冠蓋藤對骨性關節炎大鼠細胞因子的影響

秦莉花 李 晟 鐘華美 陳曉陽 秦莉峰 吳艷飛 黃 寬

(湖南中醫藥大學藥學院，湖南 長沙 410208)

骨性關節炎(OA)是一個多病因、發病機制復雜的常見病， 臨床上尚缺乏有效的根治措施。常用的治療方法為服用非甾體消炎藥消炎止痛。非甾體消炎藥長期服用往往引起副作用，且療效不理想。民間用冠蓋藤治療OA，其療效顯著，課題組前期研究對冠蓋藤進行鑒定，屬于柔毛冠蓋藤〔1〕，但其具體機制尚未明確。本課題研究冠蓋藤水提液對大鼠血常規、白細胞介素(IL)1β、IL-6、腫瘤壞死因子(TNF)-α的影響。

1 材料與方法

1.1動物 健康SD大鼠，雄性，SPF級，體重180～220 g，由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供，動物合格證號：SCXK(湘)2009-0004。

1.2藥物 冠蓋藤在懷化市沅陵采集，經湖南中醫藥大學藥學院中藥鑒定教研室鑒定為柔毛冠蓋藤，制備成水煎液稱取冠蓋藤藥材1 500 g，分3次提取，最后濃縮成1 g生藥/6 ml的藥液，備用；雷公藤多甙片(上海復旦復華藥業有限公司，批號Z31020415)。以上藥物用時均由生理鹽水配成所需濃度。

1.3試劑及儀器 二甲苯(天津市大茂化學試劑廠，批號：20080921)。角叉菜膠(Sigma 公司，批號：45F-0427)；冰醋酸(濰坊潤潔化學有限公司)；弗氏完全佐劑F-5881(Sigma公司)；IL-1β、IL-6和TNF-α試劑盒(美國ADL公司)。其他試劑均為市售分析純。電子天平(德國Sartorius公司產品，型號：BP211D)；電熱三用水箱(北京市醫療設備廠)；TGL-16高速臺式離心機(江蘇大地自動化儀器廠)。

1.4OA模型的建立 取雄性SD大鼠60只，用微量注射器于左后足跖皮內注射弗氏完全佐劑0.1 ml致炎〔2～4〕。原發病變表現為致炎側的關節腫脹，致敏當天后即可出現；繼發病變一般于致炎后第12～18天出現，表現為非致炎側及雙前肢的關節腫脹。

1.5分組 造模成功后的50只SD大鼠隨機分為5組：模型組，雷公藤組，冠蓋藤高、中、低劑量組，每組10只。另外取10只健康SD大鼠作為正常組。造模后，雷公藤組給予雷公藤多甙片混懸液15.44 mg/kg；冠蓋藤低、中、高劑量組分別給予冠蓋藤水提取物2.31，4.62，9.24 g生藥/kg，正常組給予等容量蒸餾水。致炎當天，各組均采用灌胃方法給藥，1次/d，給藥時間28 d。

1.6血常規、細胞因子的檢測 治療28 d后用斷頭取血，取2份，1份置抗凝管中，由湖南中醫藥大學第一附屬醫院測定血常規。另1份靜置后離心，留取血清測定IL-1β、IL-6和TNF-α水平，根據試劑盒說明書進行檢測。檢測大鼠的血常規，血清中IL-1β、IL-6和TNF-α。

2 結 果

2.1冠蓋藤對OA大鼠模型血常規的影響 與正常組比較，模型組大鼠血液中的白細胞、粒細胞、淋巴細胞數明顯升高，兩者比較有顯著性差異(P<0.01)。與模型組比較，冠蓋藤低、中、高劑量組大鼠血液中白細胞、粒細胞和淋巴細胞數明顯降低，兩組比較有顯著性差異(P

表1 冠蓋藤對OA大鼠血常規的影響

2.2冠蓋藤對OA大鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α的影響 與正常組比較，造模后各組大鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α水平均顯著升高(P<0.01)；與模型組比較，冠蓋藤低、中、高劑量組大鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α水平均顯著降低(P<0.01)，且冠蓋藤高劑量組的抑制效果和雷公藤組相當，見表2。

表2 冠蓋藤水提取物對大鼠血清IL-1β、IL-6和TNF-α的影響

3 討 論

OA是由Garrod在1890年首先提出的，又名退行性關節炎、老年性關節炎、變性性關節炎等，是中老人群常見的一種退行性關節疾病，而且發病率和患病率較高，隨年齡的增長而升高〔5〕。OA的臨床表現主要為緩慢進展的關節疼痛、壓痛、僵硬、腫大伴活動受限，嚴重者可導致關節功能障礙甚至殘疾，嚴重降低了患者的生活能力和勞動能力，增加了家庭醫療費用，給家庭和社會帶來沉重的經濟負擔。1983年首先在人關節炎病變滑液中發現了IL-1，其中以IL-1β為主，而OA軟骨組織中、上層軟骨細胞及其基質均呈IL-1強陽性反應。IL-1主要由單核巨噬細胞分泌，亦可由軟骨細胞、滑膜細胞、單核巨噬細胞等產生，IL-1有IL-1a和IL-1β兩種亞型，其中IL-1β是IL-1的主要成分，是一種強力的致痛炎癥因子，在急、慢性炎癥時，會引發全身性癥狀如發熱，在局部則引起組織炎癥和破壞性病變。湯建平等〔6〕也研究發現OA發病與關節滑膜細胞增殖旺盛，分泌過多的IL-1并釋放入血有關。骨性關節炎發病機制和疼痛與關節滑膜細胞分泌過多的IL-6并釋放人血有關〔7〕。TNF是由單核巨噬細胞系統產生的一種肽類激素，是一種強有力的促炎癥細胞因子，是機體炎癥與免疫反應的重要調節因子，它除了抗腫瘤、致熱作用外，還能促進炎細胞黏附血管壁及游出血管外，刺激內皮細胞、巨噬細胞釋放IL-1、黏附分子等。TNF可協同白細胞介素等細胞因子共同構成炎癥介質〔8〕。近年來研究認為，細胞因子TNF-α和IL-6是參與OA發病進程中的重要介質，是炎癥反應的始動因素。臨床研究表明，膝OA患者體內中TNF-α、IL-1β、IL-6高于正常人水平，炎癥因子水平的升高在膝OA發病、發展扮演重要角色〔9～11〕。實驗結果顯示兔OA模型的血清IL-1β和TNF-α含量都升高〔12〕。課題組前期工作已研究證明冠蓋藤抗鎮痛作用，其機制尚未研究〔13〕。本實驗通過建立OA模型，檢測血常規、血清中細胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)的變化，研究冠蓋藤水提取物對OA的治療效果及其作用機制。本文提示冠蓋藤對弗氏完全佐劑引起大鼠血常規異常有治療作用，其抗炎鎮痛機制之一可能通過降低白細胞、中性粒細胞數，血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平，改善局部周圍微循環，減輕骨內壓，緩解疼痛。

4 參考文獻

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12符路娣.臭氧與藥物治療對兔骨性關節炎血清中IL-1β、TNF-α含量的影響〔J〕.中獸醫學雜志，2012；55(3)：6-8.

13秦莉花，鐘華美，陳曉陽，等.冠蓋藤抗炎鎮痛作用〔J〕.中國老年學雜志，2014；34(3)：429-31.