腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體聯(lián)合順鉑抑制膠質(zhì)母細胞瘤神經(jīng)球生長的作用

閆振坤 王立波 宋玉梅 劉曉陽 齊 玲

(吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院，吉林 長春 130033)

腫瘤生物學研究發(fā)現(xiàn)，腦腫瘤中存在的腫瘤干細胞(TSCs)是腫瘤發(fā)生及耐藥的根源〔1～3〕。腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)作為臨床腫瘤新藥已進入Ⅱ期研究階段，順鉑(CIS)是常規(guī)化療藥物之一。本文擬研究TRAIL和CIS這兩種藥物對人腦膠質(zhì)母細胞瘤SC326神經(jīng)球細胞生長的作用。

1 材料與方法

1.1細胞和主要試劑 SC326神經(jīng)球(吉林醫(yī)藥學院干細胞實驗室提供)。CIS、MTS試劑盒(美國Sigma公司)；神經(jīng)培養(yǎng)基、B27添加物(美國Gibco公司)，人堿性成纖維生長因子(bFGF)和人表皮生長因子(EGF)(英國Pepro Tech公司)。

1.2神經(jīng)球培養(yǎng)〔4，5〕將神經(jīng)球細胞接種于干細胞培養(yǎng)液(SCM，包括神經(jīng)培養(yǎng)基、B27添加物、20 μg/L EGF和bFGF)中進行培養(yǎng)，每3～5 d離心換液一次，按1∶2比例傳代。

1.3TRAIL和順鉑對神經(jīng)球細胞生長的作用 神經(jīng)球細胞機械分離成單細胞懸液，以每孔100 μl SCM含5 000個細胞接種于96孔板中，置入37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。實驗設(shè)為空白對照組、TRAIL組(300 mg/L)、CIS組(10 mg/L)和聯(lián)合用藥組(TRAIL 300 mg/L+CIS 10 mg/L)，每組5個復(fù)孔，作用3 h后，每孔加入MTS 20 μl繼續(xù)孵育2 h，加入10%十二烷基硫酸鈉(SDS)溶液終止反應(yīng)。酶標儀490 nm處測定各孔光吸收值。計算細胞死亡率。倒置顯微鏡下觀察SC326神經(jīng)球形成情況。

2 結(jié) 果

2.1藥物作用后神經(jīng)球細胞的死亡率 TRAIL和CIS組SC326神經(jīng)球細胞死亡率分別是(24.43±2.06)%和(22.02±2.58)%；兩者聯(lián)合作用后明顯增加到(52.32±4.35)%。

2.2藥物作用后神經(jīng)球形成觀察 見圖1。TRAIL和順鉑均可以抑制神經(jīng)球的形成，兩者聯(lián)合抑制作用更明顯。

空白對照組 聯(lián)合用藥組

3 討 論

腦腫瘤發(fā)生在顱內(nèi)，以惡性居多，其中以膠質(zhì)母細胞瘤惡性度最高，現(xiàn)今無有效的治療方式。包括手術(shù)、放療、化療和替莫唑胺在內(nèi)的多種療法對患者生存期的延長意義不大〔6〕。這是因為腫瘤中存在腦TSCs(BTSCs)，它是腫瘤發(fā)生、復(fù)發(fā)以及放化療抵抗等的原因。在干細胞培養(yǎng)液中，BTSCs是以神經(jīng)球的方式進行生長，傳代后仍保持這種特性〔7～9〕。本文結(jié)果說明，TRAIL和CIS對神經(jīng)球細胞均有一定的殺傷作用，并且可以抑制神經(jīng)球的形成，兩者聯(lián)合后可以發(fā)揮藥物協(xié)同作用。但TRAIL和CIS殺死神經(jīng)球細胞及抑制神經(jīng)球形成的原因及機制還有待后續(xù)實驗。

4 參考文獻

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