已成為脂肪組織工程理想的種子細胞［4-5］。研究已經證實單一材料很難滿足組織工程的需要，通過合適的方法將兩種或多種類型的材料組合起來，可以得到性能更加優良的復合支架材料［6］。聚羥基乙酸（polylactic-co-glycolic acid，PLGA）/殼聚糖（chitosan，CS）是由水溶性的PLGA的羧基和CS的氨基相互交聯合成的一種高分子材料，具有良好的可降解性和生物相容性，在組織工程領域具有廣闊的前景［7］。本實驗通過體外培養兔ADSCs，觀察其與多孔PLGA/CS支架復合材料的生物相容性，為進一步構建脂肪組織提供實驗基礎。

材料和方法

實驗試劑及儀器DMEM培養基（美國Hyclone公司）；胎牛血清（fetal bovine serum，FBS，澳大利亞JRH公司）；L-谷氨酰胺300g/mL，胰蛋白酶（上海實生生物技術有限公司）；氯仿，抗壞血酸50g/mL，青霉素0.0625g/L，鏈霉素100g/L，Ⅰ型膠原酶（美國Sigma公司）；Dil染液（美國Invitrogen公司）；PLGA/CS由上海大學材料科學與工程學院提供。

兔ADSCs的分離培養雄性新西蘭大白兔4只（復旦大學附屬中山醫院實驗研究中心），體重1.5～2kg。將兔麻醉后于無菌條件下取腹股溝處皮下2.0～3.0mL脂肪組織，剔除血管及筋膜，PBS沖洗3次。然后剪成1mm×1mm×1mm的脂肪顆粒，加入等體積、含量為0.075％的I型膠原酶，37℃恒溫振蕩消化1h。取等體積的完全培養基（含低糖DMEM、10％FBS、100g/L鏈霉素、0.0625g/L青霉素）中和后，2 000r/min（半徑15cm）離心10min，去除雜質及上清，加入完全培養基重懸細胞，置于37℃、5％CO2及飽和濕度的培養箱中進行單層細胞培養。24h后更換1次培養基，以后每3天換液1次。7～9天后細胞生長融合達80％～90％，經0.5g/L胰酶-EDTA消化，按1∶3進行傳代培養。

兔ADSCs的多向分化潛能將第3代兔ADSCs以1×104/cm2的密度接種于6孔板中，培養24h待細胞穩定貼壁后，更換為成脂誘導液（DMEM培養液中含1×10-6mol/L地塞米松、10mg/L胰島素、0.5mmol/L 3-異丁基-1-甲基黃嘌呤和0.02mmol/L吲哚美辛）及成骨誘導液（DMEM培養液中含1.0×10-7mol/L地塞米松、10mmol/Lβ-磷酸甘油鈉和50mg/L左旋維生素C）［1］。每3天更換1次培養液，分別于培養1周和3周后行油紅O及茜素紅染色，倒置顯微鏡下觀察并拍照。

多孔PLGA/CS支架材料的制備將相對分子質量為1×105的PLGA均勻溶解于NaOH溶液（pH=9）中，隨后加入相對分子質量為4×104的CS粉末。將混合物充分攪拌6h（800r/min），使CS粉末均勻分布在PLGA溶液。加入醋酸溶液調整至pH=4.5，利用靜電反應技術使CS粉末完全溶解。經-90℃冷凍和干燥后，即獲得多孔的PLGA/CS材料。裁剪至合適大小備用，用體積分數2.5％戊二醛固定過夜，乙醇梯度脫水，臨界點干燥，噴金，掃描電子顯微鏡下觀察支架材料的微細結構。

細胞-支架材料復合物的制備將第3～5代兔ADSCs用0.25％胰蛋白酶及0.02％EDTA消化后，收集在50mL離心管中，1 500r/min（半徑15cm）離心5min，棄上清液。加入含10％FBS的DMEM培養液，計數，配制成1×107/mL細胞懸液，用微量移液槍將細胞接種于經過滅菌的支架材料。置于培養箱中培養4h后，添加培養基；24h后，把細胞-材料復合物移至6孔板，留待后續檢測。

掃描電子顯微鏡下觀察兔ADSCs的分布及細胞外基質的分泌將ADSCs接種于PLGA/CS支架材料7天后，PBS沖洗2次，體積分數2.5％戊二醛固定過夜，乙醇梯度脫水，臨界點干燥，噴金，掃描電子顯微鏡下觀察支架表面細胞的生長情況，了解材料與ADSCs的相容性及黏附情況。

