不同產地金銀花主要活性成分的含量比較

廣西中醫藥大學，廣西 南寧 530001

不同產地金銀花主要活性成分的含量比較

梁爽

廣西中醫藥大學，廣西 南寧 530001

目的比較不同產地的金銀花中主要活性成分綠原酸及木樨草苷的含量。方法超聲波提取供試品，采用高效液相色譜法和化學分析法對5個產地金銀花主要活性成分的含量進行測定。結果5個產地金銀花中綠原酸含量：湖南>河北>山東>河南>湖北；木樨草苷含量：山東>河南>河北>湖北>湖南。結論不同產地金銀花藥材中有效成分綠原酸及木樨草苷的含量存在很大差異，本試驗為不同生產目的選用不同產地的金銀花藥材提供了實驗依據。

金銀花；綠原酸；木樨草苷；HPLC；含量比較

金銀花為中國藥典2010版一部收載品種[1]，有良好的藥用植物資源，又名忍冬花(《新修本草》)、銀花(《溫病條辨》)、鷺鷥花(《植物名實圖考》)、雙花(《中藥材手冊》)。本品為忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾[2]。性寒，味甘，歸肺、心、胃經，具有清熱解毒、涼散風熱之功，常用于癰腫疔瘡、喉痹丹毒、血熱毒盛，為臨床常用藥。金銀花主要成分為綠原酸，木樨草苷，具有抗病毒、抗炎、解熱、調節機體免疫力、降血脂等多種藥理作用[3-7]，其含量的高低是目前衡量金銀花品質優劣的指標之一[8]。本實驗建立高效液相色譜法對其中主要活性成分的含量進行測定，對金銀花質量研究具有很重要的意義。

1 材料、儀器與試劑

1.1 材料 綠原酸標準品(110763-200212)，木樨草苷對照品(111720-200604)，均由中國藥品生物制品檢定所提供。山東、河南、河北、湖南、湖北產地的金銀花樣品來自安徽亳州中藥材大市場，經劉漢珍老師鑒定為忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾。

1.2 儀器與試劑 KQ-250DE 數控超聲波清洗器，由昆山市超聲儀器有限公司生產；Waters1525型高效液相色譜儀，由美國Waters公司生產； Waters2487型紫外檢測器，由美國Waters公司生產。甲醇，乙醇，冰醋酸，磷酸，乙腈等均為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

2.1.1 綠原酸色譜條件與系統適用性試驗 流動相：乙腈-0.4%磷酸溶液(13∶87)；固定相：十八烷基硅烷鍵合硅膠；檢測波長：327nm；流速：0.8～1ml·min-1；進樣量：對照品、供試品進樣均為20μL；柱溫為常溫。在此色譜條件下, 理論塔板數不小于2000, 峰形較好。

2.1.2 木樨草苷色譜條件與系統適用性試驗 流動相A：甲醇；流動相B： 0.5%冰醋酸；按表1梯度洗脫檢測波長：350nm；流速：0.8～1 ml·min-1；進樣量：20μl；柱溫為常溫。在此色譜條件下, 理論塔板數不小于2000, 峰形較好。

表1 梯度洗脫條件

2.2 對照品溶液的制備

2.2.1 綠原酸對照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對照品10mg，置50mL棕色量瓶中，用50%甲醇稀釋制成每毫升含0.2mg的溶液即得。

2.2.2 木樨草苷對照品溶液的制備 精密稱取木樨草苷對照品5.5mg，置50mL錐型瓶中，加70%乙醇制成每毫升含0.11mg的溶液即得。

2.3 供試品溶液的制備

2.3.1 綠原酸供試品溶液的制備 精密稱取金銀花樣品粉末0.5g，置于100mL具塞錐形瓶中，加入50%甲醇50mL，超聲波處理30min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，將溶液放入離心管里，離心10～15min后停止離心，待離心機停止轉動后取出，精密量取上清液5ml，置25ml棕色瓶中，加入50%甲醇至刻度定容，搖勻，即得。

2.3.2 木樨草苷供試品溶液的制備 精密稱取金銀花樣品粉末3g，置100ml具塞錐形瓶中，加入70%乙醇50ml，超聲波處理60min，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻，將溶液放入離心管里，離心10～15min后停止離心，待離心機停止轉動后取出，精密量取上清液5ml，置25ml棕色瓶中，加入70%乙醇至刻度定容，搖勻，即得。

2.4 線性關系考察

2.4.1 精密吸取綠原酸對照品溶液1.0、4.0、8.0、12.0、16.0μl注入液相色譜儀,測定峰面積,以綠原酸進樣量(μg) 為橫坐標,峰面積為縱坐標,繪制標準曲線,其回歸方程為Y=2E+06X-55568，r=0.99985。結果表明綠原酸在0.20～3.2μg之間與峰面積呈良好的線性關系。

2.4.2 精密吸取木樨草苷對照品溶液2.0、6.0、10.0、16.0、20 μl注入液相色譜儀, 測定峰面積, 以木樨草苷進樣量(μg) 為橫坐標, 峰面積為縱坐標, 繪制標準曲線, 其回歸方程為Y =4E+06X-33367，r = 0.9 997。結果表明木樨草苷在0.22～2.2μg之間與峰面積呈良好的線性關系。

