膀胱癌組織中p53、血管內皮生長因子、環氧化酶-2和表皮生長因子受體的表達

孫玉朝

(內蒙古林業總醫院,內蒙古 牙克石 022150)

膀胱癌生物學行為的多變性與其基因改變密切相關，其中抑癌基因的失活比原癌基因的激活可能更具重要作用。本研究通過免疫組化方法檢測表皮生長因子受體(EGFR)、血管內皮生長因子(VEGF)、環氧化酶-2(COX-2)及p53在膀胱癌組織中的表達，探討其與臨床病理特征的相關性。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2011年1月至2012年1月收治入院的經手術切除的初發性膀胱癌石蠟標本48例，所有患者病理標本均經病理檢查確診。其中男33例，女15例；年齡33～79〔平均(58.6±4.2)〕歲，其中病理分級(WHO/ISUP，1998)：Ⅰ級(G1)8例，Ⅱ級(G2)24例，Ⅲ級(G3)16例。按國際抗癌協會(UICC-TNM)診斷進行病理分期：表淺癌Ta，Tis～T1 19例，浸潤癌T2～T4 29例。所有入造病例術前均未經放療、化療及免疫治療。

1.2檢測方法 所有標本均作5 μm厚的連續組織切片，分別進行蘇木精-伊紅、免疫組織化學染色。采用免疫組化SP法，采用Santa Cruz Biotech公司生產的VEGF鼠抗人單克隆抗體和COX-2鼠抗人單克隆抗體，美國Zymed公司生產的EGFR鼠抗人單克隆抗體和p53鼠抗人單克隆抗體。具體操作步驟按試劑盒說明書進行。

1.3判定標準 以細胞胞質和核膜出現黃色或棕黃色為陽性染色，陽性細胞占腫瘤細胞數<10%為陰性表達(-)，著色腫瘤細胞數≥10%為陽性表達。10%～25%陽性細胞數為(+)，26%～50%陽性細胞數為()，>51%陽性細胞數為()。連續觀察5個高倍視野，各計數100個細胞，以平均數作最后判定。

1.4統計學方法 用SPSS17.0統計軟件包進行Spearman秩和檢驗。

2 結 果

EGFR、VEGF、COX-2、p53的表達與性別、年齡、腫瘤直徑、病理分級無顯著相關性(P>0.05)；EGFR、VEGF、COX-2、p53的表達與分化程度、淋巴結轉移、脈管侵犯、臨床分期有顯著相關性(P<0.05)；見表1。膀胱癌組織中p53的表達強度與EGFR、VEGF、COX-2的表達強度呈正相關(r=0.205，P=0.020；r=0.278，P=0.001；r=0.218，P=0.004)；COX-2表達強度與EGFR、VEGF的表達強度呈正相關(r=0.395，P=0.001；r=0.198，P=0.016)。

表1 膀胱癌組織中EGFR、VEGF、COX-2、p53陽性表達率和臨床病理學特征的相關性〔n(%)〕

3 討 論

膀胱癌是泌尿系統最常見的一種惡性腫瘤，極易復發，其生物學行為與腫瘤細胞分化程度密切相關〔1，2〕。細胞增殖在從發育到修復損傷組織等許多生理過程中起重要作用。多種機制參與細胞增殖的嚴謹調節。例如，原癌基因的活性可通過腫瘤抑制因子的作用來平衡；DNA損傷與修復的存在降低了基因突變和細胞惡性轉化的風險；免疫系統可以識別并清除癌癥細胞。穩態調控機制的持續性被破壞必然導致細胞增殖過度從而形成癌癥。本研究結果提示EGFR、VEGF、COX-2、p53與膀胱癌分化程度、淋巴結轉移、脈管侵犯、臨床分期密切相關，可作為臨床判斷轉移及預后等生物學行為的重要參考指標。