兔ADSCs在PLGA/CS支架材料上的增殖情況分別于接種后第1～12天對支架材料上生長的兔ADSCs進行計數。將經成脂誘導的ADSCs-PLGA/CS復合物置于EP管中，將蛋白酶K（0.5g/L）溶液1mL加入EP管中裂解細胞，56℃過夜消化。12 000r/min（半徑15cm）離心15min，吸出40μL上清液移入96孔板，隨后加入Hochest 33258染液160μL，混合均勻，于37℃恒溫箱里避光孵育20min，以酶標儀檢測360nm處的熒光強度（激發光波長為465nm）。未經過成脂誘導的ADSCs-PLGA/CS復合物作為對照組。用同樣方法檢測未接種ADSCs的PLGA/CS材料在360nm處的熒光強度，測定樣本熒光值=復合物熒光值-材料熒光值。確定所測樣本的DNA熒光強度，繪制標準增殖曲線。

Dil熒光標記兔ADSCs在PLGA/CS支架材料上的增殖情況收集消化后的ADSCs，加入預先由無血清DMEM培養液稀釋后的Dil染液（5μg/mL），置于培養箱中孵育15min后，1 500r/min（半徑15cm）離心5min，棄去染液，以新鮮生長培養基重懸細胞，將標記好的細胞接種于PLGA/CS材料，于第1、7天在共聚焦顯微鏡下觀察細胞在支架材料上的生長情況。

Annexin V/PI雙染色法檢測PLGA/CS支架材料對兔ADSCs的毒性作用將細胞-支架材料復合物培養在培養箱中1、7天后，按熒光染色試劑盒的說明，將熒光試劑加入細胞-材料復合體，于37℃、5％CO2培養箱中染色15min。共聚焦顯微鏡下觀察細胞的存活情況：活細胞呈綠色熒光，死細胞呈紅色熒光。

尼羅紅染色評價ADSCs在2維和3維環境下的成脂分化將取傳代培養3～5代兔ADSCs和ADSCs-PLGA/CS復合物加入到成脂誘導液中進行培養。成脂誘導2周后，棄去培養基，PBS清洗3遍，質量分數4％的中性多聚甲醛固定30min。將尼羅紅粉末溶于DMSO溶液，配成濃度為1mg/mL的儲存液，-20℃保存；再將尼羅紅儲存液溶于雙蒸水中，配成1μg/mL的工作液。將細胞置于尼羅紅染液中常溫避光孵育10min，棄去染液，雙蒸水清洗，倒置共聚焦顯微鏡下觀察并拍照（吸收光/激發光=552nm/636nm）［8］。

結果

兔ADSCs的形態觀察ADSCs培養24h后，可見少量散在的貼壁細胞，以長梭形細胞為主，部分呈三角形或不規則形。72h后，可見較多的梭形貼壁細胞，生長速度快，后增生為形態相對均一穩定的成纖維樣梭形細胞（圖1A），7天后細胞融合至80％～90％。第3代ADSCs為長梭形，形態均一，增殖速度較快（圖1B）。ADSCs經成脂誘導1周后，可見細胞由長梭形變為橢圓形，經油紅O染色可見細胞內大量紅色脂滴形成（圖1C）。ADSCs在成骨誘導培養3周后，可見細胞呈多層生長，經茜素紅染色可見細胞周圍基質出現紅色鈣鹽沉積（圖1D）。

兔ADSCs在PLGA/CS支架材料上的分布將ADSCs接種到PLGA/CS支架材料上復合培養，未接種ADSCs作為對照組（圖2A）。掃描電子顯微鏡可見PLGA/CS材料表面呈多孔狀，孔徑約100～300μm（圖2B、C）。兔ADSCs復合PLGA/CS培養7天后，可見細胞緊密附著于材料表面及孔壁，黏附生長，胞體呈高度鋪展，相互交聯并堆積復層生長，增殖狀態良好，覆蓋材料表面，表明ADSCs和PLGA/CS支架材料有較好的生物相容性（圖2D、E、F）。

圖1 ADSCs的形態特點及多向分化能力Fig 1 Morphological character and multi-directional differentiation of ADSCs

圖2 掃描電子顯微鏡下ADSCs在PLGA/CS支架材料上的生長及黏附情況Fig 2 Growth and adhesion of ADSCs on PLGA/CS scaffold under SEM

