UHRF1在肝細胞肝癌中的表達及意義

施國明 蔡加彬 俞靜嫻 柯愛武 董兆如 張弛 張鵬飛 邱雙健 孫惠川 周儉 樊嘉

(復旦大學附屬中山醫院肝外科，上海 200032)

UHRF1(Ubiquitin-like，containing PHD and RING finger domains 1)作為表觀基因組的重要調控因子，與DNA甲基化的維持有關，參與多種生理和病理過程[1-2]。近來文獻報告，UHRF1在乳腺癌[3]、膀胱癌[4]、前列腺癌[5-7]、非小細胞肺癌[8]等多種腫瘤組織和細胞中表達上調。本研究采用免疫組織化學方法檢測肝細胞肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)患者癌組織及癌旁組織中UHRF1的表達水平，并分析了UHRF1與HCC臨床病理特征的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2005—2008年在復旦大學附屬中山醫院肝外科行腫瘤根治性切除術且隨訪資料完整的556例HCC患者的腫瘤標本，經病理學證實診斷。556例中男性473例，女性83例。所有患者術前均未接受放療、化療；標本均在手術切除后15 min內采集。

1.2 試劑 鼠抗人UHRF1單克隆抗體(美國BD公司)；辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠二抗、免疫組織化學SP試劑盒及二氨基聯苯胺(3,3′-diaminobenzidine，DAB)試劑盒均購自上海長島生物技術公司。

1.3 免疫組織化學方法檢測UHRF1蛋白的表達 參照免疫組織化學SP試劑盒說明書進行。細胞核內見棕褐色顆粒定義為UHRF1表達陽性，細胞核無棕褐色顆粒為陰性。

1.4 統計學處理 采用SPSS 16.0統計軟件處理，計數資料組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 UHRF1蛋白在HCC組織中的表達 經HE染色確定HCC診斷(圖1A～D)。免疫組織化學SP法結果顯示，HCC患者UHRF1蛋白陽性表達主要定位于癌細胞的細胞核，呈棕黃色或棕褐色，染色均一，不同患者個體間UHRF1蛋白陽性表達情況差異較大(圖1 E、G)；HCC患者癌組織中UHRF1蛋白表達陽性率為59%，癌旁組織中UHRF1呈陰性表達(圖1 F、H)。

圖1A～D為病例1(A為癌、B為癌旁)、病例2(C為癌、D為癌旁)的HE染色，×200；E、F為病例1，UHRF1蛋白在HCC組織陽性表達(E)，在癌旁組織陰性表達(F)，DAB染色，×200；G～H為病例2，UHRF1蛋白在HCC組織(G)及癌旁組織(H)陰性表達，DAB染色，×200

2.2 UHRF1蛋白表達與HCC臨床病理特征的關系 UHRF1蛋白表達與HCC患者腫瘤大小(P<0.01)、分化程度(P<0.05)、微血管侵犯(P<0.01)相關，而與年齡、性別、血清甲胎蛋白水平、血清丙氨酸氨基轉移酶水平、有無肝硬化、腫瘤數目、腫瘤是否有包膜無關(P>0.05)，見表1。

表1 UHRF1蛋白表達與HCC臨床病理特征的關系

續表

3 討 論

UHRF1是目前在哺乳動物細胞中已知的唯一能特異性結合甲基化H3和甲基化CpG的蛋白，參與調節細胞周期進程，與細胞增殖密切相關[1-2,9-10]。UHRF1編碼蛋白與特定的DNA序列結合后，進一步招募組蛋白泛素化酶，影響染色質的結構，從而發揮調控基因表達的作用[9]。UHRF1的SRA域在DNA復制過程中識別半甲基化的DNA子鏈，并使DNMT1聚合在DNA鏈上，將半甲基化DNA雙鏈轉變成完全甲基化DNA，從而使得DNA甲基化狀態在復制和傳代過程中得以維持[1-2]。

多項研究[3-7]表明，UHRF1在多種腫瘤中表達上調，UHRF1過表達通過影響細胞的細胞周期、凋亡、抑癌基因失活等多種方式影響腫瘤的發生與進展。本研究發現，UHRF1蛋白在HCC癌組織中的表達水平明顯高于癌旁組織，這提示UHRF1可能與HCC的發生相關；且UHRF1蛋白過表達與HCC的惡性表型如腫瘤大小、分化程度和微血管侵犯有關，說明UHRF1過表達可能參與HCC的進展，但確切的分子機制有待進一步研究。本研究提示UHRF1過表達在HCC發生發展中起重要作用，進一步闡述其在HCC發生發展的分子機制，有望為HCC的防治提供新的思路。

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