2.5 精密度試驗

2.5.1 精密吸取綠原酸對照品溶液10μL, 重復進樣5次，記錄峰面積，結果精密度良好，RSD為2.516%。

2.5.2 精密吸取木樨草苷對照品溶液10μL,重復進樣6次，記錄峰面積，結果精密度良好，RSD為2.243%。

2.6 重復性試驗

2.6.1 精密吸取5份同一批金銀花提取液,同2.3項下方法制備供試品溶液, 進樣分析, 計算金銀花中綠原酸的含量，結果重復性良好，RSD為2.393%。

2.6.2 精密吸取5份同一批金銀花提取液, 同2.3項下方法制備供試品溶液, 進樣分析, 計算金銀花中木樨草苷的含量，結果重復性良好，RSD為1.896%。

2.7 穩定性試驗

2.7.1 精密吸取金銀花提取液, 同2.3項下方法制備供試品溶液，于0、1、2、4、6、8、12、24h分別進樣20μL分析, 計算綠原酸的含量, 結果穩定性良好，RSD為2.792%。

2.7.2 精密吸取金銀花提取液, 同2.3項下方法制備供試品溶液，于0、1、2、4、6、8、12、24h分別進樣20μL分析, 計算木樨草苷的含量, 結果穩定性良好，RSD為2.789%。

2.8 加樣回收率試驗

2.8.1 精密吸取同一批已知綠原酸提取液10μL,共5份，每份分別加入對照品(0.2mg·μL-1)10μL,分別進樣分析,由測得量與加入量計算回收率, 結果平均回收率為99.56%，RSD為2.235%，表明回收率良好。

2.8.2 精密吸取同一批已知木樨草苷提取液10μL,共5份，每份分別加入對照品(0.11 mg·μL-1)10μL,分別進樣分析,由測得量與加入量計算回收率,結果表明回收率良好。

2.9 樣品含量測定

2.9.1 按色譜條件進樣20μL，以峰面積值求得綠原酸的質量,再計算出金銀花中綠原酸的含量,山東、河北、河南、湖南、湖北金銀花中綠原酸含量為3.921%、4.372%、3.558%、5.215%、1.177%。

2.9.2 按色譜條件進樣20μL，以峰面積值求得木樨草苷的質量,再計算出金銀花中木樨草苷的含量, 山東、河北、河南、湖南、湖北中各金銀花中木樨草苷的含量為0.142%、0.063%、0.088%、0.033%、0.057%。

3 結論

不同產地金銀花中綠原酸含量有較大差別，5個產地金銀花中綠原酸含量是湖南﹥河北﹥山東﹥河南﹥湖北；木樨草苷含量為山東﹥河南﹥河北﹥湖北﹥湖南。以綠原酸，木樨草苷含量為檢測指標，建立了綠原酸，木樨草苷含量測定的HPLC方法，并進行了方法學考察,結果表明，湖南金銀花中綠原酸成分的含量高于其他產地綠原酸的含量，山東金銀花中木樨草苷成分的含量高于其他產地的木樨草苷的含量。為進一步綜合開發金銀花、擴大金銀花的生藥資源奠定基礎，為金銀花的質量控制規范化和標準化提供了依據。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:化學工業出版社,2010:205-206,28-29．

[2]王發國,葉華谷,馬其俠,等.金銀花及其藥理作用[J].生物學通報,2004,39(5):17-18.

[3]劉琪.金銀花化學成分及藥理作用分析[J].科技創新與應用,2012,(2):45.

[4]季志平,朱萱萱,倪文澎,等.金銀花提取物抗病毒的作用研究[J].中國醫藥導刊,2009,11(1):92．

[5]王林青,崔保安,張紅英,等.中藥金銀花提取物抗炎作用研究[J].中國畜牧獸醫,2008,35(8):82．

[6]謝新華,蔣紹祖,鄒曉琴,等.金銀花對發熱新西蘭兔解熱作用機制的研究[J].時珍國醫國藥,2009,20(3):691．

[7]王妍,石學魁,宋寶輝.金銀花增強小鼠免疫功能的研究[J].牡丹江醫學院學報,2010,31(2):49．

[8]王清,朱置營,張赤兵,等.金銀花提取物抗菌作用實驗研究[J].中國醫藥導刊,2008,10(9):1425-1430.

ComparativeStudyonthemainactiveingredientcontentofloniceraeflosfromDifferentProducingAreas

Liang shuang

Guangxi University of Chinese Medicine, Guangxi Province,Nanning 530001, China

Objective To compare the content of chlorogenic acid and luteolin glycosides in lonicerae flos from different origin. Methods Test samples have been extracted by ultrasonic, the content of main active ingredients from five origin has been measured by HPLC and chemical analysis. Results the content of chlorogenic acid in five origin: Hunan> Hebei> Shangdong > Henan> Hubei; the content of luteolin glycosides：Shandong> Henan> Hebei> Hubei> Hunan. Conclusion The content of chlorogenic acid and luteolin glycosides is different in different origin, the study provide an experimental basis on selecting flos lonicerae for different production purposes.

Flos lonicerae;chlorogenic acid;Luteolin glycosides;HPLC;Compare of content

R284

A

1007-8517(2014)09-0004-02

2014.03.12)