兔ADSCs在PLGA/CS支架材料上的增殖情況將ADSCs-PLGA/CS復合培養后進行Hochest 33258檢測，細胞曲線呈S形，培養72h內細胞生長較慢，第3天后細胞進入對數生長期，第8天達到緩慢生長期，第8～12天上升緩慢，說明細胞基本布滿支架材料；對照組細胞生長曲線與實驗組相同（圖3）。說明PLGA/CS支架材料與ADSCs具有良好的生物相容性。

圖3 ADSCs在PLGA/CS支架材料上的增殖情況Fig 3 Proliferation curve of ADSCs on PLGA/CS scaffold

Dil標記的兔ADSCs在PLGA/CS支架材料上的黏附情況Dil是一種親脂性熒光染料，能與細胞膜結合以標記細胞，不影響細胞的生長和增殖。Dil熒光標記結果顯示：細胞在支架材料上黏附，并沿纖維方向延伸生長。隨著培養時間的延長，細胞數量明顯增多，至培養第7天細胞已經布滿整個纖維支架表面，呈網格狀分布（圖4）。

圖4 共聚焦顯微鏡下ADSCs在PLGA/CS支架材料上的黏附情況（Dil熒光標記）Fig 4 Adhesion of ADSCs on PLGA/CSscaffold under confocal microscopy（with Dilinfluorescence fluid）

Annexin V/PI雙染色法檢測兔ADSCs對PLGA/CS支架材料的毒性作用Annexin V是一種Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，能與位于細胞膜的磷脂酰絲氨酸（phosphatidylserine，PS）高親和力特異性結合。碘化丙啶（propidine iodide，PI）是一種核酸染料，它不能透過活細胞的細胞膜，但能夠透過死細胞的細胞膜而使細胞核紅染。將Annexin V與PI匹配使用，共聚焦顯微鏡下拍照可以區分活細胞和死細胞：活細胞呈綠色熒光，死細胞呈紅色熒光。隨著培養時間的延長，呈綠色熒光的細胞數量明顯增多，至培養第7天細胞分布于整個支架材料，并呈簇聚集。呈紅色熒光的死細胞數量并未見明顯增加（圖5）。

圖5 共聚焦顯微鏡下檢測PLGA/CS支架材料對兔ADSCs的毒性作用（Annexin V/PI熒光染色）Fig 5 Toxicity of PLGA/CSscaffold to ADSCs under confocal microscopy（with Annexin V/PI fluorescence fluid）

尼羅紅染色評價ADSCs在2維及3維環境下的成脂分化ADSCs和ADSCs-PLGA/CS支架材料復合物經成脂誘導液作用7天后，尼羅紅染色，熒光顯微鏡下可見多個細胞的胞質內出現紅色熒光的脂肪滴，細胞核顯示不清。在2維培養條件下，可見細胞類似于第3代ADSCs分布（圖6A），細胞內形成大量呈紅色熒光的脂滴（圖6B）。在3維培養條件下，細胞沿著材料的孔徑呈網狀分布（圖6C），細胞內形成大量呈紅色熒光的脂滴（圖6D）。

討論

種子細胞在組織工程領域的應用一直以來都是研究熱點。自2001年Zu K等［1］發現ADSCs以來，ADSCs因其具有取材方便、獲取率高、對供區組織損傷小、體外擴增迅速以及多向分化潛能等優點，被廣泛應用于組織工程和再生醫學中［5］。目前的研究已經證實在不同誘導條件下，ADSCs可以向脂肪、軟骨、骨等細胞系分化，因此是一種具有多向分化潛能的干細胞，為組織工程領域的研究提供了新的方向［9-11］。本實驗所涉及的分離培養ADSCs的方法主要參照Cardozo等［12］的研究。兔腹股溝區皮下脂肪組織含有較豐富的干細胞，在取材時剔除血管及筋膜并用PBS反復沖洗，利用貼壁篩選法去除血細胞成分并分離出ADSCs。分離培養的ADSCs具有很好的增殖能力，與成脂及成骨誘導液作用后可向脂肪細胞及骨細胞分化，油紅O及茜素紅染色進一步證實了其多向分化的能力。

圖6 尼羅紅染色評價ADSCs與成脂誘導液作用7天后的成脂分化情況Fig 6 Adipogenic differentiation of ADSCs cultured in adipogenic inducing medium for 7 days was evaluated by Nile red staining

