免疫組化染色的操作技巧和注意事項

王志生 李曉輝 任 飛 薛鳳艷 張國靜

免疫組化染色的操作技巧和注意事項

王志生 李曉輝 任 飛 薛鳳艷 張國靜

目的 本院對免疫組化染色過程中存在的問題及對策進行深入的探討以及仔細的分析。方法 自從2010年6月~2011年7月期間, 本院共收治免疫組化染色標本患者有200例, 對其中存在問題的60例患者標本進行了仔細的分析, 并且要提出科學的應對措施。結果 本院對疫組化染色過程提出了主要的積極應對措施和科學的建議。結論 對于每一個步驟以及環(huán)節(jié), 都會影響到染色的最終后果, 對此, 要盡量避免在染色過程中會出現(xiàn)一些問題, 會使免疫組化染色的質(zhì)量有所提高。

免疫組化；技術方法；質(zhì)量控制；抗原修復；原因分析

對于免疫組化(IHC)技術在上世紀的80年代之后, 在我國就迅速的開展, 至今已經(jīng)有20年快速發(fā)展的歷程, 現(xiàn)在已經(jīng)逐漸的成為病理科工作中主要的組成要素。綜合性操作技術主要是導致免疫組化, 這樣會使其反應步驟增加, 出現(xiàn)復雜的影響因素, 技術員在基礎技術上的操作要求是相對較高的, 對免疫組織學習要進行不斷的提高, 了解這種技術在病理診斷方面是主要的輔助方式, 在對疾病診斷、分析、預后以及指導臨床個體化治療等方面, 都有著主要的作用。在免疫組化的技術方面, 也存在著各種實質(zhì)性的問題, 收治免疫組化染色標本200例, 其中有60例標本存在著問題, 本院對其進行仔細的分析, 并且提出相應的科學對策治療方式。

1 免疫組化染色不理想的原因分析及改進措施

1.1 由于大分子的化學結構相對穩(wěn)定, 它在水中呈現(xiàn)膠狀體, 不易被機體破壞或排除, 這樣在體內(nèi)存留時間就很長,有利于持續(xù)刺激淋巴細胞。抗體是人體抵抗感染的一種重要武器, 抗體是人或動物受抗原物質(zhì)刺激后, 由漿細胞合成和分泌的一種特異性蛋白質(zhì), 并具有疏水性, 因此當對抗體進行稀釋時可降低它的疏水性, 當pH接近抗體的等電點時,抗體的疏水性能十分巨大。

1.2 抗體與抗原的交叉反應 抗原是一類能誘導免疫系統(tǒng)發(fā)生免疫應答, 并能與免疫應答的產(chǎn)物發(fā)生特異性結合的物質(zhì)；抗體是人或動物受抗原物質(zhì)刺激后, 由漿細胞合成和分泌的一種特異性蛋白質(zhì)。組織中其它蛋白質(zhì)存在相同的抗原,就能與抗體直接產(chǎn)生反應, 會有其它反應, 臨床由于多克隆抗體適應性強, 極容易有交叉反應單克隆抗體也能產(chǎn)生交叉反應, 所以對克隆抗體的應用必須謹慎, 使交叉反應降到最低。

1.3 抗原修復不足 對于固定的組織, 會導致抗原之間有相交的聯(lián)系, 是抗原決定簇被封閉, 對此, 要盡早的對抗原進行有效的修復。應根據(jù)需要進行選擇在修復時所用的方式,通常可以使用酶消化修復以及熱修復等方式。在使用微波修復還是高壓高溫進行修復, 熱修復都能達到有效的修復作為實驗的科學依據(jù)。

1.4 組織固定不恰當 當試驗的組織固定的位置是否正確時對試驗結果有很大影響, 它的好與壞與抗原的保存有直接關系；當固定不及時會出現(xiàn)組織自行溶解或者干硬變形, 一旦出現(xiàn)自溶就會造成抗原丟失, 而干硬就是蛋白質(zhì)變性的結果, 就會出現(xiàn)大量抗原性功能消失, 極易脫色即便染上也會是棕色的, 所以對體積的要求就更嚴格了。

2 IHC過程及注意事項

2.1 組織準備 對于IHC先決條件是進行良好的組織處理,組織固定要確保能夠做到最好, 包括對保存細胞以及組織的形態(tài)的結構, 并且在最大限度方面, 能夠保存其抗原的免疫活性值。這樣, 在組織和固定反方面必須進行即時、必要處理。

2.2 蠟塊選擇與切片質(zhì)量 對于脫水和包埋質(zhì)量好的蠟塊在選擇上, 能夠充分的保證蠟膜的完整、均勻程度。通常,切片的厚度要確保在3 μm之內(nèi), 對于出現(xiàn)過厚的切片會導致與載玻片的粘附性不牢固, 對于乳腺組織是人體中脂肪含量最多的部位之一, 在高溫和高壓的修復處理作用時, 容易產(chǎn)生脫片現(xiàn)象［1］。

2.3 抗原修復 在整個修復的過程中, 逐漸的減弱多聚賴氨酸分子和組織切片之間的有效結合力, 這樣, 修復是免疫組化最常出現(xiàn)的脫片現(xiàn)象。對于適當將修復液是非常重要的,可以選擇相對比較溫和藥物, 比如是枸櫞酸修復液等。

2.4 染色中應注意的一些細節(jié) 把孵育盒放置在一個比較平穩(wěn)的地方, 不要使抗體液流到組織的另一側, 這會使結果呈現(xiàn)假陰性反應；另外抗體孵育盒里面要留有適量的蒸餾水,但水不宜過多, 防止因水蒸汽在盒蓋聚成水滴, 掉落在切片上, 造成抗體稀釋；再有就是保持切片在整個染色過程中,一定要保持濕潤, 不要出現(xiàn)干片的現(xiàn)象。最后在加入抗體的時候, 要把組織上的水弄干, 避免抗體稀釋影響檢測結果。

3 結果

對于免疫組化染色過程, 提出了主要的應對措施以及科學合理的建議。

4 討論

因為人體的抗體和抗原之間的結合具有高度的特異性,而免疫組織化學正是通過這種原理。它先將組織或細胞中的某種化學物質(zhì)提取出來, 以此作為抗原或半抗原, 并通過免疫動物后獲得特異性的抗體, 在用抗體去檢測組織或細胞中的同類的抗原物質(zhì)。由于免疫組化技術是一個貌似單一的技術, 但其中千變?nèi)f化的環(huán)節(jié)卻很難掌握。只有在關鍵的地方達到標準化, 才能取得較好好的檢測結果。現(xiàn)在科技更新較快, 結合大量的臨床先進經(jīng)驗要求醫(yī)護人員熟練的掌握操作技能, 只有認真的規(guī)范和嚴格遵守各項標準, 才能讓免疫組化技術在臨床發(fā)揮更完善、更徹底、更好的為患者治療。

［1］ 李德本, 王濤, 姜駿.免疫組化染色的操作技巧和注意事項.臨床與實驗病理學雜志, 2011, 27(11):1260-1261.

2014-04-01］

130012 長春, 吉林省腫瘤醫(yī)院

李曉輝