外周血腫瘤細胞CK20表達與結直腸癌患者術后復發和轉移的關系

王大巍 孫立輝 金長凱 孫 奔 樊 毅

(遼寧醫學院附屬第三醫院普外二科，遼寧 錦州 121000)

結直腸癌以高復發和高轉移為特點〔1〕，患者能否得到準確預測仍然是目前面臨的問題，對指導治療和評價疾病轉歸具有重要意義〔2，3〕。外周血循環腫瘤細胞可能是導致腫瘤復發、轉移及死亡的重要原因〔4〕。本研究以CK20作為外周血循環腫瘤細胞Cellular FACTT檢測標志物，探討外周血循環腫瘤細胞與根治術后結直腸癌患者復發和轉移的關系。

1 資料和方法

1.1一般資料 收集2010年6月至2011年5月遼寧醫學院附屬第一醫院、遼寧醫學院附屬第三醫院、錦州市中心醫院和解放軍第二零五醫院同期211例結直腸癌患者，術前有全面體格檢查、腹盆部CT、腹部超聲及腸鏡檢查等，術前抽血均獲本人或其家屬同意。入組標準：均行結直腸癌根治術，并經術后病理明確診斷；病理證實為外科R0切除；術前未行放化療等輔助治療。排除標準：無法按AJCC標準進行pTNM分期；伴發第二種腫瘤；多原發結直腸癌；術前評估為無法根治性切除；隨訪證實為吻合口原位復發者；伴有嚴重心腦血管或肝腎疾病不能耐受輔助治療者。男115例，女96例，平均年齡(60.9±8.7)歲；直腸癌127例，結腸癌84例；大體形態：隆起型123例，潰瘍型88例；分化程度：高分化109例，中分化70例，低分化32例；有區域淋巴結轉移99例，無淋巴結轉移112例；有遠處肝轉移29例，無遠處肝轉移182例；臨床分期Ⅰ期81例，Ⅱ期67例，Ⅲ期33例，Ⅳ期30例。所有患者KPS評分均在60～80分。

1.2治療和隨訪 全組納入研究者均接受根治性手術切除惡性腫瘤。術后根據病理臨床分期，分別給予化療和未化療55例和156例，并在手術治療后每3個月復查腹部超聲和胸片，每6個月或1年復查結腸鏡和腹盆部CT，以明確有無術后腫瘤復發或轉移。本研究生存期自確診之日計算至患者死亡或末次隨訪，并將患者出現的腫瘤復發或轉移，以及因復發轉移引起的死亡作為隨訪終點事件，而患者死于其他疾病或至隨訪終止存活者定義為“截尾數據”，分析患者無瘤生存情況。

1.3外周血腫瘤細胞CK20檢測方法 術前1 d抽取患者晨起空腹肘前外周靜脈血5 ml作為檢測樣品，依照文獻〔5〕方法進行。Cellular FACTT檢測CK20循環腫瘤細胞方法：將備測樣本以1 000 r/min離心后棄上清，加入50 μl生物素化的抗體，37℃靜置約1 h后再加入50 μl的親和素工作液，22℃靜置約l h后加入50 μl生物素化的DNA，22℃靜置約1 h后再加50 μl NTP工作液，37℃靜置約3 h后上機檢測。

1.4統計學分析 采用SPSS11.5軟件進行t和χ2檢驗，Kaplan-Meier法計算無瘤生存率、繪制生存曲線，生存率比較采用Log-rank檢驗，采用多因素Cox風險模型進行多因素預后歸因分析。

2 結 果

2.1外周血CK20陽性檢出與臨床病理特征的關系 211例結直腸癌患者外周血循環腫瘤細胞CK20陽性率為59.2%(125/211)，其陽性檢出與腫瘤TNM分期及遠處肝轉移相關(P<0.001)，見表1。

表1 外周血循環腫瘤細胞CK20陽性檢出與臨床病理特征的關系(n)

2.2外周血CK20陽性檢出與無瘤生存的關系 本研究全部211例患者均獲完整隨訪，無失訪出現，隨訪率100%。隨訪至1年末，分別有11例(5.2%)患者出現局部復發或遠處轉移，無腫瘤相關死亡病例出現，其中遠處轉移4例(肝轉移3例，腹盆部轉移1例)，且復發和轉移均發生在陽性檢出患者中，陽性檢出患者1年無瘤生存期短于陰性者(P>0.05)。3年術后復發或轉移率為18.5%(39/211)，其中陽性檢出患者術后復發或轉移率為28.8%(36/125)，明顯高于陰性檢出者的3.5%(3/86)，且陽性檢出患者3年無瘤生存期為(29.1±1.1)個月，明顯短于陰性檢出者的(35.1±0.5)個月(P<0.001)。見圖1。

圖1 外周血CK20陽性和陰性檢出患者的無瘤生存情況比較

2.3多因素Cox風險模型歸因分析無瘤生存影響因素 年齡、性別、腫瘤部位、大體形態、分化程度、區域淋巴結轉移、肝轉移和臨床分期均未發現與3年無瘤生存有顯著相關性(P>0.05)，而外周血循環腫瘤細胞CK20檢出情況與3年預后呈負相關，陽性檢出為患者3年不良預后的高危因素，見表2。

表2 多因素Cox風險模型歸因分析3年不良預后影響因素

3 討 論

結直腸癌是我國惡性腫瘤中發病率和死亡率均較高的腫瘤，常見復發和轉移〔6〕。目前認為，存在于腫瘤患者體內的血液、淋巴液和骨髓等體液中的循環腫瘤細胞對揭示腫瘤分期和預后等具有重要臨床價值〔7〕。FACTT作為一項新興的檢測技術，能明顯提高檢出敏感性和特異性，可用于檢測腫瘤患者體內游離腫瘤細胞〔5〕。Tsouma等〔8〕報道CK20外周血檢出率高達78.4%，所以本研究以CK20作為循環腫瘤細胞標志物。目前也有其他研究報道了其與淋巴結轉移、肝轉移和Dukes分期的相關性〔9〕，提示結直腸癌患者循環腫瘤細胞CK20陽性檢出可能影響患者術后復發和轉移等預后。本文提示CK20陽性檢出可能是結直腸癌患者不良預后的重要預測因素，對預測結直腸癌患者預后具有一定的臨床意義。

4 參考文獻

1萬德森. 我國結直腸癌的流行趨勢及對策〔J〕.中華腫瘤雜志, 2011;33(7): 481-3.

2宋寶榮, 王人杰, 王銘河, 等. 結直腸癌患者根治術前血清CEA和CA19-9表達水平對預后的預測價值〔J〕. 中華結直腸疾病電子雜志,2012;1(2): 13-7.

3李 軍, 陳建中, 孫保軍, 等. 結直腸癌分子生物學特征及臨床特征與預后的關系〔J〕. 中國普通外科雜志,2008;17(4): 336-9.

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5Zhang H, Cheng X, Richter M,etal. A sensitive and high-throughput assay to detect low-abundance proteins in serum〔J〕. Nat Med,2006;12(4):473-7.

6羅勝蘭, 胡如英, 龔巍巍, 等. 浙江省2005-2010年結直腸癌生存率分析〔J〕. 中華流行病學雜志, 2013;34(12): 1194-7.

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