研究證實，利用組織工程方法構建脂肪組織，除了具有足夠數量的種子細胞外，還要有一定的3維空間的生物可降解支架。理想的生物材料應具備：（1）良好的生物相容性，不僅能與接種的細胞相容和還能與回植體內周圍其他組織相融合；（2）可控的生物降解性，降解后的代謝物對機體無損害、無毒性；（3）一定的機械強度和可塑性；（4）立體多孔的結構；（5）半滲透性，以利于小分子的交換。目前用于組織工程的支架材料來源有天然生物材料和人工合成材料。常用的人工材料包括：活性陶瓷羥、基磷灰石、磷酸三鈣、聚乳酸、聚乙醇酸、PLGA共聚物、聚乙烯、聚丙烯、聚氯乙烯以及某些金屬材料等，天然生物材料主要包括：膠原、幾丁質、葡聚糖、硫酸軟骨素、纖維蛋白凝膠、珊瑚、滅活動物骨等［13］。PLGA是由聚乳酸（polylactic acid，PLA）和聚羥基乙酸（polyglycolic acid，PGA）形成的共聚物，具有良好的生物相容性和力學性能，對機體無毒性及免疫原性，其降解產物是機體正常的代謝成分。PLGA的結構和親/疏水性及降解率可以通過PLA和PGA的比列進行調節［14］。PLGA表面活性和機械性能良好，能促進種子細胞的黏附、增殖和分化，同時可控的降解速率同步于組織形成速率，因而有利于組織的再生與修復。近年來，PLGA已經被廣泛的應用于軟骨、骨、脂肪組織工程及藥物緩釋系統等領域［15］。但是PLGA具有較高的水溶性，不能形成穩定的結構無法為細胞的黏附和增殖提供合適的微環境。CS是甲殼素脫乙酰基后的產物，無毒，無氣味，可吸收，具有良好的生物相容性和促進細胞黏附和增殖的優點，廣泛應用于生物醫學材料領域［16-18］。CS的游離羥基和PLGA的羧基發生交聯反應，使支架強度提高。殼聚糖可以在PLGA表面形成一層膜性結構，有效彌補單純PLGA支架材料易溶性和穩定性不足等問題［7］。研究表明，聯合CS的穩定性及PLGA的生物活性制備的復合支架，比單一成分支架具有更好的生物和機械性能。

本研究我們選用孔徑為100～300μm，孔隙率為90％、PLGA∶CS為1∶1的PLGA/CS作為支架材料［6］，觀察其與兔ADSCs復合情況，并進一步探討其是否可作為脂肪組織工程的支架材料。電子顯微鏡下發現細胞在支架表面和支架孔壁上能很好地黏附、伸展和生長。ADSCs不僅能黏附在材料表面，還能生長進入材料的空隙內，說明PLGA/CS支架為ADSCs提供了良好的3維空間，能容納更多數量的細胞。Dil熒光標記檢測結果顯示，細胞在支架上黏附，并沿纖維方向延伸生長，隨著培養時間的延長，細胞數量明顯增多。Hochest 33258檢測兔ADSCs在多孔PLGA/CS上的生長曲線，結果顯示以1×103/mL接種于材料上的細胞生長良好，植入8天后細胞數量達到最大值。Annexin V/PI雙染色法提示支架材料對細胞的活性無毒性作用，且不影響細胞的增殖。實驗證實PLGA/CS具有良好的生物相容性，能夠為組織工程種子細胞的生長提供適宜的3維空間。當把細胞-支架材料復合物植入體內時，支架材料逐漸降解，ADSCs逐漸分化為脂肪細胞，并分泌特定的細胞外基質，最后構成穩定的疏松網絡結構。

ADSCs經過成脂誘導培養后，胞內有大量的脂滴形成。使用油紅O染色法進行形態學檢測，其原理是油紅O可以特異性使甘油三酯等中性脂肪著色。但是對于三維支架材料上ADSCs的成脂誘導形態檢測，此種方法具有局限性。尼羅紅染色劑是一種親脂性的惡嗪類熒光染料，與脂類物質（包括臘酯和三酰甘油）以及各種脂肪酸結合后，在激發波長485nm處顯示為紅色［8］。在本研究中，細胞-支架材料復合物經過成脂誘導液作用7天后，加入尼羅紅染液，脂滴顯示紅色。此方法可以直觀地觀察到成脂誘導的ADSCs形成脂滴的形態。

在應用組織工程方法重建缺損的組織時，移植組織在體內需維持較長時間是一個巨大的挑戰。因此，支架材料降解的時間必須要和重建組織生成的時間相適應。Patrick等［19］研究發現，將脂肪前體細胞復合到PLGA支架材料上，再回植入大鼠體內后2個月，形成脂肪組織數量最多；隨后逐漸減少；5個月后，生成的脂肪組織完全消失。因此，為了構建合適的組織工程脂肪組織，支架材料的降解時間必須達到2～5個月。研究證實，通過調整PLGA與CS的比例，可以改變PLGA/CS支架材料的降解率［6］。為了獲得合適的支架材料，進一步研究需要通過調整PLGA和CS的比率來改變支架材料的降解率，使其滿足不同類型組織的生成。

