HPLC法測定長白山牛皮杜鵑中綠原酸的含量*

何曉燕，喬淑芬，苗婷婷

(通化師范學院 生命科學學院，吉林 通化 134002)

牛皮杜鵑(RhododendronchrysanthumPall.)為杜鵑花科植物，又稱牛皮茶、高山茶等[1]．具有較高的觀賞價值，廣泛分布于長白山海拔1300～2600m的高山上，對高海拔有較強的適應性[2]．牛皮杜鵑主要含有黃酮類及單寧酸類化合物[3]，其中蘆丁具有抗炎、抗病毒、鎮痛、降低毛細血管通透性引起的出血癥等方面的作用．目前國內外有關牛皮杜娟的化學成分研究報道很少．本文擬通過對長白山牛皮杜鵑進行化學成分的提取，測定其所含綠原酸的含量[4-6]，以探尋一種簡便、有效的HPLC測定方法，為今后進一步研究開發牛皮杜鵑的應用價值奠定基礎．

1 實驗材料、儀器與試藥

1.1 實驗材料

牛皮杜鵑葉，采自于長白山，經通化師范學院生命科學學院周繇教授鑒定．干燥粉碎，備用．

1.2 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀(美國安捷倫儀器有限公司)；FA1104電子分析天平；KQ-500型超聲波清洗器(昆山市超聲波儀器有限公司)．綠原酸對照品購自于中國藥品生物制品檢定所(批號為110753-200413)，乙腈(色譜純)，磷酸(分析純)，娃哈哈純凈水，其它試劑均為分析純．

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18(250mm×4.6mm，5μm)；流動相為乙腈-0.4%磷酸溶液(15:85)；檢測波長為327nm；流速1.0ml·min-1；柱溫:25℃．

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取綠原酸對照品5.130mg，用甲醇溶解，制成濃度為0.513mg·ml-1的對照品溶液．

2.3 供試品溶液的制備

取牛皮杜鵑粉末1g，精密稱定，置于錐形瓶中，精密加入50ml的70%乙醇，稱定質量，超聲提取30min后取出，放冷，再稱定質量，用70%乙醇補足減失的質量，搖勻，0.23μm微孔濾膜過濾，取續濾液作為供試品溶液，備用．

2.4 線性范圍考察

精密吸取綠原酸對照品溶液1、5、10、15、20μl，依次進樣，記錄峰面積．以進樣量(μl)為橫坐標，以峰面積為縱坐標，得回歸方程為Y=700.86X+25.711(r=0.9995)，結果表明綠原酸在0.513～10.26μg范圍內線性關系良好．

2.5 精密度試驗

精密吸取綠原酸對照品溶液10μl，連續進樣5次，記錄峰面積，計算得RSD值為1.06%，表明儀器精密度較好．

2.6 重現性試驗

取同一批牛皮杜鵑粉末約1g，按2.3項方法制備供試品溶液6份，分別進樣20μl，記錄峰面積．測得RSD值為1.32%，表明重現性較好．

2.7 穩定性試驗

精密吸取同一供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24h進樣20μl，記錄峰面積，測得RSD值為2.36%．表明在24h內供試品的穩定性較好．

2.8 加樣回收試驗

取已知含量的牛皮杜鵑粉末約1g，共6份，于每份中加入綠原酸對照品溶液2ml，按2.3項方法制備供試品溶液，分別進樣20μl，記錄峰面積．計算綠原酸平均回收率為98.9%，表明回收良好．結果見表1．

表1 綠原酸加樣回收試驗(n=6)

2.9 樣品含量測定

精密吸取按2.3項方法制備的供試品溶液20μl，按上述色譜條件進行測定，計算得出綠原酸的含量為0.754mg·g-1．見圖1、圖2．

3 討論

綠原酸具有較強的生物活性，具有廣泛的抗菌作用，為臨床上祛風除濕、強筋壯骨的物質基礎．本文首次建立了長白山牛皮杜鵑中綠原酸的HPLC含量測定方法，此法簡便快捷、結果準確、重現性好．此外，筆者也曾對長白山牛皮杜鵑的不同溶劑提取物的抗炎鎮痛活性進行了系統研究，結果表明此方面的活性較強．因此綠原酸作為其活性的物質基礎，對其進行質量控制是完全必要，這也為今后進一步系統研究牛皮杜鵑的化學成分奠定基礎．

圖1 綠原酸對照品的HPLC

圖2 牛皮杜鵑供試品的HPLC