人參與北五味子配伍前后的抗氧化及促智作用

孫靖輝 李 賀 賈 皓 孫紅霞 張成義 陳建光 王春梅

(北華大學藥學院，吉林 吉林 132013)

人參是五加科植物人參的根莖，是我國傳統的中藥材，有“百草之王”的美譽，具有廣泛的藥理學作用，主要活性成分是人參皂苷〔1〕。北五味子系木蘭科植物五味子的成熟果實，其活性成分主要包括揮發油、多糖和木脂素等〔2〕。現代藥理學研究表明人參和北五味子均具有提高免疫力、抗氧化、抗衰老等作用〔3～5〕，且二者為常用的傳統中藥配伍〔6〕。本實驗通過觀察人參水提液、北五味子水提液和北五味子人參共煎劑對D-半乳糖衰老模型小鼠腦內超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和膽堿酯酶(AchE)的影響及Morris水迷宮和避暗實驗中行為學的作用，探討并比較了北五味子和人參配伍前后的抗氧化與促智作用。

1 材料與器材

1.1動物 昆明小鼠，體重(20±2)g，雌雄各半，長春高新醫學動物實驗研究中心提供，合格證：SCXK(吉)2012-2013。

1.2藥物與試劑 人參(4年參)購自吉林撫松；北五味子購自吉林長春； D-半乳糖由北京鼎國昌盛生物技術有限責任公司提供；SOD、MDA和AchE試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。

1.3實驗儀器 Morris水迷宮(MT-200)、小鼠避暗儀(BA-200)由成都泰盟科技有限公司制造；酶標儀(Multiskan FC)由賽默飛世爾公司制造。

1.4方法

1.4.1藥物的制備 人參水提液的制備：人參粉碎后過六號篩，水浸泡0.5 h，100℃水煎2 h，4 000 r/min離心取上清液，再次加水100℃水煎2 h，離心取上清液，合并兩次上清液，定容為30 mg生藥/ml的人參水溶液。

北五味子水提液的制備：北五味子粉碎后過五號篩，水浸泡0.5 h，提取方法同上。

人參與北五味子共煎劑的制備：人參粉碎后過六號篩，北五味子粉碎后過五號篩，二者干粉1∶1合并后水浸泡0.5 h，提取方法同上。

1.4.2Morris水迷宮試驗 昆明種小鼠經水迷宮檢測去掉先天愚型和超聰明型等不符合條件的小鼠，將篩選出的符合實驗要求的60 只小鼠進行稱重排序，采用隨機數字表法將其平均分為5組，即空白組、模型組、人參組、北五味子組和人參+北五味子(G+S)組，自由飲食飲水。

模型制造：將D-半乳糖用生理鹽水配制成15 mg/ml的注射液，給予模型組、人參組、北五味子組和G+S組頸背部皮下注射，1次/d，給藥劑量為1.5 mg/10 g；空白組同法給予等劑量生理鹽水。以上給藥周期均為6 w。

從第7周開始，進行口服灌胃給藥，人參組給予人參水提液，北五味子組給予北五味子水提液，G+S組給予人參北五味子共煎劑，灌胃劑量為7 mg/10 g，1次/d；空白組和模型組均給予同等劑量的蒸餾水灌胃，連續給藥15 d。給藥結束后，進行時間為90 s的定位航行試驗和空間探索試驗。試驗結束后，小鼠斷頭處死，取腦后冰浴勻漿、離心，取上清液進行MDA含量、SOD和AchE活性測定。

1.4.3避暗試驗 昆明種小鼠經避暗檢測去掉先天愚型和超聰明型等不符合條件的小鼠，將篩選出的符合實驗要求的60 只小鼠進行稱重排序，分組、造模和給藥方法同上。末次給藥后進行避暗測試，記錄小鼠學習階段的錯誤次數，第2天進行記憶能力試驗，測試記憶階段的避暗潛伏期和錯誤次數。

2 結 果

2.1Morris 水迷宮 與模型組相比較，人參組、北五味子組和G+S組均能夠明顯縮短D-半乳糖衰老模型小鼠在Morris水迷宮定位航行試驗中的潛伏期和搜索路程；空間探索試驗結果也表明人參組、北五味子組和G+S組的穿越平臺次數和跨越目標象限時間占總游泳時間百分比較模型組有顯著的提升。在人參組、北五味子組和G+S組的三者組間比較結果來看，G+S組在定位航行試驗中的潛伏期和搜索路程要明顯的優于人參組和北五味子組，而空間探索實驗則三組間無明顯差別。見表1。

2.2避暗試驗 人參組、北五味子組和G+S組在學習階段的錯誤次數要明顯少于模型組，而且記憶測試階段的潛伏期和錯誤次數也要明顯的優于模型組。人參組、北五味子組和G+S組的三組組間比較結果顯示，G+S組在學習階段的成績明顯優于人參組和北五味子組，而記憶測試階段的成績三組間的比較結果并無統計學意義。見表2。

2.3腦內MDA含量、SOD和AchE活性 人參組、北五味子組和G+S組動物腦內SOD活性均明顯高于模型組，而MDA含量與AchE活性明顯低于模型組。人參組、北五味子組和G+S組的三組組間比較結果顯示，G+S組動物腦內SOD活性要高于人參組和北五味子組，而MDA含量要低于人參組和北五味子組，三組間AchE活性并無明顯差異，但G+S組較人參組和北五味子組有明顯的降低趨勢。見表3。

表1 各組對衰老模型小鼠Morris水迷宮中的實驗結果±s,n=12)

表2 各組對衰老模型小鼠避暗實驗學習和記憶能力的影響±s,n=12)

表3 各組對衰老模型小鼠腦內MDA含量、SOD和AchE活性的影響±s,n=12)

3 討 論

在中藥復方的研究中，人參與北五味子是常見的傳統配伍。有研究表明，當北五味子與人參配伍水煎后，北五味子中的酸性成分會使溶液的pH值下降而導致人參皂苷的糖鏈斷裂和轉化，人參皂苷可由分子量較大的皂苷轉化為分子量較小的次級皂苷或生物活性更強的稀有皂苷〔6〕。而根據人參皂苷的“前藥”理論和相關報道，這種次生皂苷無論是在體內的吸收還是藥理活性的表現均要優于其皂苷前體〔7〕。在黃鑫等〔8〕的研究中，將北五味子與人參按不同比例進行配伍水煎，發現與單煎劑相比，北五味子中的主要有效成分五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素含量均有不同程度的增加。

D-半乳糖致衰老方法是目前最為常用的亞急性衰老動物模型，注射后所導致的糖代謝紊亂可引起全身各組織器官的功能衰退，其中學習記憶能力下降、SOD活性降低和MDA含量升高等與衰老動物的表現相一致〔9～11〕。本實驗的研究結果表明，與人參、北五味子的單煎水提液相比，人參北五味子共煎劑具有更加明顯的提高衰老模型動物抗脂質過氧化和清除氧自由基的作用，同時AchE的活性測定結果顯示出人參北五味子共煎劑能顯著抑制腦內AchE的活性，提高乙酰膽堿的作用，而增加老年動物的學習記憶能力，Morris水迷宮和避暗實驗也分別從不同角度證實了這一作用，值得注意的是，從行為學的實驗結果來看，人參北五味子共煎劑所產生出的促智作用主要體現在短期學習能力的提高，而對記憶能力的改善作用與人參和北五味子的單煎劑無明顯差別，這一現象也需要進一步的實驗進行探討。

4 參考文獻

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