本研究成功分離了兔ADSCs，并驗證了其向成脂、成骨分化的能力。將兔ADSCs種植在3維多孔PLGA/CS支架材料上，顯示了良好的生物相容性，PLGA/CS對兔ADSCs的黏附、增生、分化和分泌功能均無明顯影響。研究證實，PLGA/CS可以作為構建組織工程的支架材料，但是體外實驗尚不能完全反映該支架材料長期植入體內可能發生的生物學效應，此生物材料是否適合機體組織工程脂肪組織的構建，還有待進一步的體內實驗予以證實。

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Biocompatibility of rabbit adipose-derived stem cells（ADSCs）with porous polylactic-co-glycolic acid（PLGA）and chitosan scaffold（CS）

LI Chun-bo1▲，WANG Hong2▲，CHEN Zeng-gan1△，CHEN Tong-yi1，
ZHANG Feng1，ZHOU Jian-ping1，CUI Lei3，YIN Jing-bo4
（1Department of Orthopedtcs，2Department of General Surgery，Zhongshan Hospttal，Fudan Untverstty，Shanghat200032，Chtna；3Department of Plasttcs，Shanghat Ntnth People's Hospttal，School of Medtctne，Shanghat Jtaotong Untverstty，Shanghat200011，Chtna；4Department of Polymer Matertal，School of Matertals Sctence and Engtneertng，Shanghat Untverstty，Shanghat200444，Chtna）

ObjectiveTo investigate the biocompatibility of rabbit adipose-derived stem cells（ADSCs）and polylactic-co-glycolic acid（PLGA）/chitosan（CS）scaffold and to provide experiment basis for building tissue-engineered adipose tissue.MethodsADSCs were isolated from subcutaneousadipose tissue in groin area of New Zealand white rabbit with the method of enzymatic digestion.The cells were cultured and passaged to 3-5 generation and its differentiation ability was evaluated.After 3-5 generation ADSCs were harvested，re-suspended with a density of 1×107/mL and replanted into PLGA/CS scaffold，scanning electron microscope was used to reveal the microstructure of PLGA/CS and the growth of ADSCs on PLGA/CS scaffold 1 and 7 days after seeding for the evaluation of biocompatibility between ADSCs and PLGA/CS scaffold.The distribution of ADSCs on PLGA/CS scaffold appended with adipogenic inducing medium or basic culture medium was evaluated with Dil fluorescence and confocal microscopy.The proliferation of ADSCs on PLGA/CS scaffold appended with adipogenic inducing medium or basic culture medium was evaluated with hochest33258.At 1 and 7 days post-seeding，the toxicity of PLGA/CS scaffold to ADSCs was assessed by Annexin V/PI influorescence fluid.ADSCs and ADSCs-PLGA/CS complex were cultivated in adipogenic inducing medium for 7 days and the differentiated cells were identified by Nile red stanning.ResultsPrimarily cultured rabbit ADSCs presented fibroblast-like appearance and ADSCs cultured in adipogenic and ostogenic medium could differentiate into adipose cell and bone cells.The proliferation of cells on PLGA/CS scaffold with adipogenic inducing medium or basic culture medium went plateau phase on the 8 day.Scanning electron microscopy（SEM）showed that ADSCs could grow well on the PLGA/CS scaffold and abundant extracelluar matrix（ECM）both on the surface and interior pore of scaffold.Annexin V/PI influorescence staining and confocal microscopy demonstrated that the PLGA/CS scaffold could not affect the activity of ADSCs post-seeding.An amount of lipid droplet within cytoplasm of cells on the PLGA/CS scaffold was revealed by Nile red staining.ConclusionsThe porous PLGA/CS scaffold and rabbit ADSCs has excellent biocompatibility，which could be used as a tissue engineered scaffold for building adipose tissue.

adipose-derived stem cells（ADSCs）；biocompatibility；tissue engineer；polylacticco-glycolic acid（PLGA）；chitosan（CS）

R 318.08

A

10.3969/j.issn.1672-8467.2014.05.007

上海市科委重點攻關項目（10411953900）

▲Co-frist authors

△Corresponding author E-mail：chen.zenggan@zs-hospital.sh.cn

2013-12-24；編輯：段佳）