p53腫瘤抑制蛋白是一個多功能的轉錄因子，它調控了影響增殖、細胞周期檢查點和凋亡的細胞過程。MDM2的結合通過靶定p53從而降解，且抑制p53誘導的細胞周期阻滯和凋亡，從而調節p53的活性。為響應基因毒性應激信號或DNA損傷，p53被磷酸化，并在細胞核內積累。p53可導致細胞周期阻滯，從而允許DNA損傷修復，如果損壞無法修復，則致使細胞發生凋亡。此外，研究已表明p53可不依賴其活性，作為一個轉錄因子來引發凋亡通路〔3，4〕。p53抑癌基因是生物體內一種抑制細胞轉變癌細胞的基因。人類p53基因定位于17號染色體p13，全長16～20 kb，含有11個外顯子，轉錄2.8 kb的mRNA，編碼蛋白質為p53，是一種核內磷酸化蛋白。p53是迄今為止發現的與人類腫瘤相關性最高的基因。過去一直把它當成一種癌基因，直至1989年才知道起癌基因作用的是突變的p53，后來證實野生型p53是一種抑癌基因。在所有惡性腫瘤中，50%以上會出現該基因的突變。細胞中本來就有致癌基因及抑癌基因的存在，只要一方產生病變而失去平衡，癌癥就可能會發生。環氧化酶(COX)是一種雙功能酶，具有環氧化酶和過氧化氫酶活性，是催化花生四烯酸轉化為前列腺素的關鍵酶。目前發現環氧化酶有兩種COX-1和COX-2同工酶，前者為結構型，主要存在于血管、胃、腎等組織中，參與血管舒縮、血小板聚集、胃黏膜血流、胃黏液分泌及腎功能等的調節，其功能與保護胃腸黏膜、調節血小板聚集、調節外周血管的阻力和調節腎血流量分布有。后者為誘導型，各種損傷性化學、物理和生物因子激活磷脂酶A2水解細胞膜磷脂，生成花生四烯酸，后者經COX-2催化加氧生成前列腺素。COX-2是一種膜結合蛋白。在巨噬細胞、成纖維細胞、內皮細胞和單核細胞中COX-2均可被誘導表達。生理狀態下絕大部分組織細胞不表達COX-2；而在炎癥、腫瘤等病理狀態下受炎性刺激物、損傷、有絲分裂原和致癌物質等促炎介質誘導后，呈表達增高趨勢，參與多種病理生理過程，具體是細胞膜磷脂通過磷脂酶A2途徑被水解釋放出花生四烯酸，在COX-2的催化下，合成前列腺素E2(PGE2)，最后產生系列炎癥介質，并通過瀑布式級聯反應參與機體各生理、病理過程。EGFR是一種具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白，為erbB(HER)家族中4個成員之一，因而又被稱為 erbB1/HER1，這一家族另外3個成員分別為erbB2/HER2、erbB3/HER3、erbB4/HER4成熟的人類EGFR由1 186個氨基酸殘基構成，其結構包括1個胞外配體結合區、1個單α螺旋結構的跨膜區和1個包含酪氨酸激酶域的胞內區。EGFR基因突變的類型人類EGFR基因位于染色體7p11.2，大小約200 kb，包含28個外顯子，其中外顯子18～24編碼受體酪氨酸激酶功能區〔5，6〕。對EGFR突變患者首選Gefitinib、Erlotinib靶向治療〔7〕。VEGF是一種可以強烈誘導血管生長的因子。產生VEGF的細胞主要是腫瘤細胞，垂體濾泡星形細胞也產生VEGF。VEGF與受體結合后，通過一系列信號傳導機制而致血管內皮細胞分裂增殖，同時增加血管內皮細胞的通透性〔8〕。腫瘤細胞在低氧情況下可以分泌VEGF。VEGF的表達水平和腫瘤內的血管生長情況呈正相關，并且和腫瘤的轉移風險呈正相關〔9〕。VEGF可以促進內皮細胞增殖和細胞遷移，并抑制細胞凋亡，抑制VEGF信號轉導可以抑制多種腫瘤的發生和發展〔10〕。VEGF在膀胱癌中高表達，對膀胱癌新生血管形成及腫瘤生長和轉移起重要作用。一般認為在膀胱癌組織中VEGF的表達與性別、年齡及腫瘤分期無明顯相關，與本研究結果相同。

4 參考文獻

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